PAK与PKA激酶磷酸化相同底物与肿瘤.doc

PKA与PAK1激酶磷酸化相同底物与肿瘤 摘要：PKA和PAK1是哺乳动物体内普遍存在的两种蛋白激酶，它们可以通过多种途径对细胞的生长、增殖、分化等过程产生重要的影响。PAK和PAK1主要是通过磷酸化的作用对细胞的多条的信号传导通路的激活或者抑制状态进行调节，从而影响细胞的一系列的生化过程。最新的研究表明，PKA和PAK1可以通过对同一底物进行磷酸化来影响细胞信号传导通路，而这一反应与肿瘤的发生有密切的关系。现对PKA和PAK1磷酸化同一底物与肿瘤的发生予以综述。关键词：PKA, PAK1, 蛋白激酶，肿瘤，磷酸化Abstract Protein kinase A(PKA) and PAK1 are two important protein which are very ordianry in the animals cells. They play an important role to the behaviour of a cell such as cell division, motility and differentiation.PKA and PAK1 can regulate the activety of the cell siganal conduction through phosphorylation.So that a sevious of the behaviours of a cell are affected.The recent study have indicated that PKA and PAK1can phosphorylate a same substrate and the siginal conduction is regulated through which tumor could occur.PKA and PAK1could have an affect on the cell division, motility and differentiation though the progress of phosphorylation and could lead to the formation of tumor.Now ,we will have a review on that .Key words: PKA ,PAK1,protein kinase ,tumor,phosphorylation PKA和PAK1是动物体内存在的两种重要的蛋白激酶，它们的活性对细胞内的多种生物反应都有重要的影响，尤其是对细胞的生长、增殖、分化等过程具有重要作用。PKA和PAK1可以通过磷酸化多种受体，激活细胞内外的细胞传导通路，从而对细胞的一些重要的反应产生重要的调节作用。在我们所知的细胞信号传导通路中，PKA和PAK1与雌激素受体通路、MERLIN蛋白通路以及MAPK通路具有密切联系，并与肿瘤的发生有关。我们就PKA和PAK1对这些通路的作用予以综述。1. PKA和PAK1的生物学结构和生物学作用PKA和PAK的生物学的结构与它们的生物学的作用具有密切的关系，对于它们的化学结构的研究能够让我们非常清晰的认识这两种蛋白激酶。因此，首先让我们关于PKA和PAK的结构和它们的生物学的大体的作用进行简单的认识。1.1 PKA的生物学结构和生物学作用 蛋白激酶A（protein kinase A-PKA)又叫3，5-环腺苷酸( cAMP)依赖性蛋白激酶( cAMP-dependent protein kinase)，是Kerbs等人在继sutherland等人提出cAMP第二信使的概念之后，在研究糖原的代谢过程中发现的。它是一种苏氨酸/丝氨酸类蛋白激酶，是普遍存在于动物体内的一种蛋白激酶。蛋白激酶A作为主要的蛋白激酶系统之一，在细胞的增殖和转化中具有重要的调节作用 1 。 PKA 由四聚体( C2 R2 )组成， 其中 2个为催化( C)亚基， 2 个为调节( R)亚基，全酶的分子量为150170kD。他们的C亚基是相同的，只有R亚基稍有不同，分为R I和R，对应有有 PKA- 和 PKA- 两种类型，PKA- I主要分布在细胞质中， 与生长增殖有关， 而 PKA- 主要被锚定在亚细胞器上， 与分化有关2。C亚基具有激酶的催化活性R亚基具有和cAMP的结合部位，具有调节功能。目前发现C亚基有三种亚型Ca ，Cb和Cr，R I和R各自又有a，b两种亚型，即R 1 a、R Ib、Ra仅和Rb。其中R Ia仅与肿瘤的发生发展关系密切。 