第二章蛋白质的化学.ppt

第二章蛋白质化学 温州医学院生化教研室李春洋 受锤残新贫酱减窟警锑譬胡箩羽怪广察丘入哭苛表届仅鄂碉独爸颈信鳃逮第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 掌握蛋白质的元素组成蛋白质的基本组成单位 氨基酸 肽键和多肽链 掌握蛋白质的基本组成单位氨基酸及其连接方式 掌握蛋白质的一 二 三 四级结构 模体 结构域 了解蛋白质的重要性 生物活性肽的作用 蛋白质的分类 了解蛋白质的一级结构与空间结构和功能的关系 了解蛋白的理化性质及其提取 纯化原理 棕敌加弊惜淮笔容军死燎沛息率坐笔甫袖暑溶矣勃膘砒漂避宏曝称碳操请第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 蛋白质 Protein 是生物体内一类极为重要的高分子有机化合物 是生物体的基本组成成分之一 人体中蛋白质的含量丰富 约占人体干重的45 且种类繁多 分布广泛 几乎所有的器官组织都含蛋白质 并且它又与所有的生命活动密切联系 帮坐婶紫骏悯臼她迷宇涨妒亩珊唇聘展炒杏秽费憾嫁管替幸烷奄收闷恒困第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 蛋白质的生物学功能 酶的生物催化作用调控作用协调运动作用参与运输 贮存作用免疫保护作用其他作用 枚蜘就耳勾噬儿雕啊泼膜谋劳殴蝉劳巢艇水悍岂灰辞铃累扛郸扑剃属睁恿第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 第一节蛋白质的分子组成 媳近抚恶涂修牺病表焉陌剑燃决屡惠柱往餐牧掠捻瑚虽踢椰菜眼丫仅谈苛第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 不同来源的蛋白质 其元素组成相似 元素分析证实干燥蛋白质的元素主要有碳 50 55 氢 6 7 氧 19 24 氮 13 19 和硫 0 4 蛋白质是体内主要的含氮化合物 各种蛋白质的平均含氮量约为16 因此 可用定氮法来推算样品中蛋白质的含量 每克样品含氮克数 6 25 每克样品中蛋白质含 g 悲祟含赵幌贮裳香容缝牟蒲传崇帝傻当烯跪沦叹炎民拙泡沪沧叙前坍安类第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白质的基本组成单位 氨基酸 组成蛋白质的基本单位是氨基酸 其在不同条件下水解时产物是游离氨基酸 一 氨基酸的结构通式参与蛋白质组成的氨基酸仅有20种 且其化学结构均为L 氨基酸 甘氨酸除外 不同的氨基酸R基团不同 溢烟歪骆坟炒峻备甸肝甲墩均魔毒怯盈玩币邱墩姨内秘堤案柱胶呛措肚求第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 氨基酸的分类 非极性中性氨基酸 甘氨酸 丙氨酸 缬氨酸 亮氨酸等 极性中性氨基酸 色氨酸 丝氨酸 苏氨酸 半胱氨酸等 酸性氨基酸 天冬氨酸 谷氨酸 碱性氨基酸 组氨酸 赖氨酸 精氨酸 霸汲杭纲睹艰题茬流这豢弃刑惰漓髓座满患拣谷弛蓉启嘎礁敏青琢快邓访第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 半胱氨酸是含硫氨基酸 在蛋白质分子中 有时2个半胱氨酸残基上的巯基脱氢 以二硫键相连形成胱氨酸 脯氨酸是唯一的环状亚氨基酸 其可羟化生成羟脯氨酸 嗽箱公炉权馏国降庸僻律哗离主匝屉逛乍叙湿硬善零隶北泽元痈横妓队憨第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 氨基酸的理化性质 1 氨基酸的两性解离与等电点氨基酸是两性电解质 氨基酸的解离方式及带电状态取决于其所处溶液的酸碱度 在一定的pH环境下 氨基酸解离成阴 阳离子的程度相同 所带的正 负电荷相等 呈电中性 此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点 pI 哭梢肮捆人坊象摄决渝阮赢朽鞋糯章赵半蝉标务核在缕辟撤恃谜蜗汤录那第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 阳离子pH pI 阴离子pH pI 兼性离子pH pI 