2012最新版输血科(血库)实验室标准操作规程.doc

医院logoxxx医院血库编号： XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第1页 共1页实验SOP文件目录编号程序文件名称页码XK-SOP-01ABO血型正定型1-3XK-SOP-02ABO血型反定型4-6XK-SOP-03RH D血型鉴定7-9XK-SOP-04RH血型定型10-11XK-SOP-05聚凝胺试验12-14XK-SOP-06盐水配血试验15-16XK-SOP-07微柱凝胶卡式配血试验17-19XK-SOP-08卡式血型鉴定20-21XK-SOP-09卡式抗体筛查试验22-23XK-SOP-10抗体筛查试验（聚凝胺，抗人球蛋白法）24-26XK-SOP-11ABO血型定型试剂质量控制（标准血清）27-28XK-SOP-12ABO血型反定型用红细胞质量控制（国产试剂）29-29XK-SOP-13配血、血型试验标记规定30-33XK-SOP-14标准A、B红细胞制备34-34医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第1页共3页ABO血型正定型1、 实验目的用盐水介质法进行ABO血型系统正定型的鉴定。2、 实验原理红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象，用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体所对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的ABO血型。3、 标本采集3.1、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放1-10范围的标本冰箱保存3天。4、试剂及被检细胞 4.1、抗A、抗B标准血清。 4.2、35%-45%被检红细胞。 4.3、2%-4%被检红细胞。5、设备 5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司、Diana公司产品。 5.2、eppendorf多功能离心机。 5.3、振荡器。6、实验操作 6.1、玻片法6.1.1、取一张破片，分区标注-A、-B及被检者编号、血型。6.1.2、载玻片上-A、-B区域分别加入1滴（-50微升）相应-A、-B标准血清及1滴（-50微升）35%-45%被检红细胞。6.1.3、摇动玻片放置约2分钟。6.1.4、观察并记录结果。6.2、试管法医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第2页 共3页 6.2.1、取2只试管，分区标注-A、-B及被检者编号、血型。6.2.2、在-A、-B试管内分别加入1滴（-50微升）相应-A、-B标准血清及1滴（-50微升）2%-4%被检红细胞。6.2.3、离心，1000rcf/15s。6.2.4、肉眼观察并记录结果。6.3、微板法 6.3.1、取一准备完毕的微板，取合适的两孔分别标注-A、-B及被检者编号、血型。6.3.2、在-A、-B区域分别加入1滴（-50微升）相应-A、-B标准血清及1滴（-50微升）2%-4%被检红细胞。 6.3.3、轻摇微孔板，混匀孔中液体。 6.3.4、400g离心30s。 6.3.5、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣则很快消除。 6.3.6、判读并记录结果。7、结果判定 正定型反定型血型抗A抗BA1细胞B细胞O细胞+A+B+O+AB-A侧凝集，-B侧不凝集，为A型。-A侧不凝集、 -B侧凝集，为B型。 -A、-B侧均凝集，为AB型。 -A、-B侧均不凝集，为O型。8、临床意义8.1、用于临床输血：严重贫血，各种急慢性失血的患者，以及手术前需要备的病人，都必须提前检查血型和交叉配血。因血型不符的输血会造成严重的溶血性输血反应，所以必须要坚持同型输血。8.2、新生儿溶血症：当母亲与胎儿血型不合时，可能会引起胎儿或新生儿的免疫溶血性疾病，多发生于O型母亲孕育A型或B型胎儿时。 医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第3页 共3页8.3、用于器官移植：受者和供者的ABO血型必须相符，否则极易引起排斥反应造成移植失败。8.4、在法医学上还可用于亲子鉴定等。9、注意事项 9.1、试验应在室温（18-25）内进行。 9.2、玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2分钟内判读结果。 9.3、自身抗体可干扰正常结果判读，造成假阳性，应充分洗涤细胞，减少干扰。 