PKA广泛存在于各组织中，其中I类PKA主要存在于非神经细胞，尤其在骨骼肌和心肌中的含量更为丰富，一般主要存在于细胞质中。类PKA似乎主要存在于神经细胞的各个亚基细胞组分中。研究证明，多种信号转导通路都能够激活PKA的活性，但是它们都具有大致相同的途径，信号转导激活PKA的基本过程是细胞因子通过Gs蛋白激活AC,AC催化三磷酸腺苷转化为环磷酸胸苷 ，cAMP通过促进PKA的调节亚基与催化亚基分离从而激活PKA。 图：非活性的 PKA 全酶结合 cAMP 释放出活性的催化亚基51.2 PAK1的生物学结构和生物学作用PAK1也是一种保守的丝/苏氨酸激酶，p21-激活激酶-1基因定位于人类染色体11q13.5-q14区 3，研究表明这一激酶与肿瘤的发生具有一定的关系，虽然具体的机制还不太明确，但是， 它可能参与了细胞骨架调节、 细胞凋亡和细胞转化等多种生物学过程。PAK1是最早被鉴定的RHO GTP酶( RHO GTPases) 下游效应分子 4， 在生长因子介导下，其可使细胞骨架重构，进而促进细胞移行和转移。PAK1在正常细胞有丝分裂中起重要作用， 但在乳腺癌、前列腺癌等肿瘤细胞核受体信号途径中功能异常，说明 P A K1在正常组织发育和肿瘤演进中均起重要作用5 。研究证实， P A K1与乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌的侵袭和转移密切相关 6 ， 其机理是具有激酶催化活性的P A K 1 突变体可以通过促分裂原活化蛋白激酶( MAPK) 途径促进乳腺癌细胞在软琼脂中的不依赖支持物生长； 另外， 抑制蛋白激酶A( PKA) 可促进细胞非锚定式生长，亦是通过生长因子-PAK -MAPK信号诱导的级联反应。一般认 为PAK1通过与Rac1和Cdc42结合方能被激活， 在正常细胞内如抑制 PKA的表达，则可以抑制PAK1与 Rac1和Cdc42，说明 PAK1 引起细胞向肿瘤表型转变可能和PAK1与其特异性底物结合功能异常有关。1.3PKA和PAK1的关系 PKA和PAK1作为细胞体内普遍存在的两种蛋白激酶，它们可以通过多种途径调节细胞的生长、分化、凋亡等生物学活动。PKA和PAK1都是保守的丝/苏氨酸激酶，它们都参与细胞的多种代谢过程，且已证明PKA和PAK1的活性与肿瘤的发生有重要的联系。相关文献已经证实PKA能够调节PAK家族激酶活性，即PAK1是PKA的下游的效应分子，PKA可以磷酸化PAK1从而对PAK1的活性进行调节，而PAK1反过来也可以作用与PKA对PKA的活性进行负性的调节，PKA和PAK1这两种激酶可以相互作用共同来调节细胞内多种反应的进行，能够对细胞的多条信号传导通路进行调节，因此说二者之间具有紧密的关系。 2. 与PKA和PAK相关的细胞通路以及与之相关的肿瘤的发生 PKA和PAK1可通过多种途径对细胞的信号传导产生影响，对于不同的通路通过不同的方式来实现，我们就处于科学研究最前列的几条通路进行介绍。2.1 雌激素受体通路与肿瘤2.1.1 雌激素受体简述 目前发现的雌激素核受体包括两种亚型：ERa和ERb，二者分别由不同的基因编码，在生物学特性上存在许多的差异：ERa主要分布在一些通常认为有雌激素效应的组织，如子宫、乳腺、胎盘、肝脏、中枢神经系统、心血管系统和骨组织，这些组织含有较多的ERa，可以诱导雌二醇(E2)敏感基因的表达。ER则主要分布在前列腺、睾丸、卵巢、松果体、甲状腺、甲状旁腺、胰腺、胆囊、皮肤、尿道、淋巴组织和红细胞中，在这些组织中ERa表达量很少或者无法检测出来。在同一种组织中两种受体也可以同时表达，但是可能具有细胞特异性，而且表达水平也存在着差异。雌激素受体包括4个功能域：AF-1(activation func-tion一1,活化功能域1）、DBD(DNA binding domain，DNA结合域）、LBD(1igand binding domain，配体结合域）及AF-2(transcription activation function-2，活化功能域2）。AF-1(activation func-tion一1)功能域能够激活相应基因的转录，而且不依赖于配体的结合。DNA结合区(DNA binding domain，DBD)含有一个双锌指结构，每两个锌原子与四个半胱氨酸残基结合，形成1个指状突起。配体结合域(1igand binding domain，LBD)主要是调节配体与雌激素受体的结合、受体的二聚化及参与敏感基因表达的激活7。