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分子荧光光谱法 分子荧光光谱法是一种利用某一波长的光线照射试样，使试样吸收这一辐射，然后再发射出波长相同或波长较长的光线的化学分析方法。可以定性和定量的分析。 分子吸收了紫外-可见光的辐射后，它的电子能级跃迁至激发态，然后以热能形式将这一部分能量释放出来，本身又回复到基态。如果吸收辐射能后处于电子激发态的分子以发射辐射的方式释放这一部分能量，再发射的波长可以同分子所吸收的波长相同，也可以不同。 荧光（Fluorescence）：当激发光停止照射后，发光过程几乎立即停止磷光（Phosphorescence）：将持续一段时间分子吸收了紫外-可见光后，基态分子中的电子只能跃迁到激发单重态的不同振动能级上，根据自旋禁律，不能直接跃迁到激发三重态的各个振动能级上。处于激发态的分子不稳定，在较短的时间内可通过不同途径释放多余的能量（辐射或非辐射跃迁）回到基态，这个过程称为“去活化过程”。荧光发射：当激发态的分子通过振动驰豫内转换振动驰豫到达单重激发态的最低振动能级时，单重激发态最低振动能级的电子可通过发射辐射（光子）跃回到基态的不同振动能级，此过程称为 “荧光发射”。磷光发射：三重激发态最低振动能级的分子以发射辐射（光子）的形式回到基态的不同振动能级，此过程称为 “磷光发射”。 由于三重态寿命较长，因而发生振动弛豫及外转换的几率也高，失去激发能的可能性大，以致在室温条件下很难观察到溶液中的磷光现象。因此，试样采用液氮冷冻降低其它去活化才能观察到某些分子的磷光。 处于激发态的分子，可以通过上述不同途径回到基态，哪种途径的速度快，哪种途径就优先发生。 如果发射荧光使受激分子去活化过程与其他过程相比较快，则荧光发生几率高，强度大。如果发射荧光使受激分子去活化过程与其他过程相比较慢，则荧光很弱或不发生。激发光谱：将激发荧光的光源用单色器分光，连续改变激发光波长，固定荧光发射波长，测定不同波长激发光下物质溶液发射的荧光强度(F)，以激发光的波长为横座标，荧光强度为纵座标作Fl光谱图，便可得到荧光物质的激发光谱。荧光光谱：如果保持激发光的波长和强度不变，测量不同波长处荧光的强度分布，将荧光的波长为横座标，荧光强度为纵座标作F- l 光谱图便得到荧光光谱或称发射光谱。荧光光谱的形状与激发波长无关 这是因为分子吸收了不同能量的光量子可由基态激发至几个不同的激发态，而具有几个吸收态。但由于内部转换及振动弛豫的去活化过程速度远大于由高能激发态直接发射光子的速度。荧光的产生都是由第一电子激发态的最低振动能级开始的而和荧光物质分子原来被激发至哪一个能级无关，所以荧光光谱只出现一个荧光带。红外光谱分析法红外线：波长在0.751000m之间的电磁波。这个光谱区间称为红外光区。红外光谱区介于可见光区和微波区之间。通常将红外光谱划分为三个区域：近红外区、中红外区、远红外区。红外吸收光谱是由于物质吸收红外光的能量，引起分子中振动、转动能级的跃迁而产生的。红外吸收光谱是分子的振动、转动光谱。对非线型分子理论振动数=3n-6对线型分子理论振动数=3n-5谱峰数常常少于理论计算出的振动数，这是因为：对称性强的分子不出现红外光谱，谱线简并（振动形式不同，但其振动频率相同，如CO2分子的面内与面外弯曲振动）；仪器分辨率或灵敏度不够，有些谱峰观察不到分子对称度高，振动偶极矩小，产生的谱带就弱；反之则强。基团频率：这是因为连接原子的主要为价键力，处于不同分子中的价键力受外界因素的影响有限，即各基团有其自已特征的吸收谱带。原子吸收分光光度法绝大多数的化合物在加热到足够高的温度时可离解成为气态原子或离子。其中，气态自由原子在外界作用下，既能发射也能吸收具有特征性的谱线而形成谱线很窄的锐线光谱。这种锐线光谱只反映原子的性质而与原子来源的分子状态无关。测量自由原子对特征谱线的吸收程度或发射强度可以推断样品的元素组成和含量，这就是原子光谱法。原子发射分光光度法原子吸收分光光度法原子荧光分光光度法原子吸收分析的主要特点是测定灵敏度高、特效性好、抗干扰能力强、稳定性好、适用范围广（可测定70多种无机元素），加上仪器较简单、操作方便，因而原子吸收分析法的应用范围日益广泛。共振吸收线这一名词有时是在更加广泛的含义下使用的，即凡是由基态引起的跃迁吸收线，不管它跃迁的能级位置如何，都称为共振吸收线。由于各种元素的原子结构和外层电子排布不同，不同元素的原子从基态激发至第一激发态（或由第一激发态跃迁返回基态）时，吸收（或发射）的能量不同，因而各种元素的共振线不同且各有其特征性，所以这种共振线是元素的特征谱线。这种从基态到第一激发态间的直接跃迁又最易发生，因此，对大多数元素来说，共振线是元素的灵敏线。紫外及可见分光光度法紫外吸收光谱相同，两种化合物有时不一定相同，因为紫外吸收光谱通常只有23个较宽的吸收峰，具有相同生色团的不同分子结构，导致不同分子结构产生相同的紫外吸收光谱，但它们的吸光系数是有差别的，所有在比较max的同时，还有比较它们的max。如果待测物和标准物的吸收波长相同、吸光系数也相同，则可认为两者是同一物质色谱分析方法色谱法的本质：色谱柱的高选择性和高效能的分离作用与高检测技术的结合。色谱柱的高效性（谱峰间的距离）和高选择性（谱峰的宽度）：是由组分在两相中的分配系数不同的热力学过程和组分在两相中扩散速度不同的动力学过程决定的。混合组分的样品在色谱柱中分离的依据是：同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在色谱数据集上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。高选择性：主要是用高选择性固定液，使各组分间的分配系数能产生较大的差别而实现保留着不同。高效能：主要是通过色谱柱具有足够的理论塔板数高灵敏性和分析速度快两种色谱法的根本区别在与流动相的状态。气相色谱法多由永久性气体作流动相，色谱图是色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或载气流出体积的曲线图。色谱图是色谱基本参数的源流，可根据色谱图中峰位置点进行定性，根据峰高或峰面积进行定量；根据各峰不同的位置及其峰宽变化状态，可对色谱柱的分离性能进行评价，表征色谱操作条件的优劣。色谱法定量的依据是：组分的重量或在载气中的浓度与检测器的响应信号成正比。在此，响应信号指峰面积或峰高高效液相色谱可以分离分析高极性，高分子量和离子型的各种物质，只要被分析对象能够溶解于可作为流动相的溶剂中并能够被检测，就可以直接进行分析。高效液相色谱仪主要由高压输液泵、进样阀、柱子和检测器等组成。紫外、可见紫外分光检测器液相色谱中应用最广。几乎是一切色谱仪必备的检测器，它的特点