M胆碱受体和H1受体激动药对离题豚鼠回肠的作用.docx

M胆碱受体和H1受体激动药对离题豚鼠回肠的作用实验步骤1实验装置准备和仪器参数设置（1）离体肠管描记装置的准备见图7-15-1，麦氏浴槽中加固定量的台氏液，调节超级恒温器的温度，使麦氏浴槽内温度稳定在370.5。通气管接95%O25%CO2 混合气体管道。用螺丝夹调节气体管道的气体流量，调节至浴槽中气泡一个个逸出为止。（2）张力换能器固定于铁支柱上，换能器输出线接微机生物信号处理系统，仪器参数设置：RM6240系统：点击“实验”菜单，“自定义实验项目”菜单中的“肠肌记录”。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数：通道时间常数为直流，滤波频率10Hz，灵敏度3g，采样频率200Hz，扫描速度1s/div。 2标本准备（1）取豚鼠一只，用木槌击其头部致昏死，立即剖开腹腔，找到回盲部，然后，在离回盲部1cm处剪断，取出回肠约10cm左右一段，置于氧饱和的台氏液培养皿中，沿肠壁除去肠系膜，然后将回肠剪成数小段（约11.5cm），用5ml注射器吸取台氏液将肠内容物冲洗干净，换以新鲜台氏液备用。注意操作时勿牵拉肠段以免影响收缩功能。（2）取一小段肠管置于盛有台氏液的培养皿中，在其两端对角壁处，分别用缝针穿线，并打结。注意保持肠管通畅，勿使其封闭。肠管一端连线系于浴槽固定钩上，然后放入37麦氏浴槽中。再将肠管的另一端系结在张力换能器的悬臂梁上，调节肌张力至23g（图7-15-1）。 【观察项目】1待离体回肠稳定1030分钟后，记录一段正常收缩曲线后，依次向麦氏浴槽中滴加下列药物。加入一种药液后，观察23分钟，并连续记录肠管收缩曲线，然后用台氏液连续冲洗二次，待基线恢复到用药前的水平，随后记录一段基线。再加入第二种药液。浴槽液体的容量应相等。2加入10-2 g/L ACh 0.2ml，观察并记录其收缩曲线，23分钟后换液。3重复以上Ach 剂量，待收缩达最高点时，加入1g/L atropine 0.2ml，观察并记录其收缩曲线。不换液，待曲线降至基线或基本稳定后，再加入相同浓度的ACh，观察并记录其收缩曲线。4加入10-2 g/L histamine 0.3ml，待作用明显时(12分钟)，迅速换液。使肠肌张力恢复正常。5加入10-3 g/L chlorpheniramine溶液0.2ml 5分钟后(不换液)，加入同量histamine，观察并记录其收缩曲线。6加入10g/L BaCl2 溶液1ml，观察其反应，当作用达最高点，肠段持续于痉挛收缩状态时，加入1g/L atropine溶液0.2ml(或更大剂量)，观察并记录其收缩曲线收缩曲线基线离体回肠10-2 g/L ACh 0.2mlAch收缩最高值加入1g/L atropine 0.2mlAch收缩最高值加入1g/L atropine 0.2ml 稳定后加入1g/L Ach0.2ml10-3 g/L chlorpheniramine 5min后加入同量histamine10g/L BaCl2 溶液1ml，作用达最高点，1g/L atropine溶液0.2ml(或更大剂量)问题1.5个关键词小鼠 M胆碱受体 H1受体 离体豚鼠回肠 单因素方差分析2.哺乳类消化道平滑肌细胞膜上受体B8 受体,M3 受体,H1、H2、H3 受体小肠：虽然M3是调节环肌收缩的主要受体，M3和M2两者都参与纵肌的收缩，除m2和m3外，m1和m4也可在鼠和兔回肠中检测到。