酸樱桃组织培养及快速繁殖技术研究.doc

酸樱桃组织培养及快速繁殖技术研究第5卷第4期2004年8月北华大学(自然科学版)JOURNALOFBEIHUAUNIXTERSITY(NaturalScience)Vo1.5NO.4Aug.2004文章编号:10094822(2004)04035503酸樱桃组织培养及快速繁殖技术研究唐晓杰,盂庆繁,杨振国,高文韬(北华大学林学院,吉林吉林132013)摘要:以芽苞,茎尖和茎段为外植体,在MS培养基中加入不同浓度的6一苄基腺嘌呤(6一BA),萘乙酸(NAA),吲哚丁酸(IBA),对酸樱桃(PrunusCerasus)进行了组织培养快速繁殖技术的研究,结果表明:以MS+6-BA2.0mg/L+IBA0,1mg/L为酸樱桃最适宜增殖培养基,增殖率为45倍.壮苗培养基为不加激素MS培养基,适合诱导生根的培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L,生根率为93%,以蛭石+珍珠岩体积比1:2为培养基的组培苗移栽成活率最高,达到86%以上.关键词:酸樱桃;组织培养;快速繁殖中图分类号:s722.37文献标识码:A酸樱桃(Prunuscerasus)是蔷薇科(Rosaceae)李属经济树木,为灌木或小乔木,高47ITI,冠幅46Fn.36a生开始结果,果簇生,每簇14枚,核果鲜红色至暗红色,果径1020ITffn.果实成熟期较早,产量较高,成熟的果园大约每hm2产量为7.522,5t.710a进入盛果期,可持续1520a.酸樱桃原产于亚洲西部及黑海沿岸,其栽培品种主要分布在欧洲和北美洲.酸樱桃生态适应性较广,能耐一定干旱(降水量不小于500700mm),较耐寒冷(能耐一45低温,但对春霜敏感),对土壤要求不严,最适宜在土层深厚,土质疏松,保水力较强的砂壤土,壤质沙土,砂质壤土上栽培.酸樱桃用途广泛,除鲜食外还可做点心,酒酿,人药等.酸樱桃具有调中益气,养精止泻的滋补功能.酸樱桃的叶,核,果皆可人药,通身无弃物.据名医别录记载,樱桃性味甘温,有润中,益脾之功效,主治四肢瘫痪,风湿腰痛等症,其果实能缓解关节炎和痛风的疼痛.由于多元酚类化合物含量较高,因此具有明显的抗癌,抗动脉硬化和其他心血管疾病的功效.中医常用酸樱桃汁发麻疹汐擦治汗斑,烧伤,疝气等;浸酒服之,令人面色嫩润,青春常驻.此外,酸樱桃树姿优美,花期早,花量大,春天开白花,夏秋果实累累,秋后叶子变为红色,是优美的园林绿化和美化观赏树种.但由于扦插,嫁接等方法的繁殖率均很低,我们于1999年末从加拿大引进优良品种,利用4a时间,采用组织培养技术对酸樱桃这一珍贵果树的快速繁殖技术进行了研究.1材料与方法1.1外植体准备外植体从栽植的3a生苗木上剪取当年生萌动芽孢,茎尖,茎段,用自来水加1滴洗洁精水溶液清洗材料表面的灰尘,再用自来水冲洗材料表面的洗洁净溶液.在超净工作台上用0.1%H:gCl2表面消毒79min,消毒后用无菌水冲洗接种材料45次.1.2培养基初级培养以MS培养基为基础,分别加入不同质量浓度的6一苄基氨基腺嘌呤(6一BA),萘乙酸(NAA),吲哚丁酸(IBA),激动素(Kt),玉米素(ZT)(见表1),每种处理接种25瓶.诱导芽时单独使用6-BA,Kt,ZT或6-BA分别与IBA,NAA,Kt混合使用,壮苗培养基为不加激素的MS培养基.诱导不定根时,采用收稿日期:20040223基金项目:吉林省科技厅项目(20010224.1);北华大学校管项目(2003.55)作者简介:唐晓杰(1965一),女,助理工程师,主要从事植物组织培养技术研究北华大学(自然科学版)第5卷1/2MS;/I)v质量浓度分别为0,0.5,1.0,1.5,2.0mg?L的IBA.蔗糖用量为30g/L,调整pH为5.8.配制好的培养基经过常规灭菌后备用.表1初级培养时激素种类及用量Tab.1Kindandconcentrationofhormoneduringperiodofprimaryculturep/mgL一激素种类及质量浓度激素种类及质量浓度序号Kindandconcentrati0nofhormone序号Kindandconcentrationofhormoneio.O.BANAAIBAAAIBAKtZT10.50.1101.00.121.00.1111.50.131.50.1l22.00.142.00.1l30.10.550.5140.11.061.0l50.11.571.5160.12.082.0170.590.50.1l81.01.3培养条件外植体接种后置于培养室内培养,培养温度2328.每日光照1012h,光照强度18002000lx2结果与分析2.1愈伤组织形成在此实验过程中,用0.1mol/L的HgCI2溶液对外植体进行消毒时,采用3种不同的消毒时间(7,8,9rain).其中,消毒时间以9rain最为适宜,其次为8rain,而消毒7rain的试管苗,几乎全部染菌,在消毒9rain的侧芽进入初代培养中,4号生长得最好,1,2,3,6号次之,10,13号生长一般,初级培养的存活率较低.初级培养期间随时去除污染瓶.顶芽,侧芽几乎全部染菌,惟有芽苞生长分化很好.在1个月左右芽苞开始膨大直至2个月芽苞完全展开,并逐渐形成愈伤组织.不同的培养基形成愈伤组织的时间和效果不同:1,2,3,5,6,7号培养基接种的芽苞启动得很慢,比4号晚1周,而且苗弱.8号培养基和4号培养基启动的时间差不多,但苗生长分化得较慢.其他培养基几乎不启动或略有启动,但不生长,随即干枯.2.2不定芽发生有些愈伤组织长到一定时期,开始发生不定芽,最多的可以形成3050个不定芽.是否形成不定芽,以及不定芽的多少,与培养基中的激素种类和浓度有关.适合其增殖生长的培养基是MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L,增殖率为45倍.2.3继代培养当苗木生长分化大约1个月时,开始继代培养,并随时观察.增殖培养共设6个对比试验,其中以2号生长最好,在25光照条件下培养大约20d左右,每个愈伤组织长出3050个丛生芽.3,5,6号稍差一些.