土壤微生物的采集一般有土样采集.doc

土壤微生物的采集一般有土样采集、增殖培养、培养分离、筛选最后进行纯种分离、毒性试验等。1、采样： 一般在有机质较多的肥沃土壤中，微生物的数量最多，中性偏碱的土壤以细菌和放线菌为主，酸性红土壤及森林土壤中霉菌较多，果园、菜园和野果生长区等富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多。选择一定的土壤环境采集土样，将采集到的土样盛入清洁的聚乙烯袋、牛皮袋或玻璃瓶中。2、增殖培养：为了容易分离到所需的菌种,让无关的微生物至少是在数量上不要增加,可以通过配制选择性培养基,选择一定的培养条件来控制.例如碳源利用的控制,可选定糖,淀粉,纤维素,或者石油等,以其中的一种为唯一碳源,那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长,而其它微生物就可能死亡或淘汰.这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多.3、培养分离： 尽管通过增殖培养效果显著,但还是处于微生物的混杂生长状态.因此还必须分离,纯化.在这步,增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用,而且控制得细一点,好一点.纯种分离的方法有划线分离法,稀释分离法.4、筛 选： 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件,通过三角瓶的容量进行小型发酵试验,以求得适合于工业生产用菌种. 关于菌种的识别，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物。土壤一般取土壤表层5-10cm处土壤，如果土壤有翻动，应更深一点，避免空气中微生物污染。1我们一般都用那种封口袋（塑料的），纸袋不容易保持水分。2当天采当天快递回来，不用加冰袋。3快递一般三天就到，对微生物菌群影响不大。4在冰柜中4度保存，时间不要超过一个月，尽量随采随做。菌株分离（seperation）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需的微生物的过程。工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并迸行代谢产物鉴别。菌种可从以下几个途径进行收集和筛选：（1）向菌种保藏机构和个人索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。国内外著名的菌种保藏机构有：中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM），美国典型菌种保藏中心（ATTC），英国国家典型菌种保藏所（NCTC），日本的大阪发酵研究所（IFO）等。（2）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。（3）从一些发酵制品中分离回的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒糟中分离淀粉酶或糖化酶的产生曲等。该类发酵制品经过长期的自然选样，具有悠久的历史，从这些传统产品中容易筛选到理想的菌株。菌株的分离和筛选一般可分为:采样、富集、分离、产物鉴别、生化鉴定几个步骤。一、从土壤中采样1克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）放线菌（107）霉菌（106）酵母菌（105）藻类（104）原生动物（103） （一）根据土壤特点1土壤有机质含量和通气状况采土样最好的上层是5-25cm、一般每克上中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。总的来说酵母菌分布土层最浅，约5-10 cm；霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。 2土壤的酸碱度和植被状况3地理条件：南方、北方4季节条件 ：7-10 月（二）采样方法用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5-25cm处的土样10-25 g，装入事先准准备好的塑料袋内扎好、北方土壤干燥在10-30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤土质、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离。以免微生物死亡。但有时样品较多，或到外地取样，路途遥远，难以做到及时分离，则可采先用选择性培养基做好试管斜面，随身带走。到一处将取好的土样混匀，取3-4g撒到试管斜面上这样可避免菌株因不能及时分离而死亡。二、根据微生物生理特点取样1根据微生物的营养类型每种微生物对碳、氮源的需求不一样，分布也有差异。若需要筛选代谢合成某种化合物的微生物，从大量使用、生产或处理这种化合物的工厂附近采集样品，容易得到满意的效果。不少