9.4、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB型，遇此情况，需要37生理盐水洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。 9.5、当用立即试管法不能显示出正常凝集时，对于弱的反应，需室温延长作用时间15分钟。 9.6、新生儿红细胞和弱的表现型个体，可能会出现假阴性或比正常反应弱的凝集。 9.7、溶血（排除物理溶血）和凝血都是血型抗原抗体反应阳性；首先观察溶血，然后观察凝血。 9.8、微板法中振荡器震荡的调整要严格遵守一定标准，以便保证细胞沉淀悬浮条件的抑制。 9.9、微板法若用读板机判读结果，重要的是红细胞悬液浓度和加入孔中液体的体积标准化，可以使用自动加样器。 9.10、新微板使用前每孔加入一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA），轻轻摇动微板混匀后室温放置10-15分钟，然后弃去孔中的BSA，用水龙头水洗涤微板至少10次，再用蒸馏水或去离子水洗涤微板2次，用力甩去版中的液体，自然晾干，备用。 9.11、本试剂不能用于检测酶处理过的红细胞。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页ABO血型反定型1、 实验目的用盐水介质法进行ABO血型系统反定型的鉴定。2、 实验原理 红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象，用已知标准反定型细胞与被检血清反应，若被检血清与已知型别的标准红细胞出现凝集，则证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。反之，若被检血清与已知型别的标准红细胞不出现凝集，则证明被检血清中不存在与该红细胞抗原相对应的抗体，以此反证被检者红细胞上抗原的型别。3、 标本采集3.1、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放1-10范围的标本冰箱保存3天。4、试剂及被检血清 4.1、A1型、B型、O型试剂红细胞：北京金豪制药有限公司产品。 4.2、被检血清（供、患者血清）5、器材 5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司、Diana公司产品。 5.2、eppendorf多功能离心机。 5.3、振荡器。 5.4、显微镜载玻片，57透明硬塑试管。6、试验操作 6.1、玻片法6.1.1、取一张破片，分区标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。6.1.2、载玻片上Ac、Bc、Oc区域分别加入1滴（-50微升）相应A1型、B型、O型试剂红细胞及同一被检血清2滴（100微升）。6.1.3、摇动玻片放置约2-4分钟。6.1.4、肉眼观察并记录结果。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页6.2、试管法6.2.1、取3只试管，分区标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。6.2.2、在Ac、Bc、Oc试管内分别加入被检血清2滴（100微升）。6.2.3、分别各加50微升相应A1型、B型、O型试剂红细胞。6.2.4、摇动试管，混匀，离心，1000rcf/15s。6.2.4、肉眼观察并记录结果，必要时可借助显微镜观察。6.3、微板法 6.3.1、取一准备完毕的微板，取合适的三孔分别标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。6.3.2、在Ac、Bc、Oc孔分别加入50微升被检血清。 6.3.3、在Ac、Bc、Oc孔分别加入相应的与血清等量的A1型、B型、O型试剂红细胞。 6.3.4、轻摇微孔板，混匀孔中液体。 6.3.5、700g离心30s。6.3.6、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣则很快消除。 6.3.7、判读并记录结果。7、结果判定 正定型反定型血型抗A抗BA1细胞B细胞O细胞+A+B+O+ABAc侧不凝集、Bc侧凝集，为A型。Ac侧凝集，Bc侧不凝集，为B型。 Ac、Bc侧均凝集，为O型。 Ac、Bc侧均不凝集，为AB型。8、临床意义 8.1、复合正定型血型结果的准确性，纠正勿检、漏报，特别是一些具有弱抗原的亚型。此外，还可以纠正某些病人因红细胞抗原弱碱性造成的正定型判断错误。 8.2、发现血清中存在的一些抗体。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页9、注意事项 9.1、玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2分钟内判读结果。 