夏季常见肠道致病菌及检测.doc

夏季常见肠道致病菌及检测（附最新原创照片）本帖最后由 乐园 于 2010-8-18 14:03 编辑 最近属于肠道疾病高峰期，至少我们单位最近经常有阳性病人出现。从七月份开始我们检出福氏志贺氏菌F2a 4例、宋内志贺氏菌3例、福氏志贺氏菌1a 2例，沙门氏菌1例，副溶血性弧菌我没具体统计估计在四五十例左右，霍乱弧菌未检出。我们单位肠道门诊最近每天腹泻病人有二十多例。我单位是上海市的肠道定点监测点，我想与大家分享一下一点自己的工作经验。先秀一下装备吧下载 (192.75 KB)2010-8-18 13:13下载 (995.42 KB)2010-8-18 13:15看一下常用的检测培养基及诊断血清。下载 (134.84 KB)2010-8-18 00:38我们实验室的主要肠道培养基冰箱下载 (296.54 KB)2010-8-18 00:38常用的培养基下载 (142.63 KB)2010-8-18 00:40下载 (198.92 KB)2010-8-18 00:41诊断血清副溶血性弧菌，最近一直有检出，最多的一天是检出了8例。我们的检测方法是棉签取大便至于副溶血性弧菌35增菌16-18h，后移种副溶血性弧菌平板（TCBC也可我单位用的是副溶专用平板），继续培养16-18h。副溶平板上菌落较大、绿色、湿润，遇到此可疑菌落做氧化酶试验阳性。然后接种弧菌显色平板，弧菌显色平板上紫红色为副溶。为了确证一般还需要做盐试验。副溶一般3%8%的氯化钠胨水生长，无盐和超出此范围盐不生长。所以我们一般选择0%，3%。6%，10%的盐管，0%，10%不生长，3%。6%生长。符合以上条件一般即可报告副溶血性弧菌生长。对于弧菌显色平板我个人觉得还是不错的，可以省不少力，最初使用时我做过对照，对菌落形态符合副溶、氧化酶阳性的可疑菌，在显示板上紫红色的，均做系列盐试验同时VITEK-32上机，结果做出了几例均完全符合。后来就省却了一些步骤，菌落形态符合、氧化酶阳性的可疑菌我直接上显色平板，显色平板符合的就直接报阳性了。当然了菌落不特别典型的是一定要做盐试验的。下载 (456.92 KB)副溶血性弧菌2010-8-16 22:23，呵呵，为了节约成本一块平板画了两个病人。上下两个均为副溶血性弧菌。下载 (376.07 KB)弧菌显示平板2010-8-16 22:25一块显色平板可以做很多例哦，比较节约。紫红色为副溶血性弧菌。志贺氏菌：常见肠道致病菌。我实验室最近连续几周每周都有阳性病人检出。今天刚检出了一例福氏志贺氏菌F2a和一例宋内志贺氏菌。先秀一下热腾腾的图片，下午才拍的。F2a菌落不是特别典型，因为隔了周日，也就是菌落是48h的，菌落上比典型的菌落偏大，且在整个SS平板上只有几个可疑菌落，很容易漏检。宋内氏菌落还是比较典型的，半透明菌落，相对比较纯，杂菌比较少。SS-F2a-2.jpg (400.97 KB) 下载次数:02010-8-16 22:34F2a-SSSS-S-1.jpg (379.95 KB) 下载次数:02010-8-16 22:36宋内志贺氏菌本帖最后由 乐园 于 2010-8-16 23:14 编辑 以上的两个图片的菌种今天纯分了，明天重新照张纯分到SS平板、双糖管、和XLD平板以及CAS平板的照片。请大家继续关注。检测方法我们以前一直是直接接种SS平板，3516-18h后，透明或半透明菌落为可疑菌落，福氏一般菌落较小，宋氏一般稍大些。接种双糖，取K/A-为可疑菌落，一般为排除大肠杆菌的交叉凝集做IND（吲哚试验）或者直接接种尿定位显色平板。可疑菌落直接志贺氏菌四种多价血清凝集，多价凝集的做生理盐水阴性对照排除自凝。然后一般根据菌落形态凝集福氏多价或者宋氏。痢疾志贺氏菌和鲍氏志贺氏菌是很少见的，至少我做微生物这几年我实验室未检出过。当然提醒大家一下，志贺氏菌四种多价是：福氏志贺氏菌、宋内氏、痢疾1型、痢疾2型，而不包括鲍氏志贺氏菌。福氏志贺氏菌又以1型和2型常见，所以我凝集也一般是先凝这两个。群因子，3.4，6，7都需要凝集。因为我们要求是报到亚型的。阳性菌种全部需要送到区CDC实验室。继续上图下载 (107.12 KB)F2a和宋氏在SS上菌落2010-8-18 12:37SS平板上F2a和宋内志贺氏菌，宋氏一般比福氏菌落稍大，且透明度也稍差。福氏一般无色透明或半透明，宋氏的感觉有点偏白色或者轻微的粉色。下载 (116.36 KB)F2a和宋氏在XLD上菌落2010-8-18 12:41XLD平板我们刚开始用，说实话对菌落形态的把握上也没有在SS上那么自信。总体感觉在XLD上菌落也是透明、半透明，或者有点淡红色或者叫平板的本色（可能是因为平板的红色光反射的原因吧）。下载 (1.01 MB)大肠杆菌在XLD上的菌落2010-8-18 12:45大肠杆菌在XLD上呈现的是红色。下载 (301.43 KB)双糖2010-8-18 12:56双糖表现应该是K/A-。下载 (698.87 KB)沙门氏菌显示平板2010-8-18 13:00在CAS平板上福氏为透明或淡白色菌落，宋氏为蓝色菌落。沙门氏菌为紫红色的。（PS:但图中紫红色后经血清凝集证实并非沙门氏）ss-s2.jpg (448.57 KB) 下载次数:02010-8-18 13:08沙门氏的检测，当然以前老的检测方法是直接在SS平板上挑选分解硫化氢的菌落。即中间黑心，边缘透明的菌落，挑双糖，可疑菌落血清凝集。但此种做法阳性率很低，最好增菌后再种平板。我们现在参加上海市的一个合作项目，采用SBG增菌后再接种平板的方法，但因为刚参加，还没积累出经验来，我目前手头上也没有照片。新的方法技术细节要求保密，所以也不便过多的透露。自己本人也在探索中，以后如果有遇到再补充照片吧。致病性大肠杆菌0157：H7也是致腹泻的常见菌之一。详细相关资料可以参阅：/news/jszl03/2003101375034.htm。我们单位以前是遇到脓血便病人，如果怀疑是致病性大肠杆菌0157：H7感染，我们接种SMAC(山梨醇麦康凯平板），在平板上分解山梨醇的菌落进行血清凝集。现在有了专用的0157：H7显色平板做起来更方便了。直接接种显色平板可疑菌落再进行血清凝集。最近未检出阳性所以自己手头上也没有相关照片。霍乱弧菌检测，我工作以后我单位就未检出过。所以也只能说说我们的做法。我们是在碱性蛋白胨水增菌6-9h后接种双洗平板，遇到中间黑色边缘透明的菌落做血清凝集。粪便的直接镜检也应该比较有意义，但我也未见过阳性。应该是鱼群样菌落，运动活跃。制动试验也未做