激素依赖转录活化功能域(transcription activation function-2，AF-2)，两种受体的氨基酸序列在这一区域存在较大的差异，大约只有56的相同氨基酸序列，这一差异决定了二者在配体类型上的相似性和差异性。 ER受体的结构示意图82.1.2 PKA和PAK1对雌激素受体磷酸化的作用机制我们关于PKA和PA1的磷酸化对于肿瘤的发生主要是对于雌激素受体a（ERa）的磷酸化与肿瘤的关系。我们都知道，雌激素通过与雌激素受体结合形成二聚体，形成的二聚体能够发挥生物学作用促进细胞的转录翻译过程，从而加速细胞的增殖，促使肿瘤的发生。但PKA和PAK就可以通过对雌激素受体a（ERa）的丝氨酸的305残基的磷酸化作用，可以激活雌激素受体的活性，从而就可以促进细胞的增殖，和雌激素与ER受体结合能起到相同的作用。PKA和PAK1这两种蛋白激酶都可以对ERa的丝氨酸的305残基进行磷酸化8。PAK1是通过和AF-2领域的交互作用对ERa的丝氨酸的305位点进行磷酸化的，对ERa的超激活实验中，激活的Pak1能提高Era的活性；在几个癌症患者的体内发现了Pak1的表达和活性都有提高；用转基因老鼠可发现过度活化的Pak1诱导乳腺细胞的增殖，这些都说明了Pak1的异常表达可能会导致肿瘤发生。而PKA是把ERa作为它的磷酸化的底物来进行磷酸化作用而发挥作用的。有实验也证明了这两种蛋白激酶的磷酸化作用都是在特定的细胞环境下配体非依赖型的，也就是说和雌激素没有关系9。而且还得出了在没有雌激素存在的情况下，磷酸化作用就完全就可以激活ERa的活性；辅激活物SRC-1还可以大幅度提高这一磷酸化作用，从而大大提高ERa的激活的水平。再者，对于ERa的磷酸化作用并不影响激素与ER形成二聚体这一过程，并且有实验证明了用PKA或PAK1的作用后细胞的增殖的速度大大的加快了。因此，我们得出，PKA和PAK1的磷酸化作用可以替代雌激素的作用，使细胞的增殖的速度加快，从而诱导肿瘤的发生。这对于肿瘤的治疗具有非常重要的意义，能够改变以前单纯的激素的治疗方法。2.1.3 雌激素受体通路与肿瘤 PKA和PAK1通过对ERa的丝氨酸的305残基进行磷酸化，磷酸化后的雌激素受体就具有了生物学活性，即使不与雌激素结合形成二聚体也能发挥出与雌激素结合后相同的功能，即促进细胞的转录翻译过程，从而加速细胞的增殖，促使肿瘤的发生。因此，这一通路能够诱导肿瘤的发生，对这一通路的研究可以使我们能找到治疗肿瘤的与以前的激素治疗所不同的方法。2.2 Merlin磷酸化的通路与肿瘤2.2.1 Merlin蛋白及与它功能相关的Ezrin蛋白的简述 Merlin（或称Schwannomin）蛋白是ERM蛋白家族中的一员，ERM家族包括merlin蛋白、 埃兹蛋白（zrin）、根蛋白（radxin），膜突蛋白（moesin）。Merlin蛋白是细胞骨架蛋白，其结构包含三个功能结构域，氨基端，羧基端和中间的螺旋结构，且在氨基端含有一个约300个氨基酸的保守序列，称之为FERM区8，该区是直接和细胞质膜结合的部位，可与包括CD44在内的细胞表面糖蛋白及细胞间黏附分子等相互作用9。从功能方面来说，merlin蛋白可以连接细胞骨架和特定的细胞膜蛋白，从而影响肌动蛋白重组活性。Merlin蛋白具有休眠和活化两种状态，只有处于活化状态时，merlin才能实现其肿瘤抑制功能10，但Merlin蛋白的休眠和活化两种状态在一定的条件下是可以相互转变的。merlin蛋白是第一个被发现具有肿瘤抑制作用的蛋白质，研究发现当其编码基因发生突变时，merlin蛋白失活，其生长抑制功能丧失，最终导致肿瘤的形成。目前的研究认为merlin蛋白是通过与各种细胞蛋白和重要因子进行相互作用，从而起到调节生长和抑制肿瘤形成的作用。其中，merlin蛋白第518位丝氨酸是影响merlin活性的重要位点。Ezrin蛋白也是ERM家族成员之一，与merlin蛋白同属于4.1蛋白超家族成员，因此两者之间具有高度的同源性。目前ezrin是ERM蛋白家族中研究最多的一个成员活化的ezrin蛋白具有连接细胞膜与肌动蛋白丝参与控制细胞的形态建成、 黏附、运动及为细胞的增殖和生存转换生长信号等功能。多项研究表明 ezrin的表达水平与多种肿瘤的侵袭力、 转移 、临床预后有密切关系。在生理水平下ezrin蛋白在细胞中有休眠和激活两种状态，ezrin蛋白的活化主要有两种途径：即C端的苏氨酸磷酸化和N端与磷脂酰肌醇二磷酸盐的结合。Ezrin蛋白具有多种生理活性，它能参与维持细胞形态和生长的调控，还参与细胞信号的传导，并与细胞之间的粘附有重要的联系，这对于诱导肿瘤的侵袭是密切相关的。