9.2、溶血（排除物理溶血）和凝血都是血型抗原抗体反应阳性；首先观察溶血，然后观察凝血。 9.3、若在反定型试验中，受检者的血清与O血型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统意外的其他血型系统的抗体干扰。 9.4、反定型细胞如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞自发凝集，出现菌落或溶血，则不能使用，若开瓶使用后，每日应使用标准抗A、抗B血型定型试剂检测反定型细胞是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成检定错误。 9.5、新微板使用前每孔加入一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA），轻轻摇动微板混匀后室温放置10-15分钟，然后弃去孔中的BSA，用水龙头水洗涤微板至少10次，再用蒸馏水或去离子水洗涤微板2次，用力甩去版中的液体，自然晾干，备用。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页Rh D血型鉴定1、 实验目的鉴定被检标本的Rh D血型。2、 实验原理 红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。3、标本采集3.1、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集标本。3.2、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放2-8范围的标本冰箱保存3天。4、试剂及被检红细胞 4.1、单克隆混合检测IgM+IgG抗D标准血清。 4.2、35%-45%被检红细胞。 4.3、2%-4%被检红细胞。5、设备 5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司。 5.2、eppendorf多功能离心机。 5.3、振荡器。6、试验操作 6.1、玻片法6.1.1、取一张破片，分区标注-D及被检者编号、血型。6.1.2、在标注的玻片上加入1滴（-50微升）抗D标准血清及1滴（-50微升）35%-45%被检红细胞。6.1.3、缓慢的旋转玻片30秒，并尽可能在2分钟让他们充分混匀。6.1.4、观察肉眼可见凝集并记录结果。6.1.5、当结果为弱凝集或阴性时，要用试管法进行确认试验。6.2、试管法6.2.1、取1只试管，标注-D及被检者编号、血型。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页6.2.2、在标注的试管上加入1滴（-50微升）抗D标准血清及1滴2%-4%被检红细胞悬液。6.2.3、充分混匀，离心，1000rcf/15s。6.2.4、观察并记录结果。6.2.5、当结果为阴性或弱阳性时，要用间接抗人球蛋白法进行弱D抗原的检测。6.2.6、改良的间接抗人球蛋白法检测弱D抗原。 6.2.6.1、取2只试管，标注被检、阳性致敏细胞管。 6.2.6.2、准备洗涤3次的2%-4%被检红细胞悬液。6.2.6.3、在被检试管内加入1滴（-50微升）单克隆混合检测IgM+IgG抗D标准血清及1滴2%-4%被检红细胞悬液。在阳性致敏细胞管内加入1滴IgG抗D及1滴D阳性抗筛细胞。6.2.6.4、充分混匀后，于37孵育60分钟或每管加PEG4滴孵育15分钟。6.2.6.5、用生理盐水洗涤试管中细胞3次，最后一次充分弃去管中液体，保留红细胞扣。6.2.6.6、加入2滴多特异性抗人球蛋白至被检管中，轻轻混匀重悬红细胞扣。6.2.6.7、1000g离心15s。6.2.6.8、轻轻重悬红细胞扣，肉眼观察结果（不能井下观察结果）。6.2.6.9、当出现阴性结果时，使用阳性致敏细胞管IgG致敏的红细胞加入到被检管中进行阴性结果的确认。6.3、微板法 6.3.1、取一准备完毕的微板，取一合适的孔标注-D及被检者编号、血型。6.3.2、在标注的孔中加入1滴（-50微升）抗D标准血清及1滴2%-4%被检红细胞悬液。 6.3.3、轻摇微孔板，混匀孔中液体。此时应避免西标间交叉污染。 6.3.4、400g离心30s或18-25孵育10分钟。 6.3.5、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣则很快消除。6.3.6、观察肉眼可见凝集并记录结果。 6.3.7、当结果为阴性或弱凝集时，要用试管法进行确认试验。7、结果判定 7.1、阳性 出现红细胞凝集，则为Rh（D）阳性，表示被检红细胞上有相应的D抗原存在。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页 7.2、阳性（弱D） 7.2.1、若试管法出现弱的红细胞凝集，可能表明弱D或部分D抗原存在。