FoLin-CiocaLteu法测定多酚含量.doc

实验三 FoLin-CiocaLteu法测定多酚含量1目的要求掌握FoLin-CiocaLteu法测定多酚的方法。2方法原理多酚与FoLin-CiocaLteu试剂发生特异性反应，反应产物对特定波长的有最大吸收，且吸光值与多酚的量在一定浓度范围内成线性关系。先以标准酚类物质建立标准曲线，再测定待测样品吸光值，据此可求出待测样品中多酚的含量。3主要实验仪器及材料可见紫外分光光度计、电子分析天平、钨酸钠(Na2WO42H2O)、钼酸钠( Na2MoO42H2O)、磷酸、盐酸、溴水、硫酸锂(Li2SO4)、没食子酸或单宁、碳酸钠。4掌握要点1）掌握FoLin-CiocaLteu在试剂配制方法，2）掌握标准曲线及回归方程的求法；3）掌握样品多酚含量的FoLin-CiocaLteu测定方法。5实验内容1）FoLin-CiocaLteu试剂的配制：将100g钨酸钠(Na2WO42H2O),25g钼酸钠( Na2MoO42H2O) ,700 mL蒸馏水，50 mL 85%磷酸及100 mL浓盐酸装入带回流装置的2000mL圆底烧瓶中，充分混合，文火缓慢回流10h,在加入150g硫酸锂(Li2SO4),50 mL蒸馏水及数滴液溴，然后将烧瓶内溶液开口煮15min，以驱除过量的溴，冷至室温后用容量瓶定容至1000mL，过滤。滤液呈微绿色。吸取10 mL 1 moL/ mL的Na0H溶液，放入100 mL锥形瓶内，加入2滴酚酞指示剂，用上述滤液滴定。当溶液的颜色由绿经紫红到紫灰，到突然转变成墨绿色即为滴定终点。根据滴定所用的滤液量计算其酸度(相当于2 moL/ L HCL溶液)。将滤液稀释到H+浓度为1 moL/ L，此液即为FoLin酚试剂。将其置于棕色试剂瓶内，保存在冰箱中。用前稀释2倍。2） 标准曲线建立标准曲线的制作:用10mL蒸馏水溶解0.5000g没食子酸，定容至100mL，分别移取0，1.0，2.0，3.0，5.0，7.0mL到100mL容量瓶中，定容。从上述不同浓度的标准液中分别移取1.0mL到100mL的容量瓶中，分别加入60mL的水，混合后加入5mL FoLin-CiocaLteu试剂，混合；在0.5min8min内，加入15 mL 20%碳酸钠溶液，用水定容。将上述标准溶液在20放置2h后，在波长为765nm下测定吸光值，绘制标准曲线。 3）多酚含量的测定准确移取提取液1mL于100mL容量瓶中，按照上述标准曲线测定方法，在765nm波长下测定其吸光值。从上述标准曲线计算相应的总酚含量。按以下公式换算总酚含量（以没食子酸得相当值表示：W=CVNM式中：W：总酚含量mgL；C：没食子酸质量浓度mgL；V：提取液体积mL；N：稀释倍数；M：取样量mL多酚(Plant Polyphenol)是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，植物单宁是植物的次生代谢产物，属于天然有机化合物。苯环上连着羟基的就是酚类,多酚类就是苯环上连着多个羟基或者多个苯环连着多个羟基。 如茶多酚。黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子 相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。黄酮类化合物有固定的结构，你可以在百度百科里查一下，黄酮类化合物是一类具有2-苯基色原酮结构的化合物。如图，以2-苯基色原酮为框架的多酚才能叫黄酮类化合物。苯环是由6个sp2杂化碳原子通过键和键构成平面正六边形的碳环。羟基：-OH，羧基：-COOH，羰基:-C=O（C上还连有一个键不知怎么打上去哈），醛基：-CHO，酯基:R-COO-R，醇基 没有醇基的说法，醇是烷的氢被羟基取代得到的化合物。它们都是有机物中的官能团，各自有特殊性质，比如亲电性、亲和性，对所连链产生影响而使该有机物表现出某一类官能团带来的性质。醇可被氧化为酮或醛，即羟基氧化为羰基。羰基的两个