降糖药物的实验设计方案.doc

织对胰岛素不敏感而引起的代谢紊乱性疾病，以慢性高血糖为特征的，属中医“消渴”范畴。其临床表现为血液循环中葡萄糖浓度异常升高、尿糖阳性及糖耐量降低，典型症状为“三多一少”，即多饮、多食、多尿及体重减轻，且伴随有疲乏无力。严重者可发生酮症酸中毒、高渗性昏迷，且易合并多种感染。随着病程的延长，其代谢紊乱可导致眼、肾、神经、血管及心脏等多种组织的慢性病变1世界卫生组织将糖尿病分为四种类型：1型糖尿病、2型糖尿病、其他类型糖尿病和妊娠期糖尿病，虽然每种类型的糖尿病的症状都是相似甚至相同的，但是导致疾病的原因和它们在不同人群中的分布却不同。不同类型的糖尿病都会导致胰腺中的细胞不能产生足量的胰岛素以降低血糖的浓度，导致高血糖症的发生。1型糖尿病一般是由于自体免疫系统破坏产生胰岛素的细胞导致的；2型糖尿病是由于组织细胞的胰岛素抵抗（通俗地说，就是细胞不再同胰岛素结合，使得进入细胞内部参与生成热量的葡萄糖减少，留在血液中的葡萄糖增多）、细胞功能衰退或其他多种原因引起的；妊娠期糖尿病则与2型糖尿病相似，也是源于细胞的胰岛素抵抗，不过其胰岛素抵抗是由于妊娠期妇女分泌的激素（荷尔蒙）所导致的。随着人类社会文明的发展，糖尿病患病率明显增加，且病死率仅次于癌症、冠心病、高血压，已经成为共同面临的主要公共健康问题之一。据世界卫生组织统计，目前全世界糖尿病患者约有3.66亿人，预计在20年内将达到6亿人；2010年调查数据显示中国患病人数为9700万，数量达到世界第一2。当糖尿病患者经过饮食和运动治疗以及糖尿病保健教育后，血糖的控制仍不能达到治疗目标时，需采用药物治疗。按照中西医的划分，降糖药物也分为中药降糖药和西药降糖药。 对于轻、中型糖尿病患者口服降糖药是其治疗的首选药物，在临床上应用广泛。实验材料与方法实验动物：小鼠；实验仪器：分光光度计、台式离心机、恒温水浴锅、天平；实验材料：链脲佐菌素、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖、试管、生理盐水、胰岛素、蒸馏水、注射器；血糖含量的测定方法测定血糖前小鼠禁食12h，断尾取血，3000rpm离心10min。精密吸取20l血浆，加入葡萄糖氧化酶混合试剂3.0ml，混合后置37水浴15min，用分光光度计在505nm处比色。同时，取蒸馏水和标准葡萄糖溶液（5.55mmol/L）各20l作对照，与样品平行试验，用空白管调零，分别读取各管吸光度值。样品管吸光度与葡萄糖标准溶液吸光度比较，计算样品中葡萄糖含量（mmol/L）。计算公式如下血糖（mmol/L）=（样品管吸光度/标准管吸光度） *5.55（mmol/L）100mg/dl=5.55（mmol/L）实验步骤：糖尿病小鼠的造模1、 选取大小形态相似的健康小鼠50只，适应性喂养一周后禁食12h，于注射试剂前测量血糖，记录；2、 将链脲佐菌素溶于柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol，pH4.5），并将溶液配置成1%的注射液，避光、冰浴保存1h；3、 注射前禁食不禁水，一次性小鼠腹腔注射0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液链脲佐菌素造模，注射剂量150mg/kg；4、 分别于造模后第3天，第7天给予模型组小鼠禁食12h，称重，断尾取血；测量小鼠空腹血糖值，空腹血糖值高于11.1mmol/L确定为造模成功，清除模型组中造模不成功的小鼠，对小鼠重新编号；胰岛素对正常小鼠降血糖效果实验1、 选取大小形态相似的健康小鼠20只，随机分为对照组和实验组2组，所有小鼠禁食12h，断尾取血测量血糖含量，并记录；2、 向实验组注射一定剂量的胰岛素， 向对照组注射同等剂量的生理盐水；分别于0.5h、1.0h、2.0h时断尾取血，分别测量所有小鼠的血糖含量，并记录；胰岛素对高血糖小鼠降糖效果实验1、 从模型组中随机选取小鼠20只，随机分为对照组和实验组2组，所有小鼠禁食12h，断尾取血测量血糖含量，并记录；2、 向实验组注射一定剂量的胰岛素， 