遵义医学院大学生创新项目申请书.doc

遵义医学院大学生创新性实验计划项目申 请 书项目名称 HPLC测定杜仲叶绿原酸提取物中槲皮素、芦丁，并研究其降脂与抗氧化活性 申 请 人 陈正平 年级专业 2008级生物工程 导师姓名 李文娜 联系电话 07567623384 E-mail: 填表日期 制表：遵义医学院实验教学管理中心2011年6月2日简 表项目名称HPLC测定杜仲叶绿原酸提取物中槲皮素、芦丁，并研究其降脂与抗氧化活性起止时间2011年 7月至 2012年5月申请经费3000申请人及申请团队学 号姓 名年级所在学院、专业联系电话E-mail 200820114陈正平2008珠海校区生物工程13726241077641918318 200820122冯莹2008珠海校区生物工程13726241269442441761导师姓 名李文娜学院珠海校区职务/职称教研室副主任/副教授E-电 话07567623384一、项目简介（300-500字左右）本课题将研究杜仲叶绿原酸超声提取物中2种黄酮成分：槲皮素、芦丁的降血脂与抗氧化活性及其相关的抗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）作用。目前，心血管疾病是危害人体生命健康最严重的疾病之一，而AS是心血管疾病的主要病理基础。有研究发现，植物中存在的多酚类具有抗AS作用，特别是杜仲中含有大量的多酚类，其中又以绿原酸的潜在抗AS作用较强。杜仲叶中绿原酸的含量相当丰富，且杜仲叶比杜仲皮的价格更为低廉。有研究表明杜仲叶具有降血脂与抗氧化活性，对心血管具有保护作用，但其具体机制尚不明确。通过研究发现杜仲叶绿原酸提取物的降血脂和抗氧化活性均强于绿原酸纯品，所以我们考虑是否其中含有其它药理活性成分，如黄酮类，其它多酚类等成分。因为据文献报道，杜仲叶中的黄酮类如槲皮素等，具有较强的降血脂作用及抗氧化活性，且国内外的相关研究尚少。所以本研究将探索杜仲叶绿原酸提取物中槲皮素与芦丁的降血脂与抗氧化活性及其相关的抗动脉粥样硬化作用。本课题研究结果将有助于更深入了解杜仲叶绿原酸提取物的调血脂与抗氧化及抗AS作用机制，为杜仲叶的开发与利用提供理论依据，为新型抗AS药的发现提供新的思路，并为临床治疗AS等心血管疾病提供新的方法。二、申请理由（包括自身具备的知识条件、自己的特长、兴趣等）经过三年的学习，对相关专业（药理学、生物化学、分析化学等）的基础知识有了一定的了解；通过实验课的学习，掌握了相关实验的基本操作。并且本人对科研的兴趣浓厚，加上本人动手能力较强，与本课题组同学能够相互融洽的沟通协作，所以申报了这次学校2011年度大学生创新性实验计划项目。三、立项背景（研究现状、趋势、研究意义等，参考文献和其他有关背景材料）杜仲作为一种重要的中草药，在中、日、韩三国已被广泛使用。近年来有研究表明，杜仲叶含有与杜仲皮相似的医药成分和营养物质1-3。另外，有研究发现杜仲具有抗AS的潜力。目前的研究表明，杜仲的某些药理活性与抗AS有关，如杜仲叶提取物与杜仲皮相比具有更好的抗氧化活性4，杜仲水提取物具有抑制由Cu2+诱导的LDL的氧化修饰作用1，杜仲叶提取物对喂食高脂肪饲料的仓鼠具有降血脂作用5，杜仲叶水提取物对C57BL/KsJ-db/db小鼠具有降血糖和降血脂的作用6等。现发现杜仲叶中绿原酸的含量相当丰富，并且绿原酸很可能具有保护心血管疾病的药理活性。据文献报道，绿原酸具有降血脂及抗氧化活性 7-16。而且有趣的是导师课题组前期研究发现杜仲叶绿原酸提取物（HPLC测定，绿原酸含量40%）的降血脂与抗氧化活性都强于绿原酸纯品，所以我们将注意力转移到了其中是否含有的黄酮类成分上。因为有文献报道杜仲叶黄酮有降血脂及抗氧化的作用，其中以槲皮素、芦丁的表现较为突出。槲皮素是植物中一种主要的黄酮醇。流行病学研究已经报到了高黄酮类的摄入可以降低冠心病的风险17。有研究发现，槲皮素在高脂饮食诱导AS的兔模型中具有降脂与抗氧化活性，从而发挥其抗AS的性质 18,19 。另外，有研究显示槲皮素代谢产物特别地积聚在损伤主动脉的AS斑块部位。主动脉巨噬细胞中槲皮素代谢产物的积聚可能发挥着重要的抗AS作用20。芦丁也是植物中存在的一类黄酮类21，其具有抗脂质过氧化的作用22, 23。因此本课题设计了对杜仲叶绿原酸超声提取物中的2种黄酮成分：槲皮素、芦丁的降血脂与抗氧化活性及其相关的抗AS作用的研究，以期望探索其提取物降血脂与抗氧化活性均强于绿原酸纯品的原因，为深度开发杜仲叶作为降血脂及抗AS药物提供进一步的理论依据。虽然目前对杜仲叶的相关研究还不是很多，但随着其越来越多的药用有效成份及其药理活性的发现，杜仲叶的研究即将成为生物医学研究的一个热点。此项研究能够进一步探索杜仲叶对心血管系统的保护作用。并为我们将课本上的知识进行吸收与加工，以及将科学技术向现实生产力转化提供了实践的机会。参考文献1Luo J, Tian C, Xu J, et al. Studies on the antioxidant activity and phenolic compounds of enzyme-assisted water extracts from Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliv.) leaves. J Enzyme Inhib Med Chem, 2009,24(6):1280-7.2杜红岩, 李钦, 杜兰英等. 杜仲雄花茶营养成分的测定分析. 中南林业科技大学学报. 2007. 27(6): 88-91.3赖娟华, 徐丽瑛, 饶华, 李玉云. 杜仲叶化学成分和药理作用研究概况. 实用中西医结合临床. 2004. 