大豆磷脂的提取及分析.doc.deflate.doc.gzip.doc

实训二 大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制备与检验 大豆磷脂的提取及含量测定一、 试剂与仪器1、试剂 氯化锌溶液：精确称取氯化锌6.86g，定容于500ml容量瓶中。 大豆市售 无水乙醇-10瓶 磁力搅拌器 对苯二酚溶液：取对苯二酚0.5g，加水适量使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。 钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。本液配制后两周即不适用。 亚硫酸钠试液：取无水亚硫酸钠20g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用新制。 磷酸二氢钾 浓硫酸 过氧化氢 石油醚、 氯仿、甲醇、冰乙酸 20硫酸铵 羧甲基纤维素钠 硅胶GF254 载玻片2、仪器凯氏烧瓶，恒温水浴锅， 滤纸 ； 电热恒温鼓风干燥箱；电热套，天平，分光光度计，刻度比色管，硅胶G板 ，抽滤装置 二、实验操作、大豆磷脂的提取及含量测定1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉2、卵磷脂的提取 称取一定质量的大豆粉末，加入一定体积95%的乙醇，置于不同温度的水浴锅内，一定时间后取出，减压过滤。见下表料液比提取时间提取温度氯化锌1:202.535101:201.540151:152.54051:15235151:151.545101:102.545151:101.53551:2024551:1024010(2) 试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下，一边搅拌一边加入一定量ZnCl2溶液，继续搅拌20min;取出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干;取出产品进行定性检测。 磷含量测定标准溶液的制备：取105干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含磷（P)约为30ug。样品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml与硝酸50ml，缓缓加热至溶液呈淡黄色，小心滴加过氧化氢溶液，使溶液褪色，继续加热30分钟，冷却后，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。测定方法：精密量取对照品溶液与样品溶液各2ml，分别置50ml量瓶中,各依次加入钼酸铵硫酸试液4ml，亚硫酸钠试液2ml与新鲜配制的对苯二酚溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀,暗处放置40分钟，照可见-紫外分光光度法,在620nm的波长处分别测定吸光度，计算含磷量。 硅胶薄层板的制备【实验材料】1器材玻板（5cm20cm或10cm20cm，厚度5mm）、直径10cm乳钵、烘箱、干燥器。2试剂与试药硅胶G，羧甲基纤维素钠。30.4%羧甲基纤维素钠的配制：取4g羧甲基纤维素钠加纯净水使成1000ml，室温浸泡过夜，煮沸使其溶解，补足溶剂减少量，即得。4、药棉5、漏斗6、烧杯7、拉板器（药匙）【实验方法】1、临用前将，04%羧甲基纤维素钠先用棉花过滤，以除去其中的沉淀不溶物(否则铺板有麻点)。2、按硅胶G-0.4%羧甲基纤维素钠溶液（1：2.5）的比例配好研磨均匀，注意不要有气泡，研磨时向一个方向研磨，然后用机械搅拌一段时间除去里面的气泡，再静置半小时就可以铺板了。3、铺板：将研磨均匀的硅胶倾倒于铺板器内，匀速拉过玻璃板。铺板时，拉铺板器的速度不要过快，也不要太慢。（或者将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。）4、涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后，在120烘30分钟（105烘120分钟），取出，置干燥器中贮存，临用时取出。卵磷脂薄层色谱实验【实验材料】1器材10ml量筒、层析缸（大小与所所铺的薄层板相配）、点样毛细管、硅胶G薄层板、显色喷雾瓶、台称、水浴锅、烘箱。2试剂与试药氯仿、甲醇、冰乙酸、甲醇、95%乙醇、硫酸等。310%硫酸乙醇溶液的配制：用量筒量取硫酸10ml，缓慢加至100ml 95%乙醇中，摇匀，放冷，即得。【实验方法】1硅胶薄层板划线；2、取磷脂样品50mg，加入23滴石油醚使之溶解，3、照薄层色谱法，用毛细管吸取上述溶液于硅胶G薄层板上；以在氯仿：甲醇：乙酸：水(85：15：10：3， V/V)为展开剂，展开，取出，记录展开剂的前沿位置，晾干，记下展开剂的位置。4、显色向干燥的薄板喷洒20硫酸铵(加入4ml浓硫酸)，直到薄板变得透明，在220下烘烤20min。5、测算Rf值溶质在纸上的移动速度率可用迁移率Rf值表示，Rf值主要决定于被分离物质在两相间的分配系数。在同一条件下，Rf值是个常数， 不同物质的Rf值不同，这一性质可作为混合物分离鉴定的依据。薄板显色成功后，对不同斑点进行Rf值测算。6、层析结果显色之后每块板上出现的点，其Rf值与文献值相比较，便可知每个点对应的磷脂。 文献中溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰胆碱以及磷脂酰乙醇胺的Rf值分别约为0.1、0.2、0.4和0.9.【注意事项】1、点样基线距底边2.0cm，点样直径为2-4mm，点间距离约为1.5-2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面；2、展开室需预先用展开剂饱和；3、将点好样品的薄膜放入层析缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄膜底边0.5-1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为8-15cm）。 卵磷脂咀嚼片的的制备与检验一、仪器及试剂1、试剂 乳糖-1000g 淀粉 -1500g 微粉硅胶二氧化硅（药用） 硬脂酸镁-500g 卵磷脂粉-1000g（自制） 维生素E-1g2、实验仪器 药筛（16目），单冲压片机，脆碎度测定仪，电子天平，智能崩解时限测试仪;药物溶出度仪二、片剂的制备卵磷脂维E咀嚼片配方如下 （2g片）卵磷脂粉+稀释剂共90g 稀释剂选用甘露醇和淀粉；香精5g助流剂+润滑剂 5g采用正交设计，选用稀释剂比例、稀释剂含量、助流剂与稀释剂比例为三因素，进行正交设计，正交试验表如下：卵磷脂维E咀嚼片配方 乳糖：淀粉稀释剂含量微粉硅胶：硬脂酸镁5:170%1:21:250%5:15:130%5:11:270%1:51:570%5:15:150%1:51:550%1:21:530%1:51:230%1:2制法： 将卵磷脂粉、甘露醇、淀粉、微晶纤维素混合后，以无水乙醇制成颗粒（16目），44干燥，16目整粒，颗粒加入维生素E、香精、微粉硅胶、硬脂酸镁混合后，压片。4、片剂的检查、外观检查随机抽取100片，平铺在白瓷板，置于白炽灯下，用肉眼观察30s，色泽一致，80-100目大小的杂色点不得超过5%，麻点小于5%，并不得有严重花斑或异物。 硬度检查按中国药典2010版规定，用硬度计测定。将药片垂直固定在微调夹头与定头之间，待药片破碎读取指示读数，共测6片，取其平均值。 脆碎度检查按中国药典2010版规定，取药片20片，精密称定后置脆碎度测定仪中，振动4min，除去细粉和碎粒，称重后与原药片比较，其减重率不得超过0.8%。 片重差异检查按中国药典2010版规定片剂的平均重量重量差异限度0.3g 以下+7.5%0.3g 或0.3g 以上+5.0%检查方法：取药片20 片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定各片的重量。每片重量与平均片重相比较，超出重量差异限度的药片不得多于2 片，并不得有