变形杆菌检测方法

变形杆菌的检测 一 概述 变形杆菌广泛分布于水 土壤 腐败有机物等自然界和人与动物肠道中 是一类条件致病菌 引起医院感染的常见条件致病菌 耐药菌株日益增多 常引起泌尿系感染等多种感染 污染食物后易在其中繁殖 引起食物中毒 变形杆菌食物中毒是我国最常见的一类食物中毒之一 全年均可发生 多发于5月 10月 以7月 9月常见 主要中毒食品为含有大量变形杆菌活菌的熟肉制品和凉拌菜 该菌引起的食物中毒潜伏期较短 一般为3 4h 主要症状为恶心 呕吐 腹部剧烈疼痛 腹泻 头疼 发热 全身无力等 腹泻一日数次 多为水样便 少数粘液便 有恶臭 病程较短 肠杆菌科 变形杆菌类 Proteus 变形杆菌类 变形杆菌属 Proteus 普罗菲登斯属 Providencia 摩根氏菌属 Morganella 变形杆菌属 普通变形杆菌 P vulgaris 奇异变形杆菌 P mirabilis 产粘变形杆菌 P myxofaciens 潘氏变形杆菌 P permeri 二 生物学特性 一 形态1 菌体形态变形杆菌为革兰阴性小杆菌 两端钝圆 大小0 4 0 6 m 1 3 m 有明显多形性 无荚膜 有周身鞭毛 运动活泼 有菌毛 可粘附至植物和真菌细胞表面 但不能与动物或人类细胞粘附 奇异变形杆菌悬浮标本的细胞形态 金属镀膜 24000小杆菌 两端钝圆 普通变形杆菌为革兰阴性杆菌 多数为单个存在 也可见成对或短链排列 周身鞭毛 运动活泼 无荚膜 变形杆菌周身鞭毛运动活泼 2 培养特性 营养要求不高 需氧及兼性厌氧 在固体培养基上呈扩散性生长 可形成以接种部位为中心的厚薄交替 同心圆型的层层波状菌苔 称为迁徙生长现象 在培养基中加入0 1 石炭酸 0 4 硼酸或4 乙醇 或将琼脂浓度增加至5 则抑制鞭毛生长 迁徙现象消失 在SS琼脂培养基上形成的菌落为圆形 扁薄半透明 易与沙门菌菌落混淆 扩散性生长 厚薄交替 同心圆型的层层波状菌苔迁徙生长现象 在SS琼脂培养基上形成的菌落为圆形 扁薄半透明 易与沙门菌菌落混淆 没有迁徙现象 二 生化特性变形杆菌可使各种氨基酸脱氨分解 不具有赖氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶 苯丙氨酸脱氨酶阳性 多数产生靛基质并水解尿素 发酵少数糖类 不产生气体或产生少量气体 变形杆菌属的特性表现为甘露糖阴性 蔗糖 麦芽糖 木糖和蕈糖阳性 明胶酶 脂酶 DNA酶阳性 多数产H2S 三 致病性致病物质有肠毒素和脱羧酶 肠毒素变形杆菌产生的肠毒素 其化学成分为蛋白质和碳水化合物的复合物 具有抗原性 引起中毒性胃肠炎 脱羧酶摩根变形杆菌可产生具有很强催化作用的脱羧酶 使食品中的组氨酸脱羧产生组胺 导致人体过敏性中毒 三 实验室检验 WS T9 1996 1 样品采集 中段尿 脓 痰 血液食物中毒标本 可疑食物 粪便2 增菌培养 样品接种于GN肉汤 36士1 培养24h 3 分离培养分离平板 接种于EMB平板或SS平板 置37 培养18 24h 观察菌落形态特征 典型变形杆菌在EMB培养基上为无色透明 部分蔓延生长 在SS培养平板上形成单个菌落 有的菌落边缘呈扩散状 有粘性 打开平皿时有臭味 将可疑菌落转种三糖铁斜面 37 培养24h观察结果 EMB培养基上为无色透明菌落 SS培养基上形成单个菌落 菌落中心呈黑色 有粘性 打开平皿时有臭味 血平板上形成无色透明菌落迁徙现象明显 不溶血 4 初步鉴定将三糖铁培养基上乳糖反应阴性 硫化氢阳性或阴性的菌株接种尿素和苯丙氨酸鉴定培养基 37 培养24h 变形杆菌二者均为阳性 变形杆菌易与沙门氏菌混淆 但变形杆菌能够水解尿素 三糖铁结果 K A产H2S尿素分解阳性 5 生化试验经初步鉴定符合变形杆菌特征菌株 按表3 8 1 3 8 2 3 8 3 3 8 4中项目进行生化鉴定试验 并判定种属或种群 也可用API20E和全自动微生物分析系统进行生化鉴定 奇异变形杆菌API20E结果 API20E报告单奇异变形杆菌 6 变形杆菌菌数的测定在变形杆菌食物中毒诊断检验时 需要对可疑食物进行变形杆菌活菌计数 常采用近似计数法 将检样在研钵中研磨制成悬液后 用生理盐水对原样品进行10 2 10 3 10 4 10 5等稀释度的稀释 分别移取各稀释度的悬液0 1ml接种于琼脂斜面底部的凝结水内 但勿接触培养基斜面表面 37 培养24 48h 观察生长状况 变形杆菌可自下而上弥漫生长 以出现生长的最高稀释度乘以10 则为每克检样中变形杆菌的最近似数 7 血清学实验在食物中毒诊断和判定中 需要对来自可疑食物与患者的菌株进行血清型别鉴定 以判定其同源性 如果没有分型因子血清 可做患者血清效价和交互吸收试验 如果这两个实验不能做 至少应该将待试菌株分别点种在普通营养琼脂平板的两端 待两侧的菌株蔓延生长到平板中间 菌