动物细胞融合与单克隆抗体的制备很棒.ppt

猜猜我是谁 我就是清脆可口 人见人爱的大白菜 十字花科四强雄蕊白菜甘蓝融合一体 再分化 一 原理 细胞膜具有流动性细胞的全能性 二 诱导方法 离心振动电激 聚乙二醇 三 用途 获得杂种植株 脱分化 阜阳市城郊中学刘恒振 一 动物细胞融合 有些细胞的融合是正常的生命活动 如精子与卵细胞的结合 一 概念 动物细胞融合也称细胞杂交 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 二 动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合原理相同 方法类似 杂交细胞 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 一 动物细胞融合 原理 与植物原生质体融合的基本原理相同 即细胞膜的流动性 诱导方式 物理法 电激 振动 离心 化学法 聚乙二醇 PEG 生物法 灭活的病毒 例如 仙台病毒 仙台病毒 丧失感染性 不感染细胞 保留融合活性 诱导细胞融合 细胞A 细胞B 杂交细胞 灭活的病毒 物理法化学法 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合 形成杂交细胞 细胞膜具有一定的流动性 三 动物细胞融合的应用 1 突破有性杂交方法的局限 使远缘杂交成为可能 2 成为研究细胞遗传 细胞免疫 肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 鼠 鸡 鼠 兔 鼠 猴 人 鼠 人 兔 人 鸡 人 蛙 酵母菌 鸡 人 胡萝卜等 3 重要用途 制备单克隆抗体 怀孕早知道 优生很需要 方法多多妙 单抗最最早 一 什么是抗体 抗体是机体受抗原刺激后产生的 并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 二 单克隆抗体 1 抗体是由何种细胞产生的 浆细胞 效应B细胞 2 抗体是如何产生的 B淋巴细胞 抗原 增殖分化成浆细胞 3 一种B淋巴细胞能产生几种抗体 一种 二 获得抗体的传统方法 1 把某种抗原反复注射到动物体内 然后从动物血清中分离出所需的抗体 2 缺点 产量低 纯度低 特异性差 人们发现 在动物发生免疫反应的过程中 体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体 但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体 要想获得大量的单一抗体 必须克隆单一的B淋巴细胞 形成细胞群 1 请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念 用单个B淋巴细胞进行 无性繁殖 克隆 得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一 特异性强的抗体 这种抗体就叫做单克隆抗体 1 在体外培养的条件下 一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖 不可能 2 我们学过的什么细胞具有这样的能力 癌细胞 3 有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力 细胞融合 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞 癌细胞 能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 三 单克隆抗体的实验原理 动物细胞融合 创始人 米尔斯坦 单克隆抗体 既能迅速大量繁殖 又能产生专一抗体 柯勒 如何大量生产单克隆抗体 利用B淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 应用 动物细胞融合 设计方案 一个B淋巴细胞 只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞 能无限增殖 化学性质单一 特异性强 杂种细胞 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的特点 四 单克隆抗体的制备过程 4 过程 免疫动物 灭活的仙台病毒 种 BB B瘤 瘤瘤 杂交细胞 免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备 细胞融合 杂交瘤细胞的选择培养 杂交瘤细胞的筛选 分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立 单克隆抗体的大量制备 抗原 效应B细胞 筛选 筛选 过程 抗原 小鼠 效应B细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞融合 筛选 多孔培养板单个细胞培养 筛选 能产生特定抗体的细胞群 体外培养体内培养 提取出单克隆抗体 考考你 1 在制备单克隆抗体的过程中 选用哪两种细胞进行融合 为什么选择这两种细胞 浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞能产生单一抗体 但不能无限增殖 骨髓瘤细胞能无限增殖 但不能产生单一抗体 考考你 2 在这过程中进行了几次筛选 分别在哪个步骤进行筛选 两次筛选 第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞 第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞 五 单克隆抗体的应用 可用于作为诊断试剂 有准确 高效 简易 快速的优点 可用于疾病治疗 可用于运载药物 作为运载对应疾病的药物的 生物导弹 生物导弹 单克隆抗体 药物 小结 细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 浆 筛选 瘤细胞 杂交 细胞培养 选出能产生特定抗体的细胞群继续培养 体外培养 体内培养 从培养液或小鼠腹水中取出 单克隆抗体 杂交瘤细胞 既能大量增殖 又能产生特定抗体 单克隆抗体 特异性强 灵敏性高 并可大量制备 植物体细胞杂交 动物细胞融合的比较 三 细胞工程比较 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理 化学法 同左 灭活的病毒 物理 离心 振荡 电刺激 化学 聚乙二醇 诱导方法 使细胞分散后 诱导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜流动性细胞增殖 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 克服远缘杂交不亲和性的障碍 1 动物细胞融合和植物原生质体融合比较 在动物细胞融合中有特殊性的是 A 融合的原理B 融合的优点C 融合的诱导手段D 融合的过程 2 动物细胞融合的目的中最重要的是 A 克服远缘杂交不亲和B 制备单克隆抗体C 培育新物种D 生产杂种细胞 3 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合 得到杂交细胞 经培养可产生大量的单克隆抗体 与骨髓瘤细胞融合的是 A 经过免疫的B淋巴细胞B 不经过免疫的T淋巴细胞C 经过免疫的T淋巴细胞D 不经过免疫的B淋巴细胞 4 单克隆抗体制备过程中 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后 要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D 5 研究单克隆抗体治疗癌症的思路是 A 利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B 以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C 抗癌物质在克隆细胞中大量合成D 单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合 6 只能使动物细胞融合的常用诱导方法 A PEGB 灭活的病毒C 电刺激D 离心7 生物导弹 是指 A 单克隆抗体B 杂交瘤细胞C 产生特定抗体的B淋巴细胞D 在单抗上连接抗癌药物 8 下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中 不正确的是 A B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合 一般不需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B 融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖 又能产生单克隆抗体C 体外培养时 一个效应B淋巴细胞可以产生抗体 但不能无限增殖D 单克隆抗体与常规抗体相比 特异性强 灵敏度高 优越性明显 A 9 单克隆抗体制备过程中 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后 要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D C 在多孔培养板上 在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下 培养得到的细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的 所以产生的抗体必然是化学性质单一的 特异性强的单克隆抗体 这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义 只不过克隆的不是B淋巴细胞 而是杂交瘤细胞 杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖 又能产生专一抗体 思考与探究 1 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同 不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁 然后再融合 动物细胞融合是两个体细胞直接融合 诱导融合方法不同 动物细胞诱导融合所用的方法比植物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导 结果不同 植物体细胞杂交培养成了杂种植株 而动物细胞融合只培养出了杂交细胞 2 制备单克隆抗体时 为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞 哺乳动物感染抗原后 其体内会形成相应的B淋巴细胞 B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原 动物在免疫反应的过程中 每一种B淋巴细胞能分泌一