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文档简介

1 酶联免疫吸附实验 ELISA 2 目的和要求 掌握ELISA的原理 操作过程及注意事项了解ELISA实验结果的读取和分析 3 实验原理 借助酶标记抗体 或抗原 在体外与抗原 或抗体 结合 通过相应底物被酶解后出现显色反应 反应颜色深浅与抗原 或抗体 量的多少有关 特点 灵敏 特异类型 双抗体夹心法 竞争法 间接法等 双抗夹心法ELISA 5 竞争法ELISA 6 7 实验材料 BSA包被的测定板酶标抗鼠IgG抗体待检血清 阳性血清 阴性血清洗涤液 PBS 吐温 20底物液 邻苯二胺 OPD 终止液 10 H2S04 8 实验步骤 加入稀释好的待测血清每孔100ul 37 孵育40min 加入100ul酶标抗体 37 孵育30min 洗板3次 每次1min 洗板3次 每次1min 9 实验步骤 加入100ulTMB底物液避光室温孵育15min 终止反应 每孔加1滴10 硫酸 结果观察 10 11 注意事项 加样 应将所加物加在ELISA板孔的底部 并注意不可溅出 不可产生气泡 洗板 每次洗液加入后 应静置1分钟使清洗更加彻底 末次洗板尽量将水甩干 液体全部加完后 可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒 混匀液体 底物有毒性 终止液对皮肤有腐蚀性 尽量避免接触 12 将待测血清1 100稀释后 再做倍比稀释到各孔
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