DB21∕T 2050-2012 饲料中林可霉素的测定.doc

ICS65.12046DB21辽宁省地方标准DB 21/ XXXXXXXXX饲料中林可霉素的测定超高效液相色谱串联质谱法点击此处添加标准英文译名点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/ XXXXXXXXX前言本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：张秀芹、陈玉艳、杨希国、张天姝、刘凯、何为、刘笑、吕晓惠、杨慧杰、于家丰、李雪兰、刘昕、韩春晓4饲料中林可霉素的测定超高效液相色谱串联质谱法1 范围本标准规定了饲料中林可霉素的超高效液相色谱串联质谱法。本标准适用于饲料中林可霉素的检测。超高效液相色谱串联质谱法检测限为100g/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法GB/T 14699.1 饲料 采样（ISO 6497 ，Animal feeding stuffsSampling,IDT）3 试样的制备按GB/T14699.1采样,选取有代表性的饲料样品至少500g,四分法缩减至100g,经粉碎,全部过1mm孔筛,混匀装入磨口瓶中备用。4 原理试样中林可霉素加入5%甲醇水溶液超声提取20min，提取液经净化过膜后，上超高效液相色谱串联质谱仪检测。5 试剂和材料5.1 试剂和溶液5.1.1 除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水为去离子水，符合GB/T6682一级水的规定5.1.2 林可霉素对照品纯度98.0%。5.1.3 乙腈（色谱纯）。5.1.4 林可霉素标准贮备液(1.0mg/mL):准确称取50mg林可霉素对照品，用超纯水溶解并稀释至50mL容量瓶中，贮存于08冰箱中，有效期3天。5.1.5 林可霉素标准工作液:用流动相稀释并定容,根椐需要现用现配。5.1.6 %的甲醇水溶液：取50mL甲醇（9.1），加水定容至1L。5.1.7 滤膜。5.1.8 1mL注射器。5.1.9 高纯氮气：纯度99.99%。5.1.10 高纯氩气：纯度99.99%。5.1.11 SPE小柱：oasis HLB小柱（3cc）。5.2 仪器和设备5.2.1 离心机：离心转速7000r/min。5.2.2 分析天平：感量0.01g和感量0.00001g。5.2.3 移液器及配套枪头：单道10L1000L。5.2.4 小型粉碎机。5.2.5 超声波发生器。5.2.6 超高效液相色谱串联质谱。5.2.7 涡旋振荡器。6 测定步骤6.1 试样的提取称取试样10.00g0.05g,加入80mL5%甲醇水溶液超声提取20min，7000r/min离心5分钟。上清液过固相小柱（5.1.11）。固相小柱事先分别以2mL甲醇、2mL水活化。将提取液上清2 mL过SPE小柱， 再分别以2mL5%甲醇水溶液、2mL水淋洗，抽干，用2mL甲醇洗脱，洗脱液用适当水稀释，过0.22um滤膜，上机。6.2 超高效液相色谱串联质谱6.2.1 液相条件a)色谱柱：C18 50mm2.1mm，粒径1.7m。或其他等同效果的C18柱。b)柱温：40。c)进样量：5L。d)流动相流速：0.2mL/min。e)流动相洗脱程序：梯度洗脱，见表1。 表1：流动相洗脱程序时间乙腈水05950.350500.735651.420801.55953.05956.2.2 质谱条件a)离子源：电喷雾正离子源b)检测方式：多反应监测。c)脱溶剂气和锥孔气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气。d)脱溶剂气体流量：550L/h。e)锥孔气流量：50L/h。f)脱溶剂温度：400。g)源温度：120。h)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值以自动调谐值计。i)定性离子对、定量离子对及对应的保留时间、锥孔电压和碰撞能量见表2。 被测物名称定性离子对m/z定量离子对m/z保留时间min锥孔电压V碰撞能量eV林可霉素126.12/407.266359.20/407.2662.074028359.20/407.2662.0740206.3 定性测定被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品待测物质的保留时间与对照品工作液中对应的保留时间偏差在2.5%之内，且样品谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的对照品工作液中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，若偏差不超过50%，则可判定为样品中存在对应的待测物。6.4 定量测定在仪器最佳工作条件下进行检测，以外标法进行定量。6.5 平行试验按上述步骤，对同一样品进行平行试测定。6.6 回收率试验本标准线性工作范围为0.1 g/g10g/g。阴性样品中添加对照品工作液，按样品制备步骤操作，测定后计算样品添加的回收率。在0.1 g/g10g/g浓度范围内的添加回收率为60%110%。7 计算试样中林可霉素的含量以毫克每千克计，按以下公式计算： X(m