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文档简介

MPO测试盒 （南京建成生物工程研究所）一、MPO活性测定原理 中性粒细胞中存在MPO，每个细胞所包含的酶的量是一定的，约占细胞总干重的5，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并测定中性粒细胞的数目。其具体原理是：MPO+H2O2复合体；复合体+AH2(供氢体) H20+MPO+A产物。通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄色化合物，在460nm处通过比色测定A产物的生成量，从而推算出MPO的活力及H202减少的量和白细胞的数目。二、试剂组成与配制 试剂一：缓冲贮备液35mlx 1瓶，按需要量配成缓冲应用液，4。C保存。缓冲应用液的配制：贮备液：双蒸水=1：9。试剂二：粉剂2支，临用时每支加缓冲应用液60ml溶解，可37加热溶解，4保存。试剂三：粉剂3支，溶剂6mlx3支，用的时侯1支粉剂倒入1支溶剂中溶解，最好提前一天配制，充分溶解后4以下保存。试剂四：24ml溶液X1瓶，用前放入37以上的水中摇晃使其溶解至透明后方可使用，室温保存。试剂五：粉剂2支，4保存。试剂六：溶液05mlxl支，4保存。显色剂的配制：临用时试剂五粉剂1支加到100ml缓冲应用液中，充分摇匀，待粉剂完全溶解后再加入试剂六O1ml，充分混匀，配好后的显色剂4避光保存。 试剂七：溶液6mlxl支，4保存。三、肺组织匀浆的制备1.取右肺下叶，滤纸吸干污血渗液后-80冻存，以备打成肺组织匀浆测定肺髓过氧化物酶(MPO)活性。2. 取液氮冻存的肺组织，在冷生理盐水中漂洗，滤纸拭干；称取适量肺组织，加试剂二溶液制成5%（肺重量：试剂二溶液体积 =1:19）的肺组织匀浆。 四、操作步骤 1.样本前处理：取5组织匀浆09ml加入试剂三0.1ml，充分混匀后，37水浴15分钟，取出后待测。2.操作表：试剂空白（可以不做）对照管测定管蒸馏水（ml）0.23样本（ml）0.20.2试剂四（ml）0.20.20.2显色剂（ml）33充分混匀，37水浴30分钟试剂七（ml）0.050.050.05混匀，60水浴10分钟，取出后(未测管放于25-37热水中保温，防止反应液出现凝固)立即在460nm处，光径lcm，蒸馏水调零，测定各管的OD值。五、计算公式酶活力单位定义：每克湿片在37的反应体系中H202被分为解
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