当出现弱凝集结果时，要通过间接抗人球蛋白试验证实D抗原的存在。 7.2.2、当间接抗人球蛋白试验结果为阳性时，表明被检红细胞上可能有弱D或部分D抗原存在。操作可见6.2.6。 7.2.3、当间接抗人球蛋白试验结果为阴性时，若向阴性被检管内加入阳性致敏细胞后结果为阴性时，证明原来的阴性结果不可靠。 7.3、阴性若试管法不出现红细胞凝集，则为Rh（D）阴性，表示被检红细胞上无相应的D抗原存。但出现阴性结果时，要通过抗人球蛋白法来证实，操作可见6.2.6。 7.4、结果判读注意 当被检红细胞为致敏状态时（DAT阳性），在间接抗人球蛋白试验中加入IgG致敏的对照细胞后结果为阳性，并不能确证弱D抗原的存在。8、临床意义 8.1、诊断RhD、部分D和弱D，防止RhD血型系统引起的溶血性输血反应：Rh阴性患者若输入Rh阳性血液后可刺激机体产生抗D抗体，当再次输入Rh阳性血液时，就会发生溶血性输血反应。如Rh阴性孕妇曾发生过Rh阳性胎儿，当输入Rh阳性血液时，也会发生溶血反应。所以需要输血的患者，要常规进行RhD血型的鉴定。 8.2、预防新生儿溶血症：Rh阴性孕妇生育Rh阳性胎儿时，胎儿的红细胞若有一定数量进入母体，即可刺激母体产生抗D抗体，如母亲再次怀孕生第二胎时，此抗体便可通过胎盘，溶解破坏胎儿红细胞造成新生儿溶血。若孕妇原曾输过Rh阳性血液，则第一胎即可发生新生儿溶血。9. 注意事项9.1 玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2分钟内判读结果。9.2 溶血（非物理性）和血凝都是血型抗原体反应阳性；首先观察溶血，然后观察血凝。9.3 间接抗人球蛋白检测弱D时的结果必须用肉眼观察。并且应有阳性对照证实。9.4 微板法中振荡器震荡的调整要严格遵守标准，以便保证细胞间无交叉污染及充分悬浮。9.5 微板法若用读板机读结果，红细胞悬液浓度和加入孔中液体的体积标准化，可以使用自动 加样器。 9.6 新微板使用前每孔加一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA），轻轻摇动微板混匀后室温放置 10-15分钟，然后弃去孔中BSA，用水龙头水洗涤微板至少10次，再用蒸馏水或去离子水洗涤微板2次，用力甩去板孔中液体，自然晾干，备用。 9.7 Rh血型系统的抗体多由获得性抗体免疫产生，血清中很少有天然抗体，不需要做反定型。9.8 对于受血者不要求弱D的检测。9.9 对于表面结合IgG抗体导致直接抗人球蛋白实验阳性的红细胞不能通过间接抗人球蛋白技术报告血型。9.10 本血清也会漏检不完全D9.11 可导致假阳性阴性的因素：违背操作常规、离心速度不当、不正确孵育温度及时间、使 用污染的玻片、试管及材料。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页Rh血型定型1. 实验目的：检定被检标本的Rh血型。2. 实验原理：红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。3. 标本采集3.1 采血管：采用EDTA抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱保存3天。4. 试剂4.1 抗D、抗E、抗e、抗C、抗c标准血清：Immucor公司产品。4.2 2-4被检红细胞悬液。5. 设备5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。5.2 eppendorf多功能离心机。6. 试验操作6.1 取5只试管，分别标注抗D、抗E、抗e、抗C、抗c及被检者编号、血型。6.2 在标注的试管中分别加入滴（50L）相应的抗D、抗E、抗e、抗C、抗c标准血清及1滴2-4被检红细胞悬液。6.3 充分混匀，离心，1000rcf/15s。6.4 肉眼观察可见凝集并记录结果。7. 结果判定若出现红细胞凝集，表示被检红细胞上游相应的抗原存在。若不出现红细胞凝集，表示被检红细胞上无相应抗原存在。8. 临床意义8.1 判定Rh血型表现型又住院抗体定性和筛选供者。8.2 系统尤其是Rh(D)具有重要的临床意义，因为Rh阴性的个体经过输血或怀孕解除D抗原后，大约有70会产生-D抗体。此抗体可引起输入的Rh阳性红细胞破坏，在怀孕期间，医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页抗-D能影响Rh阳性胎儿，引起新生儿溶血病。常规鉴定Rh血型对于降低溶血性输血反应的发生和提高优生优育方面具有重要意义。9. 注意事项9.1 溶血（非物理性）和血凝都是血型抗原抗体反应阳性：首先观察溶血，然后观察血凝。9.2 对于受血者不要求弱D的检测。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页凝聚胺实验1. 