13-14-1生药学实验讲义.doc

根及根茎类药材-人参（生晒参、红参、糖参）、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术的鉴定【实验目的】1.掌握人参（生晒参、红参、糖参）、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术生药及饮片的性状鉴别特征2.掌握人参、甘草、何首乌、麦冬、黄连（根茎）、川芎（根茎）、苍术（根茎）横切片的组织构造特征及显微鉴别特征【实验材料】1.药材与饮片：人参、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术药材饮片。2.石蜡横切片：人参、甘草、何首乌、麦冬、黄连（根茎）、川芎（根茎）、苍术（根茎）3.药材粉末：人参、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连【仪器与试剂】1.光学显微镜、载玻片、盖玻片、单面刀片、镊子、酒精灯、培养皿、纱布、小玻棒、擦镜纸、滤纸条、试管（10ml）、小玻璃漏斗2.水合氯醛试液、稀甘油、蒸馏水【实验内容】一、性状鉴定观察人参、甘草、何首乌、麦冬药材饮片的性状特征，比较其异同点。观察要点：形态、药材表面、色泽、质地、气味、断面。二、显微鉴定1.分别取人参、甘草、何首乌、麦冬根、黄连根茎、苍术根茎、川芎根茎横切片置于显微镜下，观察组织构造特征。 人参、甘草、何首乌、麦冬观察要点：木栓层、皮层、内皮层、异型维管束（云锦花纹）、树脂道、草酸钙晶体、韧皮部、形成层、木质部和维管束的特征，尤其注意单子叶植物麦冬的根毛、根被、黏液细胞及草酸钙针晶、分泌细胞、石细胞、内皮层、中柱鞘、韧皮部、木质部和髓。黄连根茎、苍术根茎、川芎根茎横切片观察要点：比较观察黄连根茎横切片中石细胞的分布与数目、韧皮纤维、根迹、叶迹维管束、髓等情况；观察苍术根茎横切面中石细胞环带、大型油室、木纤维束、射线、薄壁细胞中的菊糖等情况；观察川芎根茎横切面中油室、木纤维、根迹维管束等情况2.粉末观察：取人参、甘草、何首乌、麦冬粉末少许，用蒸馏水装片，镜检淀粉粒。用水合氯醛透化，稀甘油装片，观察草酸钙晶体、导管等组织构造特征。观察要点：淀粉粒的形态、簇晶的大小及棱角的钝锐，晶纤维、方晶、木栓细胞的特点、导管的种类、树脂道、棕色细胞、黏液细胞、针晶、石细胞、通道细胞、柱晶的形态。取大黄、黄连、川芎、苍术粉末少许，用水装片镜检，观察淀粉粒；用水合氯醛透化，稀甘油装片镜检，观察药材粉末的组织构造及后含物的显微鉴别特征。观察要点：淀粉粒、草酸钙结晶（簇晶、针晶）、菊糖、纤维、木栓细胞等的形态，导管的种类。【报告要求】1.描述人参、甘草、何首乌、麦冬、大黄、黄连、川芎、苍术药材的性状特征。2.绘制人参、甘草、何首乌、麦冬、黄连、川芎横切片组织构造简图，标明各组织构造名称。3.绘制人参、甘草、麦冬、大黄、黄连粉末特征图，标明各特征的组织构造名称。皮类药材厚朴、黄柏、肉桂、秦皮的鉴定【实验目的】1.了解皮类药材的性状鉴别特征2.掌握厚朴、黄柏、五加皮、肉桂粉末的显微鉴别特征【实验材料】1.药材与饮片：厚朴、黄柏、肉桂、五加皮、杜仲、秦皮、牡丹皮药材饮片。2.横切片：厚朴（树皮）横切，川黄柏横切3.药材粉末：厚朴、黄柏、肉桂【仪器及试剂】1.光学显微镜、放大镜、载玻片、盖玻片、单面刀片、镊子、酒精灯、擦镜纸、滤纸条2.水合氯醛试液、稀甘油【实验内容】一、性状鉴定观察皮类药材的生药药材及饮片的性状特征。观察要点：注意观察各药材及饮片的形态，色泽、质地、断面、划痕、气味。描述厚朴、黄柏、肉桂、五加皮、杜仲、秦皮、牡丹皮药材饮片性状特征。二、显微鉴定1.镜检厚朴（树皮）横切，川黄柏横切的石蜡切片，观察比较它们组织构造特征的异同点。观察要点：注意观察厚朴干皮的栓内层石细胞环的分布、皮层中散在的纤维束、石细胞、油细胞的数目等特征。