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Western blot常用试剂配方1. 丙烯酰胺-双丙烯酰胺储存液：30% AB（100ml） 丙烯酰胺 29 g双丙烯酰胺 1g加蒸馏水至100ml，过滤，棕色瓶保存。2. 10% SDS：（10ml） 电泳级SDS 1 g蒸馏水 9 ml 初始PH约为7.85，用针尖蘸少许浓盐酸调PH 至7.2，定容至10ml。3.TEMED（四甲基乙二胺）（成品） 4. Lower-buffer （1.5M Tris-Cl PH 8.8）：50mlTris-base 9.085 g蒸馏水 45 ml 加浓盐酸（约0.4ml）调PH至8.8后定容至50ml，4保存。5. upper buffer（1.0M Tris-Cl，PH 6.8）：50mlTris-base 6.055 g蒸馏水 44 ml 加3.5ml浓盐酸调PH至6.8后定容至50ml，4保存。6. 10%过硫酸铵（10% AP）：0.5ml 新鲜配制称取0.05g AP于1.5ml EP管中，储存于-20，用时溶于0.5ml蒸馏水7. 5 loading buffer：（1ml） 50mlupper buffer 0.312 ml 15.6ml甘油（丙三醇） 0.5 ml 25mlSDS 0.1 g 5gDTT 0.0385 g 溴酚蓝 0.005g 0.25g加蒸馏水溶解后定容至1ml。取0.2ml加0.8ml蒸馏水配成工作液。8. 5 running buffer：（1000ml）Tris-base 15.1 g甘氨酸（Glycine） 94 gSDS 5 g加蒸馏水溶解后定容至1000ml。用时加4000 ml蒸馏水。9. 考马斯亮蓝染液：100ml（可重复利用）甲醇 30 ml冰乙酸 10 ml蒸馏水 60 ml考马斯亮-250 0.05 g10. 考马斯亮蓝脱色液500ml：现用现配乙酸（10%） 50ml甲醇（30%） 150ml加蒸馏水定容至500ml。11. Transbuffer（PH 8.5）：100ml 现用现配Tris-base 0.3028 g甘氨酸 1.4872 g甲醇 20 ml加蒸馏水定容至100ml。12. 10 x 丽春红染液（储存液）：（可重复利用）（用时用蒸馏水稀释为1 X 的）染色后用纯水脱色 丽春红 2 g三氯乙酸 30 g磺基水杨酸 30 g加H2O 定容至10 ml（储存液）。4保存。用1 TBST洗脱13. 10 TBS：500 mlTris-base 12.1 gNaCl 40g加浓盐酸5ml调PH至7.6，加蒸馏水定容至500ml（储存液）。4保存。用时蒸馏水稀释为1 TBS（1份10 储存液，9份水）.14. 1 TBST （加Tween-20的TBS） 洗涤液：Tween-20含量0.05%15. 封闭液： 含5%脱脂奶粉的TBST脱脂奶粉 1g1 TBST 20 ml16. ECL 发光底物：两种溶液1:1混合，均匀涂于膜上。1
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