Ezrin蛋白还可以阻断病毒的逆转录复制。2.2.2 PKA和PAK1对于Merlin蛋白磷酸化的机制研究表明，Merlin 的磷酸化对于肿瘤起着相当重要的重要。Kissil等人通过实验证明了PKA和PAK1分别可以对merlin进行磷酸化，这两个磷酸化的过程是相对独立的11。Merlin蛋白第518位的丝氨酸可以别磷酸化，磷酸化后的merlin和ezrin结合形成二聚体，从而使merlin从生长抑制因子转变为生长促进因子，促进肿瘤的形成。实验表明，merlin的丝氨酸和苏氨酸残基上能被磷酸化，且磷酸化的状况随着细胞的生长情况的不同而不一样，在细胞密度低的情况下merlin被磷酸化，而在高细胞密度，浆液缺乏，或者细胞间失去粘附性的情况下merlin发生去磷酸化 12。这就与细胞的生长情况相一致了，merlin是生长抑制因子，被磷酸化以后和ezrin结合形成二聚体，成为了生长促进因子，所以在低细胞密度时磷酸化促进细胞增殖，而高细胞密度时去磷酸化发挥抑制细胞增殖的作用。那么，PKA和PAK1是如何磷酸化merlin的呢？PAK1是Rac和Cdc42的共同的下游靶因子，merlin的磷酸化是被活化的Rac和Cdc42所诱导的，但却不能被Rho所诱导。Rac诱导的位点是merlinC末端的518丝氨酸位点 13，这一位点是Rac和Cdc42的共同的下游的靶位点，能被PAK1所磷酸化，且最新的研究表明，merlin能够直接和PAK1作用从而抑制PAK1的活性。这就说明了merlin既能被PAK1磷酸化，即被Rac/Cdc42这条信号转导通路所调控，又能作为这条通路的抑制因子来调节这条通路14。而研究表明PKA的磷酸化作用是通过蛋白AKAPs来实现的，Kissil等的实验证明了merlin通过和PKA的一个调节亚基RI的结合被磷酸化的15，并且细胞内和细胞外的实验都表明merlin可以作为PKA的底物直接被PKA磷酸化16。更进一步说，merlin的丝氨酸518位点的磷酸化能够促进merlin和ezrin的结合作用，这对与肿瘤的形成具有重要意义。2.2.3 Merlin通路与肿瘤Merlin蛋白本是动物体内所存在的细胞的生长抑制因子，它的激活能够抑制细胞的生长、增殖、分化等过程。PKA和PAK1通过对merlin蛋白的丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化作用，使merlin蛋白与ezrin蛋白结合形成二聚体，从而使merlin从细胞生长抑制因子转变为生长促进因子，从而促进肿瘤的形成。和merlin通路有关的肿瘤主要是胰腺癌，前列腺癌，子宫内膜癌等肿瘤，因而对于这一通路的研究可能对这些肿瘤的治疗产生积极的影响。 PKA磷酸化MERLIN蛋白过程162.3 MAPK通路与肿瘤2.3.1MAPK级联信号通路的简述丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）级联信号通路是细胞内重要的信号传导途径，它将细胞外刺激信号传递至细胞核，参与细胞的生长、发育、分化等一系列生理过程，并在细胞的恶性转化和肿瘤的发生发展中起重要作用。17研究表明， 激该通路的外源刺激信号很多， 包括细胞因子、 生长因子、 神经递质、 激素、 细胞应激和细胞粘附等。该通路被活化后可磷酸化核转录因子和其它蛋白激酶、 磷脂酶、 细胞骨架结合蛋白等多种底物， 调节相关基因的转录， 进而参与细胞生长、 发育、 分裂及细胞间的功能同步等多种生理过程。MAPK级联信号通路是广泛存在于各种细胞中的一条信号传导途径，能对多种细胞外刺激发生反应，是将哺乳动物细胞外信号进行整合处理并转导成为一种细胞反应的主要机制。组成 MAPK通路的 MAPK s 及其上游调节激酶共同组成一个功能单位，作为上游输入信号与多种输出信号的桥梁，此功能单位通常由3种激酶组成，它们是MAPK激酶激 酶 ( MAPK kinase kinase ，MKKK)、MAPK激酶 ( MAPK kinase ，MKK) 、MAPK，它们的反应顺序是MKKK一MKK一MAPK,这样就建立了一系列激酶级联反应18。MAPK可被特定的MEK在苏酪氨酸双位点磷酸化和激活 ，MEK又可被特定的MEKK在苏丝氨酸双位点磷酸化和激活。然而每一种MEK可被至少一种ME K K激活，每一种 MA P K又可被不同的MEK激活，因而增加了MAP K信号转导的复杂性，也使 MAPK级联反应构成一复杂的调节网络。