实验目的应用于完全抗体及不完全抗体的筛选检测机交叉配血实验等血型血清检测工作。2. 实验原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子回被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双重离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。其后，加入凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending），Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene）的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。3、采集标本3.1 采血管：采用EDTA抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱保存3天。4. 试剂4.1 厂商：珠海贝索生物技术有限公司4.2 包装量：150 Tests/400 Tests4.3 储存试剂盒打开使用后，可置于室温贮存，未开发者2-25贮存。5. 仪器5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。5.2 eppendorf多功能离心机。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页6. 实验操作6.1 交叉配血实验6.1.1 取试管二支，标明主、次侧，主侧加入病人血清2滴和供者3-5红细胞悬液1滴；次侧加入供血者血清2滴和病人3-5红细胞悬液1滴。6.1.2 各管加入LIM 0.7ml，混合均匀后，在各加Polybrene液2滴，混匀。6.1.3离心，3000rpm/15s，然后倒掉上清。6.1.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。6.1.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合后镜下看结果。6.2 抗体筛检试验6.2.1 取试管3支，注明I、II、III号后，各加入被检血清2-4滴，分别加入1滴3-5筛检红细胞I、II、III至相对应的试管中。6.2.2 各管加入LIM 0.7ml，混合均匀后，在各加Polybrene液2滴，混匀。6.2.3 离心，3000rpm/15s，然后倒掉上清。6.2.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。6.2.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合后镜下看结果。6.3 辅助性抗球蛋白试验本试验主要检测抗-K，由于中国人K抗原阳性率几乎是零，所以一般情况下不需作此试验。6.3.1 接续交叉配血实验步骤6.1.5之后，于试管内Resuspending 1滴。6.3.2 用生理盐水洗涤红细胞1次，离心之后将上清液倒掉，再续加Resuspending 3滴，混合均匀后，再以生理盐水洗涤红细胞3次，并把最后一次的上清液完全地去除。6.3.3 加抗-IgG（单特异性）抗人球蛋白血清2滴，混合。6.3.4 离心1000rpm/15s，观察有无凝集反应。7. 结果判定7.1 交叉配血试验：凝集在30s散开，表示配血结果相合，如凝集不散开，则为红细胞抗原体结合的特异性反应，表示配血结果不相合。7.2 抗体筛检试验：如凝集不散开，抗体筛查结果为阳性，应进一步做抗体鉴定。7.3 辅助性抗球蛋白试验：如有凝集反应表示有抗-IgG抗体，必须进一步做抗体鉴定，供血者的学不适合病人使用。8. 临床意义医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页8.1 确认供血者及受血者的ABO血型的相合性。8.2 可检测出受血者血清中不规则抗体，此抗体可能在抗体筛选试验中由于筛选试剂红细胞缺乏相应抗原而漏检。8.3 即可以检出完全抗体，又可以检出有临床意义的不完全抗体，有效避免了迟发性溶血性输血反应的发生。8.4 筛检自身免疫性溶血性贫血的有效方法。8.5 方法简便，可快速进行完全抗体及不完全抗体的筛选检测及交叉配血实验。尤其适用于在紧急情况下的输血。9. 注意事项9.1 可以用含EDTA之血浆代替血清使用。9.2 若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，需多加4-6滴Polybrene溶液以中和肝素。9.3 本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。