实验试卷07-08(上)A(参考答案).doc

课程名称： 生物化学与分子生物学实验 考试时间： 120分钟 生物信息 专业 年级 班 学号 姓名 题号一二三四五六七八九十总得分得分评卷人签字复核人签字得分一、填空题（每空1分，共25）1、移液管使用中，调整液面时， 视线 、 液面 、和标线均应在同一水平面上。2、凝胶电泳根据支持物不同主要有 聚丙烯酰胺凝胶电泳 和 琼脂糖凝胶电泳 。3、SDS-PAGE中样品缓冲液包括 溴酚兰 ， SDS ，甘油， 巯基乙醇 ，Tris-HCl缓冲液这些成分。4、SDS-PAGE实验中的5电极缓冲液中5表示 5倍浓度 。5、用苯酚提取酵母细胞的实验中， RNA 溶于上层水溶液中， DNA 和蛋白质在酚层。6、含有核糖的RNA与浓盐酸及3，5二羟甲苯在沸水浴中加热后，会产生 绿 色复合物。含有脱氧核糖的DNA在酸性条件下，和 二苯胺 作用产生和 蓝 色物质。6、DNA电泳检测时，上样缓冲液中蔗糖的作用是 沉淀DNA ； 溴酚蓝的作用是 指示剂 。7、在碱性裂解法提取质粒中，溶液溶液III的主要成分有 醋酸钾 、 醋酸 。8、PCR加样中使用的dNTP是 ATP 、 CTP 、 GTP 和 TTP 的混合物。9、在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是_螯合镁离子从而抑制DNA酶的作用_10、DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素很多，主要有 核酸酶降解 、 化学降解 、 物理剪切 。得分二、名词解释（每小题2分，共10分1、离心：将悬浮于溶剂中的样品装入离心管中，施加一定的离心力，样品中各溶质颗粒由于大小、形状和密度的差异而彼此分离。2、核酸变性：指双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规则线团的过程。3、模板DNA：DNA复制过程中起模板作用的亲代DNA4、DNA 聚合酶：合成子代DNA 链(在DNA 模板的指导下)的酶。可能在修复或复制中涉及。5、退火：变性核酸的互补链在适当条件下重新形成双螺旋的过程得分三、单项选择题（每空1分，共15分）1、用紫外吸收法测定核酸的含量的原理是核酸、核苷酸及其衍生物能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在（ E ）纳米波长处。可以用（ F ）/（ G ）的比值来判断核酸的纯度，纯净的RNA溶液，该值（ A ）；纯净的DNA溶液，该值（ B ）。A、2 B、1.8 C、RNA D、DNA E、260 F、A260 G、A280 2、某一蛋白质在pH为5.0时，在电场中向阳极移动，其pI（ C ）A、等于5.0 B、大于5.0 C、小于5.0 D、无法确定3、植物总DNA提取中，能够作为细胞破壁的试剂是？（ B ） A、SDS B、CTAB C、乙二醇 D、NaOH4、在提取核酸的过程添加氯仿的目的是？（ C ） A、使细胞破裂 B、使核酸变性 C、去除杂质蛋白 D、沉淀核酸5、在碱性裂解法提取质粒中，由于溶液I中含有以下哪种物质，因此高压灭菌需要注意？（ C ） A、酪蛋白 B、酵母粉 C、蔗糖 D、葡萄糖6、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列哪种效应？（ A ）A、浓缩效应 B、电荷效应 C、 分子筛效应 D、 黏度效应7、从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是（B）A、抑制核酸酶的活性 B、保护DNA，防止断裂 C、加速蛋白质变性 D、有利于细胞破碎8、变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是（A）A、氧化物可使DNA的磷酸二酯键断裂B、氧化物同DNA形成复合物 C、氧化物会改变pH值 D、氧化物在DNA分离后不易除去9、在分离DNA时，异戊醇的作用是（D）A、使蛋白质脱水B、使DNA脱水C、帮助DNA进入水相D、减少气泡，促进分相10、以下那个不是影响有机溶剂沉淀的因素 （ D ）A、温度 B、样品浓度 C、pH值 D、气泡11、离心时常用相对离心力表示，相对离心力指的是 （ B ）A、rpm B、g C、RCF D、rpm/min得分四、判断题（每小题1分，共10分）1、离心时，在转速一定的条件下，颗粒距离心轴越远，其所受的离心力越大。 （ ）2、移液器使用完毕要将量程调至最小，以保证弹簧的使用寿命。 （ ） 3、有机溶剂沉淀中的操作温度应在37下进行。 （ ）4、SDS-PAGE的凝胶脱色是以能够看见谱带即为脱色完全。 （ ）5、植物总DNA提取时选择的植物材料来源不影响提取的效果。 （ ）6、由于核酸在pH8.0的条件下带负电，因此琼脂糖电泳上样的位置在负极。 （ ）7、电泳检测经过处理的质粒时，如果有4条条带，说明有4种不同的质粒。 （ ）8、提取植物总DNA中，离心操作没有在低温环境进行会影响实验的结果。 （ ）9、所有大肠杆菌菌株都可以在含有氨苄青霉素的培养基上生长。 （ ）10、在碱性裂解法提取质粒中，NaOH的作用是细胞破壁。 （ ）得分三、简答题（每小题5分，共40分）1、盐析与盐溶分别是什么？其原理是什么？答：在低盐浓度的情况下，蛋白质的溶解度随盐浓度的升高而增加，该现象称为盐溶（2分）。 而在盐浓度升高到一定浓度后，蛋白质的溶解度又升高而降低（1分）。机理：破坏蛋白质的水化膜，中和表面的净电荷（2分）。2、为什么SDS-凝胶电泳会不受蛋白质分子所带电荷及分子形状的影响？答：SDS是一种阴离子型去污剂，在蛋白质溶解液中加入SDS和巯基乙醇后，巯基乙醇可使蛋白质分子中的二硫键还原（2分）。SDS能使蛋白质的非共价键（氢键、疏水键）打开，并结合带蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质SDS的结合比为1.4g SDS/g蛋白质），形成蛋白质-SDS复合物。由于SDS带有大量负电荷，当它与蛋白质结合时，所带的负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差异（1.5分）。SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒。不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，而长轴则随蛋白质相对分子质量的大小成正比的变化。这样的蛋白质。SDS复合物在凝胶中迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度，也就是蛋白质相对分子质量的函数（1.5分）。3、简述PCR反应的原理答：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物（2分）。PCR由变性退火延伸三个基本反应步骤构成，复制链重复循环变性退火延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板（2）分）。每完成一个循环需要24分钟，23小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍（1分）。4、SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂，它在这里的主要作用是什么？答：（1）溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂（1.5分）；（2）溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来（1分）；（3）对RNase、DNase有一定的抑制作用；（1分）（4）SDS能够与蛋白质结合形成R-O-SO3-R-蛋白复合物，使蛋白质变性沉淀（1.5分）。5、设计一个20L的PCR反应加样体系。答：PCRbuffer(Mg2+) 2.0ul, dNTPs 0.5 ul, 上游引物1.0 ul，下游引物1.0ulTaq酶0.2ul, 模板DNA1.0 ul，ddH2O 14.3ul.6、简述利用碱裂法提取质粒的主要原理？答：十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。用SDS处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA和染色体DNA，两种DNA在强碱环境都会变性（2分）。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分离，却仍然缠绕在一起不分开；但后者完全变性分甚至出现断裂，因此，当加入pH4.8的酸性乙酸钾降低溶液pH值，使溶液pH值恢复较低的近中性水平时， 质粒的两条小分子单链可迅速复性恢复双链结构，但是主染色体DNA则难以复性（2分）。在离心时，大部分主染色体与细胞碎片，杂质等缠绕一起被沉淀，而可溶性的质粒DNA留在上清夜中。再由异丙醇沉淀、乙醇洗涤，可得到纯化的质粒DNA（1分）。7、请写出5条本实验课程中的注意事项。普通离心机的使用注意事项：(1).离心机要置水平位置,以保证旋转轴垂直地球水平面。(2).使用前应检查套环是否平衡(台称)。(3).离心杯及其外套(离心管套)是否平衡(台称)。(4).样品倾入离心杯后应与离心管套一起两两平衡，平衡后把它们放置于转子的对称位置。(5).盖好盖子,打开电源开关,调整离心时间。(6).启动离心时转速应由小至大,缓慢升速(一般要23min)。(8).离心完成后要调整调速连杆至零位,同时关上电源。(9).要等到转速为零时才能打开离心机盖,取出样品。可见分光光度计的使用注意事项：（1） 使用过程中比色皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比色皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面。比色皿应该避免磨损透光面。（2） 使用过程中不得打开盖子，保持仪器清洁,为避免溶液