黄柏皮层中石细胞的分布与数目、韧皮纤维束切向排列层带的分布情况。2.厚朴、黄柏、肉桂粉末少许，用水合氯醛透化，稀甘油装片镜检，观察药材粉末的组织构造及后含物的显微鉴别特征。观察要点：草酸钙结晶、晶纤维、石细胞、油细胞、树脂道、纤维、筛管等的形态。【报告要求】1.描述所观察的皮类药材主要的性状鉴别特征。2.绘制关黄柏与厚朴横切片组织构造简图，标明各部位名称。3.绘制厚朴、黄柏、五加皮、肉桂粉末特征图，标明各组织构造、细胞后含物名称。【思考题】1.皮类生药横切片组织构造有哪些主要特点？2.厚朴、黄柏、秦皮的主要化学成分及药理作用？3.厚朴、黄柏、五加皮、肉桂主要具有哪些粉末鉴定特征？叶类、全草类生药麻黄、薄荷叶、大青叶、番泻叶的鉴定【实验目的】1.了解叶类、全草类生药的形态特征2.掌握叶类、全草类生药的组织构造及显微特征【实验材料】1.生药和饮片标本：麻黄、薄荷叶、大青叶、番泻叶2.石蜡切片：草麻黄茎、薄荷叶、番泻叶3.生药粉末：草麻黄、大青叶、薄荷叶【仪器与试剂】1.显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、2.水合氯醛、稀甘油、蒸馏水【实验内容】一、性状鉴定观察叶类、全草类生药观察要点：注意观察各药材及饮片的形态、色泽、质地、断面、气味。二、显微鉴定1. 镜检麻黄、薄荷叶、番泻叶石蜡切片。观察麻黄横切片的两棱线间下陷的气孔、下皮纤维束、皮层散在的纤维束、外韧式维管束、髓及草酸钙方晶或砂晶。观察叶类药材横切面中腺毛、非腺毛、栅栏组织、海绵组织、维管束排列方式、叶肉细胞中结晶形状、颜色、厚角组织等。2. 镜检草麻黄、大青叶、薄荷粉末。取草麻黄、大青叶、薄荷粉末少许，用水合氯醛透化，稀甘油装片镜检，观察药材粉末的组织构造及后含物的显微鉴别特征。观察要点：草麻黄的气孔侧面观保卫细胞呈哑铃形或电话筒形；大青叶的靛蓝结晶、不等式气孔；薄荷叶的腺鳞及橙皮苷结晶、直轴式气孔；大青叶的表皮细胞和气孔，靛蓝结晶。【报告要求】1.描述麻黄、薄荷叶、大青叶、番泻叶性状特征。2.绘制草麻黄茎、薄荷叶横切、番泻叶横切片的组织构造详图。3.绘制草麻黄、大青叶、薄荷的粉末组织构造图。【思考题】1.本实验中所用各生药的化学成分、药理作用及主要功效是什么？2.叶类生药在组织构造上有哪些特点？花、果实、种子类生药的鉴定【实验目的】1.掌握花、果实、种子类生药的药材性状2.掌握花、果实、种子类生药的显微鉴别特征【实验材料】1.生药和饮片标本：金银花、红花、菊花、小茴香、五味子、吴茱萸、陈皮、枸杞、山楂、马钱子、苦杏仁、砂仁、决明子4.石蜡切片：小茴香、苦杏仁5.药材粉末：红花、金银花、苦杏仁【仪器与试剂】1.显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、纱布、小玻棒、擦镜纸、吸水纸2.试剂：水合氯醛、稀甘油、蒸馏水、【实验内容】一、观察各类药材的性状特征。注意观察各花类药材的形态，色泽、质地、气味。观察果实类生药饮片，了解果实的形态特征，熟悉果实的分类。观察要点：果实的形状、大小、颜色、顶端、基部、表面、质地、破断面、气味等。观察种子类生药饮片，了解种子的形态特征。观察要点：种子的形状、大小、颜色、表面纹理、种脐、合点和种脊的位置、质地、气味等。二、显微鉴定1.取小茴香的石蜡切片，置显微镜下观察其组织构造。观察要点：中果皮有6个油管，接合面有2个，背面每二棱线间各有1个；棱线处有维管束柱；种脊维管束；内胚乳细胞含细小草酸钙簇晶。2. 观察苦杏仁的显微特征 种皮表皮细胞一层。间有石细胞。石细胞单个或23个成群，长圆形、卵圆形，偶见贝壳形，顶端平截而呈梯形，橙黄色：高38、95um；上半都突出于表面，壁较厚，68um，层纹明显，孔沟少或无；下半部嵌于表皮内，较宽，1857um，壁较薄，纹孔及孔沟大而多。