向对照组注射同等剂量的生理盐水；分别于0.5h、1.0h、2.0h时断尾取血，分别测量所有小鼠的血糖含量，并记录；胰岛素对正常小鼠的耐糖性实验1、 选取大小形态相似的健康小鼠20只，随机分为对照组和实验组2组，所有小鼠禁食12h，断尾取血测量血糖含量，并记录；2、 向实验组注射一定剂量的胰岛素， 向对照组注射同等剂量的生理盐水；给药1.5h后，向所有小鼠腹腔内注射葡萄糖；给药后0.5h、1.0h、2.0h时断尾取血，分别测定所有小鼠的血糖含量，并记录；胰岛素对高血糖小鼠的耐糖性实验1、 从模型组中随机选取小鼠20只，随机分为对照组和实验组2组，所有小鼠禁食12h，断尾取血测量血糖含量，并记录；2、 向实验组注射一定剂量的胰岛素， 向对照组注射同等剂量的生理盐水；给药1.5h后，向所有小鼠腹腔内注射葡萄糖；给药后0.5h、1.0h、2.0h时断尾取血，分别测定所有小鼠的血糖含量，并记录；目前市场上降糖西药大致分为口服降糖药物和注射降糖药物。其中目前国内常用的口服降糖药物以非胰岛素类药物为主，分为非胰岛素类促胰岛素分泌剂类、双胍类、-糖苷酶抑制剂类、胰岛素增敏剂类。其中促胰岛素分泌剂类又分为磺脲类和非磺脲类（格列奈类）。注射降糖药物主要以胰岛素及其类似药物为主。而现代药理研究证明，很多单味中药具有降糖作用。但中医药治疗糖尿病，与治疗其他疾病一样，其特点是重视患者的个体差异性和复方的使用。中医药治疗糖尿病不仅在于降低血糖，更重要的是注重防治糖尿病并发症，起到提高生活质量和延长寿命的作用。研究表明中药类的降血糖药物主要包括黄芩、黄连、地黄等；最近有研究表明，苦瓜可以抑制葡萄糖吸收，促进葡萄糖的利用；具有明显的降糖作用。近年来，桑叶、青钱柳治疗高血糖的研究日益受到重视，青钱柳对于治疗糖尿病是一种值得开发的植物。山药由于可显著降低实验小鼠的血糖，并可明显对抗血糖升高；具有很广阔的开发前景。现代研究发现，桑叶中含有的黄酮类物质能够抑制肠道内胆固醇的吸收，并能改善肝脏的功能。1994年美国糖尿病协会对糖尿病饮食方法的方针提出了新的劝告，指出饮食疗法的目标主要改变饮食习惯，以利于纠正糖尿病代谢异常；合理饮食是糖尿病患者毕生都应该注意的。健康的生活方式是糖尿病治疗的基石，有资料证实，睡眠障碍如睡眠时间减少或维持熟睡困难可增加肥胖或罹患糖尿病的风险，因此除控制饮食外还应减重和持续性的规律运动，保持自信乐观的健康心理状态。这对治疗和控制糖尿病的发生都大有裨益。【参考文献】1汤家铭主编.医学实验动物学2李玉林主编,病理学,第八版3陆英杰，连志成，钟毅，赵自明.30周糖尿病模型大鼠胃排空异常及胃粘膜细胞凋亡的实验研究J.佛山科学技术学院学报，20094黄昕，崔磊，曹谊林.STZ诱导裸鼠糖尿病模型的建立及观察J.Journal of Tissue Engineering and Rrconstructive Surgery.20075吕丹.参麦颗粒降血糖作用研究及机制探讨.沈阳药科大学J.20086黄桂红，陈薇，罗昱澜.链脲佐菌素稳定性对诱导糖尿病小鼠模型的影响J.华夏医学.20097赵大桂，杜伟.社区医院20082010年口服降糖药物应用分析J.实用医院临床杂志.20118何胜，石丽娟，廖维芳，潘裕钊，李文文，朱晓莹，张树球.糖尿病小鼠模型的建立及中药舒糖宝疗效研究J.现代中西医结合杂志.20129徐明生，沈勇根，吴海龙，舒惠国，王文君，上官新晨.青钱柳水提物降血糖作用的研究J.营养学报.200410于传林，朱正光，雷林生，陈娜娜，吴曙光.链脲佐菌素糖尿病模型动物血糖及体征动态的研究J.南方医科大学学报.200811惠秋沙.山药饮料对小鼠的降糖作用的研究J。齐鲁药事.201112谢宁，吴颂，王晓博，关慧波，侯淑峰.糖尿病动物模型研究进展J新乡医学院学报.200713安小平，崔庆荣.黄连治疗糖尿病的研究进展J.甘肃中医.200814梁丹，黎卫冲，覃冬菊，覃玉君，黄秋岸，张树球.糖尿病小鼠模型的建立及中药荔枝核提取液对其治疗的实验研究J.当代医学.200915祈朝阳，宋进展。苦瓜降糖作用研究J.中医药导报.200916李宏，钱永华.桑叶对高血糖大鼠血糖、血脂以及体重的影响J.北方蚕业.200817金颖.中医治疗糖尿病临床研究J中国医疗前沿.201018张雅琴，吴萍萍，向