9.4 若试剂使用前为低温贮存，请回复室温在操作。9.5 加做辅助抗球蛋白试验，目的是增加检测抗-K的敏感性，对检测其他红细胞抗体无帮助。故本实验室不用此步骤。9.6 在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37水浴中，轻轻摇动试管混合，并在30s内观察结果。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页盐水配血试验1. 实验目的应用于完全抗体（IgM类血型抗体）的筛选检测工作。2. 实验原理天然IgM类血型抗体与对应红细胞抗原在室温下的盐水介质中出现聚集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞（主侧）以及受血者红细胞与供血者血清（次侧）之间有无凝集现象，判断受血者与供血者之间有无ABO血型不合的情况。3. 标本采集3.1 采血管：采用EDTA抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集血标本。3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱保存3天。4. 材料4.1 3%-5%供者红细胞生理盐水悬浮液。4.2 3%-5%病人红细胞生理盐水悬浮液。4.3 献血员血清。4.4 患者血清。4.5 0.9%生理盐水。5. 仪器5.1 血型血清学试验离心机：久保田公司产品。5.2 eppendorf多功能离心机。6. 实验操作6.1取试管二支，标明主、次侧，主侧加入病人血清2滴和供者3-5红细胞悬液1滴；次侧加入供血者血清2滴和病人3-5红细胞悬液1滴。6.2 混匀，离心，3000rpm/15s。6.3 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集。7. 结果判定凝集散开，表示盐水配血结果相合，如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合反应，表示医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页配血结果不相合。主、次侧任何一侧发生溶血或凝集，表示不相和。8. 临床意义8.1 能检出ABO血型不配合的完全抗体，此方法只能检查出IgM性质的完全抗体，但可漏检IgG性质的不抗体。8.2 用于鉴别抗体性质的检测诊断。9. 注意事项9.1 盐水配血实验阴性但有输血史或妊娠使的病人，必须应用聚凝胺介质法，抗球蛋白介质法或酶介质法进行交叉配血试验。9.2 实验中遇到缗钱状凝集时，可将血清适当稀释后进行实验。在显微镜下观察到缗钱状凝集时加1滴生理盐水通常也可以消除。在做试管试验时发现缗钱状凝集，可将试管离心，倾去上清液，沥干，再加2滴生理盐水，重悬，假凝集会消失，真凝集不会消失，严重的可重复一次，或者在37孵育前加1-2滴生理盐水，孵育过程中轻轻摇动数次。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页微柱凝胶卡式配血试验1. 实验目的为保证临床安全输血，对既往史有输血、妊娠、血液病及输用过血液制品的所有受血者和供血者及孕妇等机械常规检测不完全抗体，以及应用于能确定抗原与相应抗体是否相容的交叉配血方法。2. 实验原理微柱凝胶免疫反应的本质与红细胞凝集试验一样。通过在微柱凝胶管的反应，红细胞和相应抗体结合后，形成免疫复合物，在一定的离心力作用下通过微柱中含有抗人球蛋白凝胶时，相邻的单体红细胞免疫复合物被抗人球蛋白桥联而出现凝集。凝集团块位于凝胶表面或胶中形成阳性反应；而红细胞未与相应抗体结合，仍为分散的红细胞。在同样离心力下，红细胞通过凝胶间隙沉降到微柱管底部则形成阴性反应。3. 标本采集3.1 采血管：采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱保存3天。4. 试剂4.1 抗人球蛋白检测卡：Diana公司产品，西班牙产。4.2 低离子溶液（DianaSo12）：Diana公司产品。5. 仪器5.1 孵育器：Diana公司产品。5.2 血型血清学试验离心机：Diana公司产品。5.3 判读仪6. 试验操作6.1 实验准备6.1.1 患者血浆/血清6.1.2 患者红细胞：取患者抗凝红血细胞10L加DianaSo12 溶液1ml 配制成1%的红细胞悬液。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页6.1.3 献血者血浆/血清6.1.4 献血者红细胞：取供血者抗凝红血细胞10L加DianaSo12 溶液1ml 配制成1%的红细胞悬液。6.2 实验步骤6.2.1 按规定要求标注配血卡。6.2.2 在主侧孔加入献血者1%红细胞悬液50L，患者血浆/血清25L。