细菌鉴定流程.ppt

Groupmembers 环境微生物的检测 受试菌初步鉴定报告 CONTENTS 分离环境 2015年 手指表面 生科院2019室 受试菌的采集步骤 在酒精灯火焰旁 半开皿盖 用手指 洗手前 在平板上轻轻按一下 迅速盖上皿盖 形态及理化特征 菌落形态 在培养基上呈黄色菌落 菌落圆形 凸起 光滑且有光泽 边缘整齐 形态特征 菌落特征 形态及理化特征 显微特征 圆球状 无鞭毛且不可运动 形态特征 鞭毛染色 1 步骤制片 滴菌液 倾斜玻片 室温干燥染色 A液3 5min 水洗 B液冲残水 覆盖染色 出现明显褐色时轻轻水洗 晾干2 结果受试菌无鞭毛不可运动 形态及理化特征 革兰氏染色 形态特征 1 步骤制片 载玻片 火烧去脂 水滴 小 菌 少 薄而均匀 染色 滴加结晶紫染液初染2min 水洗 冲残水后滴加卢戈氏碘液媒染1min 水洗 吸残水后滴加95 乙醇脱色约30s 滴加沙黄染液复染1 2min 水洗 吸干水 镜检2 结果受试菌为革兰氏染色阳性菌 G 金黄色葡萄球菌 受试菌 G 大肠杆菌 形态及理化特征 TITLETITEXT 枯草芽孢杆菌 淀粉水解实验 大肠杆菌 1 步骤 固体淀粉培养基 划线接种 37 培养24h 滴加碘液 均匀铺满平板 观察2 结果 受试菌周围未出现无色透明圈说明不能分泌胞外淀粉酶 受试菌 理化特征 形态及理化特征 变形杆菌 糖发酵实验 大肠杆菌 1 步骤葡萄糖发酵半固体培养基 含指示剂溴甲酚紫 穿刺接种 37 培养24 48h 观察培养基颜色和是否产生气泡乳糖发酵半固体培养基 含指示剂溴甲酚紫 穿刺接种 37 培养24 48h 观察培养基颜色和是否产生气泡2 结果受试菌在培养基中生长 但葡萄糖和乳糖半固体培养基均为紫色 且未裂开 说明受试菌进行葡萄糖和乳糖发酵均不产酸不产气 受试菌 理化特征 变形杆菌 大肠杆菌 受试菌 葡萄糖 乳糖 形态及理化特征 氨苄青霉素抗性实验 1 步骤氨苄青霉素滤纸条 垂直接种 培养 观察 测量滤纸条距菌起始位置的距离2 结果受试菌对青霉素敏感 理化特征 抑菌长度 cm 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 1 试剂条接种和培养a 选择菌落 先确定是否为单一纯菌株 b 向培养盒中加入少许无菌水 保持湿度 c 挑取单菌落至2mL0 85 NaCl aq 已灭菌 中 使菌浓度达到0 5个麦氏单位标准浊度 用同一枪头分别接种盐水菌悬液从NO3到PNPG试剂管 120 L 管 d 将剩余的200 L生理盐水菌悬液加至APIAUX培养基 仔细混匀 注满由GLU至PAC管 250 L 管 e GLU ADH URE三个管用矿物油覆盖f 将API20ESTRIP放入盒中 盖上盒盖 在30 培养24h 理化特征 2 试剂条的结果观察a 培养后 将一滴NIT1和NIT2试剂进入到NO3中 5min后 红色表示阳性反应 阴性反应的 为排除N2的影响 加入锌粉5min 无色表示阳性反应 b 将JAMES试剂加入TRP 立即显现粉红色为阳性反应c 其他见实验结果判定表 11 可编辑 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 理化特征 24h 30 48h 30 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 理化特征 结果 形态及理化特征 API20NE试剂条检测 理化特征 0050202 16sRNA基因PCR结果及网上比对结果 16sRNA基因PCR结果 GCGTGCTTACCATGCAGTCGAACGATGAAGCCCAGCTTGCTGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGAGTAACCTGCCCTTAACTCTGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATAGGAGCGCCCACCGCATGGTGGGTGTTGGAAAGATTTATCGGTTTTGGATGGACTCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGTAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGTTTGTCGCGTCTGTCGTGAAAGTCCGGGGCTTAACCCCGGATCTGCGGTGGGTACGGGCAGACTAGAGTGCAGTAGGGGAGACTGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGGAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCATGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGTTGGGCACTAGGTGTGGGGACCATTCCACGGTTTCCGCGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATGTTCTCGATCGCCGTAGAGATACGGTTTCCCCTTTGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGTTCCATGTTGCCAGCACGTCGTGGTGGGGACTCATGGGAGACTGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGAGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAATGGGTTGCGATACTGTGAGGTGGAGCTAATCCCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCAACGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCACGAAAGTTGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCTTGTGGGGGAGCCGTCGAAG 16sRNA基因PCR结果及网上比对结果 网上比对结果 最相似菌种名Micrococcusluteus最高相似度99 00 结果与分析 由16sRNA基因检测结果与数据库对比与Micrococcusluteus最高相似度99 00 从伯杰氏手册查的藤黄微球菌的特征为 球菌 直径为1 0 2 0微生 细胞单生 对生和向几个方向分裂而形成四联体 不规则的堆团或规则的立方堆形 不运动 生成四联或不规则细胞堆团的菌株形成光滑 凸起并具有整齐边缘的菌落 形成立方堆菌株表面常呈现颗粒状和无光泽 菌落黄色 黄绿色或橙色 有些菌株形成一种能扩散到培养基内的紫色素 在液体培养基中浑浊均匀 随之变清 产生一些细的像颗粒状或粘液状的沉淀 通常从碳水化合物中不产生可察觉的酸 在葡萄糖培养液中最终PH值在6 4 8 2 含碳化合物包括乙酸盐 乳酸盐 丙酮酸盐 琥珀酸盐 果糖 半乳糖 葡萄糖 甘油 麦芽糖 蔗糖 都可氧化为水和二氧化碳 对甘露醇 山梨醇 阿拉伯糖 鼠李糖 核糖 木糖和淀粉的氧化作用都是可变的 不能氧化卫矛醇 藤黄微球菌Micrococcusluteus 结果与分析 藤黄微球菌Micrococcusluteus 可以水解蛋白质 多肽和脂肪 通常不水解精氨酸 通常不还原硝酸盐 有些菌株能生长在含有丙酮酸 作为碳源和能源 谷氨酸 生物素和无机盐的培养基上 另一些菌株需要含某些氨基酸更复杂的培养基 专性好氧 最适生长温度约为35 大多数菌株可在10 生长 有些在45 生长 能在5 NaCl生长 但不常在10 或15 NaCl中生长 大多数菌株对溶菌酶和新生素敏感 对植物和动物不致病 通常存在于土壤 灰尘 水 人和其他动物皮肤上 建议新的模式菌株 CCM169 ATCC44698 NCTC2665 结果与分析 分析 由于API的结果查询需要付费应此因此没有得到其结果 根据16sRNA的查询结果 对比受试菌与藤黄微球菌两则的基本特征 发现都吻合顾初步判定受试菌即为藤黄微球菌 参考文献 NCBIBlast百度百科Wikipedia中国科技资源共享网伯杰氏系统细菌学手册沈萍陈向东主编 微生物学实验 第4版 PeterKa mpfer HolgerC Scholz BirgitHuber EnevoldFalsenandHans Ju rgenBusse O