大肠：Maeda et al在猪和鼠大肠组织曾检测到m2和m3两类受体mRNA有表达. M2和M3两型受体可能都参与结肠环肌的收缩，但M3的成分更大M胆碱能受体激动剂毛果芸香碱、新斯的明、碘解磷定M胆碱能受体拮抗剂阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、筒箭毒碱、3.M胆碱能受体激动对消化道平滑肌有何影响胆碱受体激动药（cholinoceptor agonists）与胆碱受体结合，激动受体，产生与递质乙 酰胆碱相似的作用 按其对不同胆碱受体亚型的选择性，可分 ：M，N 胆碱受体激动药； M 胆碱受体激动药；N 胆碱受体激动药。许多器官是由胆碱能和去甲肾上腺素能神经双重支配的，通常是其中一 占优势。例如，在胃肠道、膀胱平滑肌和 腺体是以胆碱能神经占优势，而心肌收缩和小血管方面则以去甲肾上腺素能神经占优势。静脉注射小剂量Ach 即能激动M胆碱受体，产生与兴奋胆碱能神经节后 纤维相似的作用，引起心率减慢、血管舒张、血压下降，支气管和胃肠道平滑肌兴奋，瞳孔 括约肌和睫状肌收缩以及腺体分泌增加等兴奋平滑肌，使其收缩M胆碱受体拮抗剂对乙酰胆碱的效应影响M抗胆碱药物阻断M3受体组胺H1受体激动对消化道平滑肌影响激活H1受体，通过三磷酸肌醇、二脂酰甘油介导，兴奋支气管和胃肠道平滑肌，增加毛细血管通透性和扩张部分血管H1受体阻断剂扑尔敏对组胺效应的影响氯苯吡胺品是最强的抗组胺药之一，镇静作用较异丙嗪弱，也有一定的抗胆碱作用。它与苯海拉明相似，但中枢抑制作用较轻。可诱发癫痫，禁用于癫痫患者。抑制平滑肌收缩M受体细胞内信息传递机制M3受体的细胞内信息传递机制M3受体主要激活Gq蛋白(又称Gp蛋白)1，19，Gq蛋白与磷脂酶C(PLC)相联系，磷脂酶C则可使膜上4，5-二磷酸肌醇磷脂(PIP2)水解，而产生三磷酸肌醇(IP3)和1，2-二酰基甘油(DG).在小肠平滑肌组织或单个细胞，M3受体一旦激活，胞内IP3水平在10s15s内即达高峰(增加5倍)，而DG水平在30s内超过对照值的2倍. iP3水平的升高可使肌浆网内贮存Ca2+释放，胞浆内Ca2+增多后触发平滑肌收缩13. dG水平的升高可激活蛋白激酶C(PKC)，而使其发生重分布至胞膜，产生磷酸化功能1.具体机制虽尚不明了，但蛋白激酶C重分布可能使胞膜上受体介导的Ca2+通道激活，促使Ca2+内流；也可能使胞浆内腺苷酸环化酶的活性降低而使cAMP水平降低；也可直接磷酸化收缩蛋白而激活收缩机制.M2受体的细胞内信息传递机制如将m2基因转化至不含M受体的哺乳类动物细胞，并让其表达m2受体蛋白后，发现m2受体与许多细胞内信息传递通路相联系18，其中最为显著和肯定的是其降低细胞内cAMP水平的作用，这被许多实验所证实1，11.与心肌的M2受体一样，当细胞外配体如乙酰胆碱或其他类似物兴奋消化道平滑肌M2受体，便激活Gi蛋白，Gi蛋白则降低腺苷酸环化酶的活性，使胞内cAMP含量减少，促使平滑肌收缩，.有趣的是，M2这种间接加强收缩的作用只发生在肌肉事先被肾上腺素能受体激动剂所致的舒张状态。M2受体不论在正常或炎症时均参与小肠纵肌的收缩，而几乎不参与正常状态的环肌收缩，但可部分参与炎症时的环肌收缩. m2受体加强胃肠道平滑肌收缩的作用在正常情况下可能被M3受体直接产生收缩的效应所掩盖而不甚明显，但在应激情况下如炎症等，M2受体加强收缩的作用则明显表现出来.离体肠段如何与检测系统连接取一小段肠管置于盛有台氏液的培养皿中，在其两端对角壁处，分别用缝针穿线，并打结。注意保持肠管通畅，勿使其封闭。肠管一端连线系于浴槽固定钩上，然后放入37麦氏浴槽中。再将肠管的另一端系结在张力换能器的悬臂梁上，调节肌张力至23g维持离体肠段收缩需要条件需要将离体的平滑肌进入生理盐水中，来保证细胞的形态正常。需要将溶液中放入极微量的钙离子，来保证肌肉收缩的机能正常。需要保证离体平滑肌结构的完整性，使整个反射弧畅通。