6.2.3 在次侧孔加入患者1%红细胞悬液50L，献血者血浆/血清25L。6.2.4 在专用孵育器上孵育15分钟。6.2.5 离心。7. 结果判读7.1 阳性反应（4- 1）阳性反应表示反应体系中有相应特异性的抗原抗体，反映强度以4- 1依次减弱。4为红细胞复合物位于凝胶表面，3为大部分红细胞复合物位于凝胶表面，2为大部分复合物位于凝胶中部，1为复合肥位于胶中近底部。7.2 可疑阳性反应（）可与在同一个卡中同时孵育离心的阴性管结果对照，如与阴性管结果有差别，可判为。7.3 阴性反应（）离心后红细胞沉积在凝胶管底部。7.4 溶血反应微柱凝胶管中液体出现清澈透明红色，表示发生溶血（排除机械、人为操作错误等原因）。7.5 混合反应（M）混合反应是指反应体系中存在阳性反应，也存在阴性反应。对于混合反应应视为阳性反应或无效反应，应该应用其他血型学方法进行验证后再出结论。8. 临床意义8.1 确认供血者及受血者的ABO血型的相合性，确定供受者抗原抗体是否相容，保证临床安全用血。8.2 盐水介质只能检出IgM型抗体（主要为ABO系统抗体），对于IgG型抗体，用其他方法才能检出。卡式配血是目前敏感的检测不规则抗体的方法，此抗体可能在抗体筛选试验中由于筛选试剂红细胞缺乏相应抗原而漏检。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页9. 注意事项9.1 实验前应将新卡离心，以免微粒内容物交叉污染。9.2 此实验为免疫反应，灵敏度较高，在使用加样枪或移液器时应避免一切交叉污染。9.3 撕开卡上锡纸膜时，注意避免各微柱间试剂交叉污染。9.4 准确配置各种浓度的红细胞悬液。9.5做配血时应装卡上正确标记病人姓名、病区、献血者血型、编号、配血日期、主次侧等项。9.6 配血准备阶段及配血结束时，应二次核对输血申请单、患者血标姓名、病区、血型编号是否一致，献血者姓名、血型条码与配血报告单是否一致。9.7 准确复检患者正反定型、Rh血型及献血员正反定型。9.8 由于患者红细胞因素造成的非特异性凝集应使用手工间接抗人球蛋白试验或聚凝胺配血试验排除。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页卡式血型鉴定1. 实验目的为保证临床安全输血，对既往史有输血、妊娠、血液病及输用过血液制品的所有受血者和供血者及孕妇等进行常规鉴定血型。2. 实验原理卡式血型鉴定法是抗原抗体反应与凝胶分子筛技术相结合的产物，通过调节葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小使分子筛只允许游离分子通过，从而达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的，即将红细胞和血清加在凝胶的上部反应离心以后，凝集红细胞将受到凝胶的阻碍而停留在凝胶的上部或凝胶中，则证明发生凝集反应为阳性，反之，所有红细胞都停留在凝胶底部，证明未发生凝集反应，则可判为凝集反应阴性。3. 标本采集3.1 采血管：采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱保存3天。4. 试剂4.1 抗人球蛋白检测卡：Diana公司产品，西班牙产。4.2 低离子溶液（DianaSo12）：Diana公司产品。5. 仪器5.1 孵育器：Diana公司产品。5.2 血型血清学试验离心机：Diana公司产品。5.3 判读仪Diana公司产品。6. 实验操作6.1 实验准备6.1.1 标准红细胞：0.8%标准A型、B型的胜利盐水红细胞悬液。6.1.2 患者红细胞：取患者抗凝学红细胞3L加DianaSo12溶液300L配制成1%的红细胞悬液。6.1.3 患者血清。6.2 实验步骤6.2.1 在A1、B孔分别加入50L患者血清，在分别加入50L标准A、B红细胞。6.2.2 在A、B、D、Ctrl四孔内加入患者红细胞悬液25L。6.2.3 离心。7. 结果判读Ctrl管阴性，实验结果可靠。判读结果依据血型分型原则。阳性：对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中。阴性：对管照和检测管的细胞沉淀均在管底；试验失败：对管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验。8. 临床意义准确判别患者血型，尤其是一些红细胞抗原减弱患者的血型。如新生儿、部分老年人、一些白血病或恶性肿瘤患者等，在手工操作鉴定时，凝集较弱难以判别血型，卡式检测法具有较高的灵敏性，尤其在检测具有重要临床意义的红细胞抗体，如抗-E，有更高的敏感性，其结果的阳性度更强。9. 注意事项9.1 实验前应将新卡离心，以免微粒内容物交叉污染。9.2 此实验为免疫反应，灵敏度较高，在使用加样枪或移液器时应避免一切交叉污染。9.3 撕开卡上锡纸膜时，注意避免各微柱间试剂交叉污染。