4(2): 67-68,78.4Xu Z, Tang M, Li Y, et al. Antioxidant properties of Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliv.) extracts and their effects on color stability and lipid oxidation of raw pork patties. J Agric Food Chem, 2010,58(12):7289-96.5Choi MS, Jung UJ, Kim HJ, et al. Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliver) leaf extract mediates hypolipidemic action in hamsters fed a high-fat diet. Am J Chin Med, 2008,36(1):81-93.6Park SA, Choi MS, Kim MJ, et al. Hypoglycemic and hypolipidemic action of Du-zhong (Eucommia ulmoides Oliver) leaves water extract in C57BL/KsJ-db/db mice. J Ethnopharmacol, 2006,107(3):412-7.7Li SY, Chang CQ, Ma FY, et al. Modulating effects of chlorogenic acid on lipids and glucose metabolism and expression of hepatic peroxisome proliferator-activated receptor-alpha in golden hamsters fed on high fat diet. Biomed Environ Sci, 2009,22(2):122-9.8Aoyama T, Peters JM, Iritani N, et al. Altered constitutive expression of fatty acid-metabolizing enzymes in mice lacking the peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha). J Biol Chem, 1998,273(10):5678-84.9Muoio DM, Way JM, Tanner CJ, et al. Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha regulates fatty acid utilization in primary human skeletal muscle cells. Diabetes, 2002,51(4):901-9.10Shimoda H, Seki E, Aitani M. Inhibitory effect of green coffee bean extract on fat accumulation and body weight gain in mice. BMC Complement Altern Med, 2006,6:9.11Cho AS, Jeon SM, Kim MJ, et al. Chlorogenic acid exhibits anti-obesity property and improves lipid metabolism in high-fat diet-induced-obese mice. 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J Biol Chem. 2008. 283(14): 9424-34.21 孟芳, 刘瑞, 白怀等. 槲皮素、芦丁及葛根素抑制HDL氧化修饰作用的研究J. 四川大学学报（医学版）, 2004, 35(6)22 朱建林. 芦丁对去势大鼠脂质过氧化的影响J. 实用预防医学, 2002, 9(6)23 臧志和, 曹丽萍, 钟铃. 芦丁药理作用及制剂的研究进展J. 医药导报, 2007, 26(7)四、项目方案1.课题目标：利用高效液相色谱法同时测定杜仲叶绿原酸提取物中槲皮素与芦丁含量，并与绿原酸标准品进行比较，测定其抗氧化和降脂活性。探讨其抗AS作用机制，并为新型抗AS的开发提供新的思路，为临床治疗AS等心血管疾病提供新的方法。2.课题思路：文献报道杜仲叶绿原酸提取物，具有调血脂及抗氧化作用，导师课题组前期研究发现其降血脂与抗氧化活性均强于绿原酸纯品，所以我们将注意力转移到了其中是否含有的黄酮类成分上。因为有文献报道杜仲叶黄酮有降血脂及抗氧化的作用，其中以槲皮素、芦丁的表现较为突出。因此本课题设计了对杜仲叶绿原酸超声提取物中的2种黄酮成分：槲皮素、芦丁的降血脂与抗氧化活性及其相关的抗AS作用的研究，以绿原酸、槲皮素、芦丁纯品为对照并进行配比研究来探索杜仲叶绿原酸提取物降血脂与抗氧化活性。初步确定药物的成分和调血脂与抗氧化及抗AS的作用机制，为深度开发杜仲叶作为降血脂及抗AS药物提供进一步的理论依据。3.技术路线绿原酸标准品体外降脂与抗氧化活性检测（已完成）杜仲叶绿原酸提取物的降脂与抗氧化活性检测（已完成）对比槲皮素标准品体外降脂与抗氧化活性检测芦丁标准品体外降脂与抗氧化活性检测HPLC同时测定杜仲叶绿原酸提取物中槲皮素与芦丁含量绿原酸标准品，槲皮素标准品，芦丁标准品配比研究统计分析数据，撰写论文五、特色与创新本实验的特色与创新主要有：在前人研究的基础上以价格低廉的杜仲叶代替价格较之昂贵的中药杜仲皮为原料来提取具有生物活性的药用有效成分。通过考察杜仲叶绿原酸提取物中绿原酸、槲皮素、芦丁的含量及其配比研究，初步探索杜仲叶提取物降脂与抗氧化及抗AS的作