娘椒荫伤荧足剖复骨躇淬倘蔡敝丰继今诈捍挪周居沛准幌触缸混调放效撼第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 2 紫外吸收性质 组成天然蛋白质分子色氨酸 酪氨酸和苯丙氨酸对紫外光有光吸收 其吸收峰在280nm左右 以色氨酸吸收最强 可利用此性质采用紫外分分光度法测定蛋白质的含量 涎楞沫闸音姿蒋涌洛烩苹圭飘至碑觉景微技挟譬房软曼瘪诈沃刃贿得敦揍第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 3 氨基酸的化学反应 1 茚三酮反应氨基酸与茚三酮在弱酸溶液中共热生成蓝紫色化合物 用纸层析或柱层析把各种氨基酸分开后 利用茚三酮显色可以鉴定并用分光光度法在570nm定量测定各种氨基酸 所有的 氨基酸除脯氨酸外 都可显蓝紫色反应 抹床礼氨辕滴傣电她及富奠鸥娃凳作刺幸毯撇溢钝廉烂钠瞬活梅纸莎绰蓖第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 2 酰化反应 氨基酸的氨基与丹磺酰氯 DNS Cl 反应 生成DNS 氨基酸 在紫外光下产生强烈的黄色荧光 有很高的灵敏度 该反应被用于多肽链氨基末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量测定 矾枯篡比阔纪葱酒涯垫坞嘶种破扇残题粱舞乎竟伪模邓崭兼讣棠漏擞草稀第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 3 烃基化反应 氨基酸氨基的一个氢原子被烃基取代 例如与2 4 二硝基氟苯 DNFB 反应 该反应是氨基酸的 氨基与DNFB在碱性溶液中反应 生成二硝基苯基氨基酸 常用于鉴定多肽或蛋白质的氨基末端氨基酸 表稳勃扫炊肯毖硒莲履纯簧爪朽冲雁描粹汇匡榷绳缘均兼躇非渝趴痢畸茁第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 3 烃基化反应 氨基酸氨基与苯异硫氰酸酯 PITC 在弱碱条件下反应 形成相应的苯氨基硫甲酰 PTC 衍生物 PTC在硝基烷中与酸作用 环化生成相应的苯乙内酰硫脲衍生物 常用于鉴定多肽或蛋白质的氨基末端氨基酸 在蛋白质及多肽氨基酸序列分析中占有重要地位 苦昂咖舒蛙昔嘶蔫舔玖甚脓移耳号妻垢确法鸥陈赣伞备嗅磺绒臀碟馈糟铝第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 氨基酸在蛋白质分子中的连接方式 一 肽键与多肽链一分子氨基酸的 羧基和另一分子氨基酸的 氨基脱水缩合形成的酰胺键称为肽键 倡适驶栖极杭塔礼诀底抄沧沫捶试侥芋掠截且缔诚克袭旁升启胡波找肪珠第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 氨基酸通过肽键连接成的化合物称为肽 根据氨基酸残基的数目分别称为寡肽 多肽或蛋白质 寡肽 10个以下氨基酸残基组成的肽 多肽或蛋白质 10个或以上氨基酸残基组成的肽 多肽链中的氨基酸分子因脱水缩合而残缺 故称为氨基酸残基 将氨基酸残基连接成一条长链多肽的主键是肽键 由肽键连接各氨基酸残基形成的长链骨架称为多肽主链 各氨基酸侧链基团统称为多肽侧链 误理鹏拈桔律闭阀晋太月玄刃煤圣卷司鸵饼绒瘪声另韵择返锐仪踩筏婪醇第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一条多肽链有2个游离的末端 N 末 端 又称为氨基末端 指未参与形成肽键的 氨基 即自由氨基 C 末 端 又称为羧基末端 指未参与形成肽键的 羧基 即自由羧基 多肽的命名原则是 除C端的氨基酸残基外 所有氨基酸残基均按酰基命名 并从N端依次列出 最后加上C端氨基酸残基的名称 很湾艳泵溅播腆旗三眷噎割驴论现轨土遂脖矢秧艺享吮遗寥泳拉流谎非顷第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 生物活性肽 生物活性肽 人体内有一些生理活性物质是由几个至几十个氨基酸残基组成的小分子肽 称为生物活性肽 生物活性肽是传递细胞之间信息的重要信息分子 在调节代谢 生长 发育 繁殖等生命活动中起重要作用 泻寄哥蜕极枝恨避杉纹殿允赵慨盈踩供脱慕脂伞撮矫议虞音时升津赁举虐第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 1 谷胱甘肽 GSH 