表皮下为营养层，由多层薄壁细胞组成，细胞多皱缩，有个型维管束。种皮内表皮为一层薄壁细胞，含黄色色素。外胚乳为数层颓废的薄壁细胞，细胞界限不清。内胚乳为一层长方形细胞，含糊粉粒及脂肪油滴。子叶薄壁细胞含糊粉粒及脂肪油滴，较大糊粉粒中有小的草酸钙簇晶。3.取红花、金银花粉末少许，用水合氯醛透化，稀甘油装片镜检，观察药材粉末的组织构造及后含物的显微鉴别特征。观察要点：花粉粒、萌发孔、腺毛、非腺毛、草酸钙砂晶、方晶、簇晶、花冠表皮细胞、花柱碎片，分泌细胞、气孔的类型、导管等。4.取苦杏仁粉末少许，用水合氯醛透化装片，置显微镜下观察。观察要点：种皮石细胞侧面观呈贝壳形，正面观呈类圆形或类多角形、种皮外表皮薄壁细胞多皱缩与石细胞相连，子叶细胞含细小草酸钙簇晶。【报告要求】1. 描述金银花、红花、菊花、小茴香、五味子、吴茱萸、陈皮、枸杞、山楂、马钱子、苦杏仁、砂仁、决明子的性状特征2.绘制小茴香、苦杏仁的横切面简图。3.绘制金银花、红花和苦杏仁的粉末特征图，标明各显微特征名称。【思考题】花类生药在组织构造上有哪些特点？果实、种子类生药的主要显微特征是什么？生药中常见化学成分的理化鉴定 各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味苦者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。中草药所含化学成分均为多类的混合物，分析时常常互相干扰，不易得到正确结果。因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别，而且每种成分需至少3种原理不同的鉴定方法呈阳性才能下结论。对生药中常见化学成分的理化鉴定有一个认识。【实验目的】本实验通过对几种已知主要成分生药的大类成分的理化鉴定，使掌握香豆素类，强心苷类、皂苷类、鞣质类、生物碱类的理化性质和部分定性检识反应。【实验原理】香豆素：香豆素具有在荧光性质，可在365nm处观察，如为羟基香豆素应呈现蓝色荧光。呋喃香豆精应呈现蓝色或黄棕色的荧光。强心苷：强心苷由-去氧糖与苷元连接，其可通过Keller-Kiliani反应鉴别，试剂包括冰醋酸、浓硫酸和三氯化铁，在此条件下，能水解出游离的-去氧糖，KK反应是-去氧糖的特征显色反应，在两液界面显红棕色环，继则变为浅绿、蓝色，而冰醋酸层显蓝色。 皂苷：皂苷具有产生持久性蜂窝状泡沫的性质，可利用此将其检出（维持10分钟以上，且泡沫量不少于液体体积的13）鞣质：鞣质有凝固蛋白的性能，遇到明胶液即生成白色沉淀物。生物碱：酸性溶液中碘-碘化钾试液与生物碱反应生成棕红色沉淀（为一种络盐AIKHIIn 其中AIK表示生物碱）【实验材料】秦皮、桔梗、五倍子、夹竹桃叶、黄连 水浴锅1 蒸发皿1 锥形瓶1 试管2 具塞试管1 紫外灯1 玻棒1 漏斗1 滤纸2蒸馏水、95乙醇、冰醋酸 浓H2S04 浓HCl氯化钠明胶溶液（10g氯化钠，1g明胶，加水至100ml）1%三氯化铁冰醋酸溶液 碘-碘化钾试液（1g碘，10g碘化钾溶于20ml水中，混合加水稀释至100ml）【实验内容】化学定性检查(1)香豆素类的检出：取秦皮粉末0.5g，置试管中，加水5ml，60水浴浸渍10分钟，取浸渍液点于滤纸上，在紫外光灯下观察。（2)强心苷的检出： 三氯化铁一冰醋酸反应（KK反应） 取夹竹桃叶0.5 g，置具塞试管中，加95乙醇5ml，60水浴加热10分钟，取样品溶液2ml，转于蒸发皿中蒸干，放冷，加冰醋酸lml使残渣溶解，转移入试管中，加1%三氯化铁冰醋酸溶液1滴，并沿管壁缓缓注入浓H2S04 l520滴，观察两液混合面或溶液颜色变化。(3)皂苷的检出： 泡沫反应 取桔梗粉末0.2g，加水5ml，60水浴浸渍10分钟，过滤，滤液在试管中强烈振摇，注意是否产生大量持久性泡沫。