MAPK又称ERK( extraeelluar - regulated kinase ) ，被MAPKK磷酸化后有3种可能的去向：1 )停留在细胞质中，激活一系列其它蛋白激酶；2 )在细胞质中使细胞骨架成分磷酸化；3 )进入细胞核，通过磷酸化转录因子，调控基因的表达18,19。根据MA P K活性环内的Thr - X-T yr序列的不同，哺乳动物细胞中MAPK通路可分为ERK，c-J u n氨基端激酶( c-Jun N-ter minal kinase ，JNK) 应激活化蛋白激酶 ( st rss actived protein kinase，SAPK) ， p38MAPK和ERKSBMK1( big MAP kinase1 )等亚族。以上几种MAPK均在蛋白激酶VIII亚区得苏氨酸和酪氨酸位点被双重磷酸化，从而发挥其信号转导通路的生物学效应。而PAK和PAK1作为这些激酶的磷酸化的激酶对于MAPK信号转导通路起到重要的作用。2.3.2 PKA和PAK1磷酸化对于MAPK激酶磷酸化的机制 与细胞外基质的粘附能够传达位置和形态的许多信息从而能够影响细胞对于可溶性因子的多种反应，这样细胞的粘附就能调节细胞的多种行为21-23。而对于MAPK级联反应的活性的影响就属于粘附介导的细胞活性的调节。我们发现了在非粘附细胞中用生长因子片段刺激后，酪氨酸受体磷酸化、GTP负载Ras会高效的发生，这样一来，激酶Raf，MEK和MAPK的下游就被阻滞了24-25。PKA在许多种的细胞中都是增殖的阻滞因子，活化的PKA能够分解细胞骨架26-27，而最新研究表明，一个完整的细胞骨架，特别是皮层和外层得肌动蛋白的结构对于生长因子对MAPK的锚定依赖的信号转导是特别重要的28。这就说明PKA1对于MAPK通路的调节具有重要的作用。进一步的研究表明，在非粘附细胞中的生长因子诱导的MAPK信号传导通路能被具有活性的Cdc42所修复，Cdc42属于Rho酶家族的一种GTP酶，能够调节皮质肌动蛋白的结构29。认为Cdc42的潜在的效应物是PAK1，PAK1能够被Cdc42和Rac所激活来调节细胞的形态，通过改变皮质的肌动蛋白30。而且，PAK1也能够直接的调节MAPK通路的组成来调节这一通路，特别是调节Raf和MEK这两个酶的活性，此过程是通过PAK磷酸化这些酶来实现的31-32。这说明了 PAK1对于MAPK通路具有重要的调节作用。并且有实验证明，PKA和PAK1之间可以通过相互之间的作用，来对这一通路进行调节，实验说明：在细胞中，PKA可以调节PAK1的活性。关于MAPK通路的最新的研究有如下的结论：1.抑制PKA的活性能够激活MAPK通路的活性，且这一过程是瞬时的。2.细胞与细胞外基质的分离能激活PKA1的活性，而PKA能够分解细胞骨架的肌动蛋白。3.抑制PKA的活性在与细胞外基质分离的细胞中能够阻碍酪氨酸的脱磷酸化作用并阻碍FAK1和paxillin的分离，这说明了抑制PKA的活性可能延迟分离诱导的粘附相关蛋白复合物的失活和分解，这可能调节MAPK通路的效率。4.活化的PAK1能够促进粘附非依赖MAPK信号传导通路的传导，而在细胞中，PKA可以通过磷酸化PAK1来抑制PAK1的活性。5.PKA1的活性的抑制和PAK1的激活通过协同作用来共同调节MAPK这一细胞信号传导通路，而非单纯的影响，它们之间通过影响多条信号传导通路来调节MAPK这一通路33。2.3.3 MAPK通路与肿瘤 MAPK级联信号通路是细胞内重要的信号传导途径，该通路被活化后可磷酸化核转录因子和其它蛋白激酶、 磷脂酶、 细胞骨架结合蛋白等多种底物， 调节相关基因的转录， 进而参与细胞生长、 发育、 分裂等活动。PKA和PAK1是通过不同的途径对这一通路产生调节作用，从而对肿瘤的形成产生一定的影响。如下图所示，PKA和PAK1调节MAPK通路的活性，能够对多种的肿瘤都产生一定的影响。因此，对这一通路的研究能够使我们对多种肿瘤的治疗提出全新的思路。 PKA 和PAK1与MAPK通路的关系 333. 小结与展望 目前的研究认识到PKA和PAK1的磷酸化作用对于多条的细胞信号传导通路都具有相当重要的作用，它们的磷酸化作用能够激活多条细胞信号传导通路的活化，从而影响细胞的生长、增殖、分化的过程，对生物体内多种酶的活性的激活都具有重要的作用。最新的科学研究表明，PKA和PAK1的磷酸化作用与肿瘤的发生、发展有密切的联系，因此，未来对于PKA和PAK1的研究主要发展方向是在肿瘤这一领域，PKA和PAK1磷酸化的研究对于今后肿瘤的治疗具有重要的意义，它可能从与现在不同个角度来提出最新的治疗方法，从而达到治疗效果。