9.4 准确配置各种浓度的红细胞悬液。9.5 判读结果时应肉眼及判读仪同时判别，Ctrl孔为阴性。9.6 实验时应在卡上正确标记病人姓名、病区、操作日期等项。9.7 实验结束时，应二次核对输血申请单、患者血标本姓名、病区、血型编号是否一致。9.8 当正反定型不相符，怀疑为患者抗原减弱时，应在加样后放置5-10分钟再离心。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页卡式抗体筛查试验1. 实验目的为保证临床安全输血，对既往史有输血、妊娠、血液病及输用过血液制品的所有受血者和供血者及孕妇等机械常规检测不完全抗体，以及应用于能确定抗原与相应抗体是否相容的交叉配血方法。2. 实验原理微柱凝胶免疫反应的本质与红细胞凝集试验一样。通过在微柱凝胶管的反应，红细胞和相应抗体结合后，形成免疫复合物，在一定的离心力作用下通过微柱中含有抗人球蛋白凝胶时，相邻的单体红细胞免疫复合物被抗人球蛋白桥联而出现凝集。凝集团块位于凝胶表面或胶中形成阳性反应；而红细胞未与相应抗体结合，仍为分散的红细胞。在同样离心力下，红细胞通过凝胶间隙沉降到微柱管底部则形成阴性反应。3. 标本采集3.1 采血管：采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2 标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所用采血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3 标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放4标本冰箱保存3天。4. 试剂4.1 抗人球蛋白检测卡：Diana公司产品，西班牙产。4.2 低离子溶液（DianaSo12）：Diana公司产品。4.3 抗体筛查细胞：Diana公司产品，或上海血液生物医药有限责任公司产品。5. 仪器5.1 孵育器：Diana公司产品。5.2 血型血清学试验离心机：Diana公司产品。5.3 判读仪6. 实验操作6.1 实验准备6.1.1 标准普细胞：0.8%抗筛I、II、III 号细胞。ml6.1.2 患者红细胞：取患者抗凝学红细胞3L加DianaSo12溶液300L配制成1%的红细胞悬液。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页6.1.3 患者血浆/血清。 6.2 实验步骤6.2.1 在抗筛细胞孔分别加入I、II、III 号抗筛细胞50L，然后再每个抗筛细胞孔内加入患者血清25L。6.2.2 在自身对照孔加入患者1%红细胞悬液50L，患者血清25L。6.2.3 在专用孵育器上孵育15分钟。6.2.4 离心。7. 结果判读7.1 阳性反应（4- 1）阳性反应表示反应体系中有相应特异性的抗原抗体，反映强度以4- 1依次减弱。4为红细胞复合物位于凝胶表面，3为大部分红细胞复合物位于凝胶表面，2为大部分复合物位于凝胶中部，1为复合肥位于胶中近底部。7.2 可疑阳性反应（）可与在同一个卡中同时孵育离心的阴性管结果对照，如与阴性管结果有差别，可判为。7.3 阴性反应（）离心后红细胞沉积在凝胶管底部。7.4 溶血反应微柱凝胶管中液体出现清澈透明红色，表示发生溶血（排除机械、人为操作错误等原因）。7.5 混合反应（M）混合反应是指反应体系中存在阳性反应，也存在阴性反应。对于混合反应应视为阳性反应或无效反应，应该应用其他血型学方法进行验证后再出结论。Ctrl管阴性，实验结果可靠。判读结果依据血型分型原则。8. 临床意义有利于早起发现和确认具有临床意义的抗体，并可以在配血前鉴定此意外抗体，获得充足的时间来选择缺少相应抗原的相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。9. 注意事项9.1 实验前应将新卡离心，以免微粒内容物交叉污染。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页9.2 此实验为免疫反应，灵敏度较高，在使用加样枪或移液器时应避免一切交叉污染。9.3 撕开卡上锡纸膜时，注意避免各微柱间试剂交叉污染。9.4 准确配置各种浓度的红细胞悬液。9.5 判读结果时应肉眼及判读仪同时判别，Ctrl孔为阴性。9.6 实验时应在卡上正确标记病人姓名、病区、操作日期等项，并标注加样孔。9.7 实验结束时，应二次核对输血申请单、患者血标本姓名、病区、血型编号是否一致。9.8 准确复检患者正反定型、Rh血型。医院logoxxx医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第页抗体筛查试验（凝聚胺、抗人球蛋白法）1. 实验目的应用于烦请抗体及不完全抗体的筛选检测等血型血清学检测工作。2. 实验原理2.1 凝聚胺法：同凝聚胺试