（4)鞣质的检出：取五倍子粉末0.5g，置锥形瓶中，加水25ml，60水浴浸渍10分钟，取检品的水溶液1ml，加氯化钠明胶溶液23滴，观察现象。 (5)生物碱的检出：取黄连粉未2g，分别盛入锥形瓶中，各加水l 5ml，浓HCl 0.5ml，60水浴上温浸30分钟，时时振摇，取滤液备用。取2ml滤液于试管中，分别加碘-碘化钾试液23滴，观察现象。不同产地川明参的品质比较（黄酮含量）【实验目的】通过川明参中黄酮含量比较不同产地川明参的品质，掌握生药品质比较的原理【实验原理】总黄酮为川明参主要有效物质，川明参中黄酮每个地方的含量均有差异。本次实验用材料取自四川苍溪、南充、广元、巴中四个地方，通过对其中的黄酮含量进行测定比较，可比较不同产地川明参的品质。在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在500波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律，利用此可测定川明参总黄酮的含量。【实验材料】四川苍溪县、南充市、金堂县、巴中市四个产地的川明参；芦丁对照品；石油醚；乙醇；水； 5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液；4%氢氧化钠溶液。分光光度计、水浴锅、旋转蒸发仪、索氏提取器，烘箱【实验内容】一、川明参总黄酮提取1原料处理取干燥川明参切片，粉碎至60目左右，备用。2川明参总黄酮提取液的制备脱脂及色素处理：各称取不同地方采收的干燥的30g川明参粉末，用滤纸包好装入索式提取装置，加入250ml石油醚，在84 条件下回流，脱去其含有的色素及脂类，直到回流的液体无色为止（大约1h），将川明参粉末取出干燥，待用。3提取总黄酮的工艺将烘干的川明参粉末10g液比为115温度为80 ，提取时间1.5h、乙醇浓度80%的工艺条件进行提取，滤液经旋转蒸发仪浓缩至50ml(大约含生药浓度为0.2g/ml)，待测。二、川明参总黄酮测定1.对照品溶液的制备精密称取经120恒温干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置50ml 的量瓶中，加适量乙醇，然后用超声处理使其全部溶解，放冷，然后再加适量乙醇至刻度线，摇匀即得所需要的对照品溶液（每1ml 中含无水芦丁0.2mg ）。2.标准曲线的制备精密量取对照品溶液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml，将其分别置于50ml的量瓶中，然后分别加水至12ml，再分别滴加5%亚硝酸钠溶液2ml，摇匀，放置6min，然后再分别滴加10% 硝酸铝溶液2ml，摇匀，放置6min，再滴加4%氢氧化钠试液20ml，最后再加水至刻度线，摇匀，放置15min，用相应试剂作为为空白对照组，然后立即照紫外-可见分光光度法，设定波长在500nm 处测定各组对照品溶液的吸光度，记录实验所得各组吸光度。以浓度（mg/ml）为横坐标，各组所测的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。3. 样品溶液的测定取上述已制备好的样品溶液0.5ml置于50ml的量瓶中，加水至12ml，滴加5%亚硝酸钠溶液2ml，摇匀，放置6min，再滴加10%硝酸铝溶液2ml，摇匀，放置6min，然后再滴加氢氧化钠试液20ml，最后再加水至刻度线，摇匀，放置15min，用相应试剂作为空白对照组，波长设定在510nm处测定样品溶液的吸光度，记录实验所得的样品溶液的吸光度值。4.计算通过吸光度计算总黄酮含量并比较四种产地样品。不同产地麦冬的品质比较（总皂苷）【实验目的】通过麦冬中总皂苷含量比较不同产地麦冬的品质，掌握生药品质比较的原理【实验原理】中华人民共和国药典2010年版规定：麦冬含麦冬总皂苷以鲁斯可皂苷元（C27H4