未来也可能研究出更过关于PKA和PAK1的信号传导通路的机制，从而对疾病的治疗尤其是对肿瘤的治疗提出更好的方法。参考文献： 1 Nishizuka YStudies and perspectives of protein kinase C Science，1986 ，233 ( 4761 ) ：305 2 Naviglio S，Caraglia M，Abbruzzese A，et al. Expert. Opin.Ther. Targets，2009，13: 83 92 3B a he r i Yarmand R，Mandal M，Talu dker AH ，e t alEtk/Bmx tyrosine kinase activates Pak1 and regulates tumorigenicity of breast cancer cells J BiolChem. 2001276：29403 -29409 4Burbelo PD, Kozak CA, Finegold AA, et al. Cloning, central nervous system expression and chromosomal mapping of the mouse PAK-1 and PAK-3 genes J. Gene JT-Gene, 2009,232(2):209-2155Vadlamudi RK,Kumar R. P21-activated kinases in human cancer J. Cancer Metastasis Rev JT-Cancer metastasis reviews ,2003,22(4):385-393. 6Kumar R, Gururaj AE, Barnes CJ. P21-activated kinases in cancer J. Nat Rev Cancer, 2006, 6( 6) : 459-471. 7Marleen Kok,Wilbert Zwart ,Caroline Holm et al.PKA-induced phosphorylation of ERa at serine 305 and high PAK1 levels is associated with sensitivity to tamoxifen in ER-positive breast cancer.Preclinical Study .Breast Cancer Res Treat (2011) 125:1128 Robin Tharakana, Pierig Leponta, David Singleton et al.Phosphorylation of estrogen receptor alpha, serine residue 305enhances activity .Molecular and Cellular Endocrinology 295,2008 ,7078 9 Vadlamudi RK, Adam L,Wang RA, et al. Regulatable expression of p21-activated kinase-1 promotes anchorage-independent growth and abnormal organization of mitotic spindles in human epithelial breast cancer cellsJ. J Biol Chem ,2008, 275 (46) : 36238-36244. 10 Jung JRKimH，Jeun SS，et a1111 ePhosphorylation status ofmerlin is important for regulating the Ras-ERK pathwayMol Cells，200520(2)：l96 -200 11 Rouleau, G. A, Merel, P, Lutchman, M., Sanson, M., Zucman, J., Marineau,C., Hoang-Xuan, K., Demczuk, S, Desmaze, C., and Plougastel, B. 2008 Nature 363, 515521 12 11. Shaw, R. J, McClatchey, A. I., and Jacks, T. (1998) J. Biol. Chem. 273,77577764 13 