细胞培养基及其配制方法.doc

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分序号化合物名称含量 (mg/L)序号化合物名称含量 (mg/L)1无水氯化钙 .2H 2 O265.0018L-丝氨酸42.002硝酸铁 .9H 2 O0.1019L-苏氨酸95.003氯化钾400.0020L-色氨酸16.004无水硫酸镁97.6721L-酪氨酸72.005氯化钠6400.0022L-缬氨酸94.006无水磷酸二氢钠109.0023D-泛酸钙4.007丁二酸75.0024酒石酸胆碱7.208丁二酸钠100.0025叶酸4.009L-盐酸精氨酸84.0026肌醇7.2010L-盐酸胱氨酸63.0027烟酰胺4.0011甘氨酸30.0028核黄素0.4012L-盐酸组氨酸42.0029盐酸硫胺4.0013L-异亮氨酸105.0030盐酸吡哆辛4.0014L-亮氨酸105.0031葡萄糖1000.0015L-盐酸赖氨酸146.0032丙酮酸钠110.0016L-甲硫氨酸30.0033酚红9.30.0017L-苯丙氨酸66.00DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分序号化合物名称含量 (mg/L)序号化合物名称含量 (mg/L)1无水氯化钙200.0017L-丝氨酸42.002硝酸铁 .9H 2 O0.1018L-苏氨酸95.003氯化钾400.0019L-色氨酸16.004无水硫酸镁97.6720L-酪氨酸钠盐104.005氯化钠6400.0021L-缬氨酸94.006无水磷酸二氢钠125.0022D-泛酸钙4.007L-盐酸精氨酸84.0023氯化胆碱4.008L-盐酸胱氨酸63.0024叶酸4.009L-谷氨酰胺584.0025肌醇7.2010甘氨酸30.0026烟酰胺4.0011L-盐酸组氨酸42.0027核黄素0.4012L-异亮氨酸105.0028盐酸硫胺4.0013L-亮氨酸105.0029盐酸吡哆辛4.0014L-盐酸赖氨酸146.0030葡萄糖4500.0015L-甲硫氨酸30.0031丙酮酸钠110.0016L-苯丙氨酸66.0032酚红15.00DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分序号化合物名称含量 (mg/L)序号化合物名称含量 (mg/L)1无水氯化钙200.0017L-丝氨酸42.002硝酸铁 .9H 2 O0.1018L-苏氨酸95.003氯化钾400.0019L-色氨酸16.004无水硫酸镁97.6720L-酪氨酸钠盐104.005氯化钠6400.0021L-缬氨酸94.006无水磷酸二氢钠125.0022D-泛酸钙4.007L-盐酸精氨酸84.0023氯化胆碱4.008L-盐酸胱氨酸63.0024叶酸4.009L-谷氨酰胺584.0025肌醇7.2010甘氨酸30.0026烟酰胺4.0011L-盐酸组氨酸42.0027核黄素0.4012L-异亮氨酸105.0028盐酸硫胺4.0013L-亮氨酸105.0029盐酸吡哆辛4.0014L-盐酸赖氨酸146.0030葡萄糖1000.0015L-甲硫氨酸30.0031丙酮酸钠110.0016L-苯丙氨酸66.0032酚红15.00【DMEM专题】DMEM细胞培养基（二）配制方法及注意事项配制方法：（1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5的双蒸水。（2）在室温（20到30）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。 （3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0.2到0.3。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： 认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 所用器皿应严格消毒。 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 DMEM各种成分都有什么作用一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。（4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表