需要一定的电刺激台氏液组成成分台氏液配制 1000ml台氏液含：NaCl 8.0g、10% KCL 2.0ml(0.2g)、10% MgSO4.7H2O 2.6ml(0.26g)、5% NaH2PO4 .2 H2O 1.3ml(0.065g)、NaHCO3 1.0g、1M CaCL2 1.8ml（0.2g）、葡萄糖 1.0g。Leagene 改良 Tyrodes solution 也属于平衡盐溶液的一种，主要由氯化钠、磷酸盐、 氯化钙、葡萄糖等组成，含 HEPES。经常用于哺乳动物离体肠肌实验并维持离体肠肌的正 常生理功能、肌体灌流、清洗组织，缓冲能力较常规 Tyrodes solution(DF0011)强为何台氏液可以维持离体肠段活性提供所需离子，能量，缓冲作用RM6240多通道信号采集处理系统的参数如何设置RM6240系统：点击“实验”菜单，“自定义实验项目”菜单中的“肠肌记录”。系统进入该实验信号记录状态。仪器参数：通道时间常数为直流，滤波频率10Hz，灵敏度3g，采样频率200Hz，扫描速度1s/div。 改变标本与张力换能器之间连线的张力会对实验结果产生何种影响过紧影响肠道平滑肌正常生理状态，过松对张力变化不敏感肠段标本与张力换能器之间的连线要与水平面保持垂直，松紧适当，并且使之不与浴槽壁相摩擦。观察肠段运动方向和计算机屏幕上的记录曲线是否一致，即收缩时，曲线上升；舒张时，曲线下降。否则，可将张力换能器旋转180组胺、乙酰胆碱、氯化钡三试剂被随机贴上A/B/C瓶标，利用离体豚鼠回肠实验方法和工具阿托品、扑尔敏设计实验，鉴别上述药物乙酰胆碱为胆碱能神经递质，可明显兴奋兔肠平滑肌的 M 受体，使其收缩幅度、张力、 蠕动增加；氯化钡不作用于受体，而是直接作用于肠管，使肠管受到钡离子的刺激后产生收缩痉挛；阿托 品为阻断 M 胆碱受体的抗胆碱药，能拮抗乙酰胆碱对平滑肌的 M 样作用，但不能拮抗氯化钡对离体 兔肠的收缩作用回肠，置盛有冷台氏液的培养皿中保存，将 肠管剪成数段。2、取离体兔肠一小段，置于浴槽内与张力换能器连接，在电脑中观察曲线变化。 3、鉴定药物（每次取 0.2ml 滴入浴槽中） 依次往浴槽中滴入 A、B、C、三种药物，每次只滴入一种药物，观察张力曲线变化。注意每次加 入新药物前要清洗兔肠。借助已经鉴定的药物继续鉴别，验证剩余药物。对离体肠段的观察项目收缩曲线，处理前后收缩幅度的原始数据、频率、幅度和张力向台氏液中滴加试剂注意问题滴药时，不要碰触连接线，不要把药滴在管壁上，不要滴加在回肠上。换液迅速 在加药前，必须先准备好更换用的38台氏液。每次加药出现效果后，必须立即更换浴槽内的台氏液，待肠段恢复正常活动后再观察下一个项目。如果一次滴加时没有明显结果，可以适当追加一部分试剂为保持离体肠段的收缩活性，操作注意问题1) 每做一个离子或试剂对肠道的影响实验时， 都要更换台氏液， 并清洗干净保持肠道活性 正常。 2) 所加的试剂的量不要过大，防止肠道受到不可恢复的破坏。3）浴槽内台氏液要保持一定高度 4）加药前必须准备好更换用的38台氏液 5）标本安装好后，应在新鲜38台氏液中稳 定510min，有收缩活动时即可开始实验 6）游离及取出肠段时，动作要快，但要避免过度牵拉或使组织干燥而影响其活性。 整个过程应保持营养液恒温和通入O2。实验结果属于何种数据类型计量资料实验数据适合何种统计分析方法双侧t-检验?离体肠段灌流实验影响因素有哪些实验室的温度、 空气状况，操作的熟练程度，灌流液的配置情况，豚鼠本身的生理状态与整体实验相比，离体实验有何优点离体实验室将器官或细胞从体内分离出来，在一定条件下进行的研究。离体实验具有以下特点：条件易于控制；操作简便，结果准确；节约时间，提高实验效率。离体实验三要素：温度，38+/-0.5；营养液；气体：氧气，二氧化