病毒载体-吴小兵

病毒载体研究进展 基因载体系统 病毒载体系统 非病毒载体系统 腺病毒载体 反转录病毒载体 腺伴随病毒载体 单纯疱疹病毒载体 慢病毒载体 裸DNA DNA 阳离子脂质复合物 DNA 蛋白质复合物 细胞内包装 细胞外包装 DNA 阳离子多聚物 DNA RNA嵌合物 吴小兵 863 计划生物领域病毒基因载体研发基地 病毒载体概述 1 要求 1 携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒2 介导外源基因转移和表达3 对机体不致病 容量 自身基因组大小的105 110 组成 1 病毒复制和包装元件2 病毒基因3 插入的外源基因或元件4 病毒外壳 外膜 用途 基因转移和表达1 基因治疗2 疫苗3 器官移植4 组织工程5 转基因动物6 基因功能研究 病毒载体概述 2 优点 1 利用病毒天然的感染性进入细胞 转导效率高 2 复杂的装配过程由细胞完成 3 不同的病毒载体具有不同的表达特点 常用的病毒载体的特点 病毒载体研究方向 1 病毒包装系统 2 无病毒基因的病毒载体 6 自我扩增型病毒载体 7 条件增殖型病毒载体 5 嵌合型病毒载体 3 靶向性病毒载体 4 可调控表达的病毒载体 8 新病毒载体 病毒载体包装系统 组成 1 宿主细胞2 辅助元件 辅助质粒 辅助病毒 3 被包装的DNA RNA包含顺式作用元件 单因素生产系统 one componentsystem 双因素生产系统 two componentsystem gagpolenv 图1反转录病毒包装系统示意图 图2腺病毒包装系统示意图 293cell E1a b JM17 AdShuttle 293cell E1a b 多因素生产系统 multi componentsystem 图3腺病毒伴随病毒包装系统示意图 Hostcell vectorDNA Helpervirus helperplasmid 图4双因素系统生产重组AAV病毒示意图 proviralcell Recombinanthelpervirus rHSV repcap 无病毒基因的病毒载体 被包装的DNA RNA中不含任何病毒编码基因 只保留其复制和包装所必需的顺式作用元件 获得的重组病毒颗粒具有野生型病毒的外壳 外膜和感染性 但不表达病毒蛋白 腺伴随病毒载体 反转录病毒载体 腺病毒载体 单纯疱疹病毒载体 gene ITR ITR pA 无辅助病毒包装系统 图5重组AAV无辅毒包装系统 AdenoviruswithpackagingsignalflankedbyloxP 图6mini adnovirus无辅毒包装系统 靶向性病毒载体 转导靶向性 转录靶向性 特异性 改造病毒外壳 外膜 连接靶向性结合分子 Modifiedadenovirus cell 组织特异性启动子 肿瘤选择性启动子 细胞周期调控启动子 肿瘤血管内皮导向启动子 双特异性启动子 病毒增殖的特异性转录调控 可调控表达的病毒载体 细胞的调控元件 病毒的调控元件 人工合成的调控元件 细胞特异性转录 细胞启动子病毒启动子albuminMVMP4TyrosinaseorTRP 1B19promoterPSAHBVMBPJCVMCKEBVGFAPNSEKDR flt 1AFPCEAerbB2HREMDR1 四环素调控 合成的转录因子 FKB12 ZFHD 1 FRAP P65 rapamycin RU486 Diphenolindene muristerone 重组病毒的生产和纯化 小量制备和纯化 大量制备和纯化 场所细胞培养细胞裂解病毒分离病毒纯化制剂保存 培养瓶转瓶 细胞工厂 发酵罐 反复冻融机械法或化学法裂解 实验室中试车间 离心离心 超滤 萃取 密度梯度超速离心浓缩 柱层析 配方 缓冲液 低温 病毒载体与基因治疗产业化 基因治疗产品的知识产权构成1 治疗基因2 调控元件3 改造的外壳 外膜4 靶向分子5 包装系统6 生产和纯化技术7 制剂和保存技术 产业化的组织和实施 1 合作开发2 专业分工3 政府支持和企业投资4 利益分配 基因治疗的三个核心部分1 基因载体系统2 基因表达系统3 治疗基因 知识产权和基础研究 专利对学术研究的影响1 无影响 对非常早期研究 2 有影响 对临床试验和可能的商业开发 基因治疗领域的知识产权主要通过专利系统来保护 对于基因治疗公司最重要的专利是 1 载体系统 2 生产过程 3 整体治疗方案治疗基因和表达系统可以从其它方购买使用权 政府支持对基因治疗产业化的重要作用1 政策上促进基因治疗的科研 临床和商业开