12. Shaw, R. J, Paez, J. G, Curto, M., Yaktine, A, Pruitt, W. M., Saotome, I.,OBryan, J. P., Gupta, V, Ratner, N, Der, C. J, Jacks, T, and McClatchey, A. I. (2001) Dev. Cell 1, 63721415. Kissil, J. L., Wilker, E. W., Johnson, K. C., Eckman, M. S., Yaffe, M. B., and Jacks, T. 2003 Mol. Cell 12, 8418491524. Gronholm, M., Vossebein, L., Carlson, C. R., Kuja-Panula, J., Teesalu, T.,Alfthan, K., Vaheri, A, Rauvala, H, Herberg, FW, Tasken, K., and Carpen, O. 2003 J. Biol. Chem.278, 411674117216Kaija Alfthan, Leena Heiska, Mikaela Gronholm ,et al.Cyclic AMP-dependent Protein Kinase Phosphorylates Merlin at Serine 518 Independently of p21-activated Kinase and Promotes Merlin-Ezrin Heterodimerization . The Journal of Biological Chemistry .2004 ,18(2);185591856617Rayala SK, Talukder AH, Balasenthil S, Tharakan R, Barnes CJ,Wang RA, Aldaz M, Khan S, Kumar R P21-activated kinase 1 regulation of estrogen receptor-alpha activation involves serine 305 activation linked with serine 118 phosphorylation.Cancer Res (2006) 66:1694170118Mizoguchi T, Lchimura K, Shinozaki K. Environmental stress response in plants; the role of mitogen-activated protein kinase. TIBTECH,1997,15(1); 151919Jonak C，Ligterink w， Hirt H MAP kinases in plant signal transduction J Cellul .Mol. Life Sci，1999，55( 2 ) :204213 20Marleen Kok , Wilbert Zwart , Caroline Holm et al. Breast Cancer Res Treat, 2011,125:1-12.21Howe, A., Aplin, A. E., Alahari, S. K. & Juliano, R. L. Integrin signaling and cell growth control.Curr. Opin. Cell Biol. 10, 220231 (1998).22Assoian, R. K. & Zhu, X. Cell anchorage and the cytoskeleton as partners in growth factor depend-ent cell cycle progression. Curr. Opin. Cell Biol. 9, 9398 (1997).23 Schwartz, M. A. Integrins, oncogenes, and anchorage independence. J. Cell Biol. 139, 575578(1997).24 Miyamoto, S., Teramoto, H., Gutkind, J. S. & Yamada, K. M. Integrins can collaborate with growth factors for phosphorylation of receptor tyrosine kinases and MAP kinas