适量使用IBA与6-BA混合比单独使用6-BA增殖效果好,植株生长健壮,更有利于增殖或生根.这时,在无菌状态下重新切割愈伤组织芽团,纵向切割,每团切割适当大小继续培养.如果芽生长特别密集几乎没有高生长或者苗木生长特别弱时,开始降低6-BA的浓度.2.4壮苗培养苗木生长分化到一定数量时,将丛生苗剪成单株,转入壮苗培养基.壮苗培养基是不加激素的MS培养基,每瓶接种57株,经过2周壮苗培养后,组培苗生长粗壮,叶片增大,浓绿.粗壮的组培苗可以进行不定根的诱导.2.5不定根诱导选择粗壮的组培苗,转移到生根培养基.在生根培养过程中发现,4号和5号生根培养基中IBA的浓度较高,试管苗能够生根,但根系较脆弱;1号为1/2MS培养基,不含激素,2号培养基中,IBA的浓度较低.1号和2号生根率都很低,说明酸樱桃组培苗在含IBA较低的培养基中不易生根.3号生根培养基中第4期唐晓杰,等:酸樱桃组织培养及快速繁殖技术研究357IBA的浓度为1.0mg/L,生根率很高,达93%,并且根粗壮,根多,根系发达.因此,l/2MS+IBA1.0mg/L为酸樱桃试管苗较适宜的生根培养基.2.6移栽将生根的组培苗瓶盖去掉,在室内放置35d后,用镊子将组培苗从瓶中轻轻取出,洗去黏附在根部的培养基,在含有多菌灵的水溶液中浸泡数S,移栽到基质中.基质的种类与配比见表2.混合好的基质,用高锰酸钾水溶液消毒.移栽后温度保持在1823,相对湿度90%以上.移栽2周后,新不定根发生,新叶长出,组培苗成活.其中以蛭石+珍珠岩(体积比为1:2)移栽成活率最高,达86%表2移栽基质与成活率的关系基质Substation成活率Survivalrate/%基质Substation成活率Survivalrate/%(土Soil):3:158(土Soil):3:169(河沙RiverSand)1:249(珍珠岩Pearlite)1:265(土Soil):3:161(蛭石Vermiculite):2:178(蛭石Vermiculite)2:171(珍珠岩Pearlite)1:2863小结以芽苞为外植体,易形成愈伤组织和不定芽;最佳增殖培养基是MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.1mg/L,增殖率为45倍;最适宜的生根培养基是1/2MS+IBA1.0mg/L,生根率达93%;最适宜的移栽基质是蛭石+珍珠岩(体积比例为1:2),成活率为86%.参考文献:1李浚明.植物组织培养教程M.北京:北京农业大学出版社,1992.324-359.LiJunming.PlantCultureMediumCoursesM.BeijingChineseAgricultureUniversityPress,1992.324359.2谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术M.北京:中国林业出版社,1991.84103.TanWencheng,DaiC_.gang.TechnologyofPlantCultureMediumM.Beijing:ChineseForestryPress,1991.84-103.3董义虎,杨增海,胡霓云,等.毛樱桃的离体培养J.植物生理学通讯,1984,20(4):36.DongYihu,YangZenghai,HuNiyun,eta1.InVitroCultureofPrunustomenrosaJ.PlantPhysiologyCommunication,1984,20(4):46.4韩文璞.甜樱桃的组织培养与快速繁殖J.植物生理学通讯,1994,30(2):ll9.HanWenpu.TissueCultureandRapidPropagationofSweetCherryJ.PlantPhysiologyCommunication,1994,30(2):ll9.5李青,苏雪痕.金叶连翘试管苗生根及移栽成活率的研究J.北京林业大学,2003,25(1):5861.LiQing,Suxuehen.Fors3ghiakoreannaSauonGoldRootinginTubeandSurvivalRateofTransplantationJ.JoumofBeijingForestryUniversity,2003,25(1):58-61.6程广有.名优花卉组织培养技术M.北京:科学技术文献出版社,2000.570.ChengGuangyou.TechnologyofFlowersandPlantsCultureMediumM.Beijing:ScientificandTechnicalDocumentsPublishingHouse,2000.570.OntheTechnologyofTissueCultureandRapidPropagation,OPrunuScerQSuSTANGXiao-jie,M【ENGQingfan,YANGZhenguo,GAOWentao(ForestryCollegeofBeihuaUniversity,Jilin132013,China)Abstract:ThetechnologyofrapidpropagationofPrunuscerasuswasstudiedbytissueculture.TheculturemediumisMSsupplementedwithdifferentconcentrationsof6一BA,NAA,IBArespectivelyorcommixture.Explants&renewbuds.tipsofstemandsectionsofstemrespectively.MS+6一BA2.0mg/L+IBA0.1mg/LisgoodmediumforPrunuscerasuspropagationandpropagationrateis45times.ArbustivebudsarecutasindividualplantandplantedinMSmediumwithouthor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