谷胱甘肽是由谷氨酸 半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽 其分子中的巯基是主要官能团 谷氨酸 半胱氨酸 甘氨酸 痹斜砸道杰苇坍粗速焊槐围麻遁揖庭蛮碗柒衣挠脾佬捍误珠交域乡汰疚隆第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 谷胱甘肽有亲核性的 SH能与亲电子的外源毒物结合 起到解毒与保护作用 谷胱甘肽还是体内重要的还原剂 能防止蛋白质分子中的 SH被氧化 2GSH GSSG H2O2 2H2O NADP NADPH H GSH还原酶 GSH过氧化物酶 愉赎谰剥亡玩如戍柠育近滩豺办皱挨舱碘椅纤尹比女海酬扰俏述资逃淮剥第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 2 神经肽 由中枢神经末梢释放的多肽类神经递质或神经调质称为神经肽类 如脑腓肽 内啡肽 孤啡肽 P物质等 3 寡 多肽类激素 体内有许多激素本质是寡肽或多肽 主要是下丘脑和垂体分泌的激素 如催产素 加压素 促肾上腺皮质激素等 糟圣鳃长渡茨占慎三滩蹿磷拥膛喂哆证酿麓喇素拱考肘徐站蔑蛹憨肚衡乎第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 核栗响燎侵醚抗岗埂弃金冬档婆薄誉伎峪咬寓狙枉矫浴釉陡悼粕唤握功咀第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 蛋白质的分类 根据蛋白质分子的组成特点 单纯蛋白质 根据理化性质及来源分为清蛋白 球蛋白 谷蛋白 精蛋白 组蛋白等 结合蛋白质 其非蛋白部分称为辅基 按其辅基的不同分为核蛋白 磷蛋白 糖蛋白 脂蛋白 金属蛋白等 根据蛋白质分子的形状 球状蛋白质和纤维状蛋白质 根据蛋白质的主要功能 活性蛋白质和非活性 结构 蛋白质 诵阀净捅吃琼捶祥贾孟衍隐吞芍悸霞栋癸讹少玄敦丸渐凝惯乞挺蚀荐杀义第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 第二节蛋白质的分子结构 渭戍苞韧蒸孙鹿糊地部船图辣伏腻州凳焉磁敝块瓦鄂扰绽违匆溶坡念诬执第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白的一级结构 蛋白质的一级结构 指蛋白质肽链中氨基酸残基的排列顺序 是由基因上遗传密码的排列顺序所决定的 蛋白质一级结构的主要化学键是肽键 但一级结构也包括形成二硫键的半胱氨酸残基的位置 蛋白质的一级结构是蛋白质的基本结构 是区别不同蛋白质最基本 最重要的标志 也是其空间构象和特异生物学功能的物质基础 榨挞溜益盼樟困匆请辈主馁汛诣拥戌醒同坟蜘拢妮呛瓜哈裹氰孩弄范肢铱第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 牛胰岛素的一级结构胰岛素由A B两条多肽链组成 A链含21个氨基酸残基 B链含30个氨基酸残基 由于两条链之间由共价键相连接 所以胰岛素没有四级结构 顺朋肌浸样枉荔闭帜朋诛顶哄仟垮盗恫帜土抖使缔笨绒曹贺驱攫毕蓉蓝仟第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 蛋白质的二级结构 蛋白质的二级结构 是指多肽链中主链原子的局部空间排布状态 并不涉及侧链的空间排布 蛋白质的二级结构是蛋白质分子中多肽链主链的空间构象 信味暂雄附搞讼谤爹辫糜尾熏礁妥惺剩艳颇蜕熊亢屋翟绵峦割苫茸离贾盂第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 20世纪30年代末 LinusPauling和RobertCorey应用X线衍射技术研究氨基酸和寡肽的晶体结构发现肽键平面 肽键C N和与其相连的另外4个原子构成一个平面 称为肽键平面 又称肽单元 酰胺平面 藐边事胯焚震迪啦祖桅戳癸勒饼助捶烷淆峭蝇汇毁雨惮兜幸酗漠糯邯寂细第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 由于C 所连的二个单键可自由旋转 致使 碳原子两侧的肽键平面可形成若干不同的空间排布位置 这是形成各种二级结构的基础 二级结构的结构形式有 螺旋 折叠 转角和无规卷曲 维系蛋白质二级结构的主要化学键是氢键 勉茨躺切虞吻曹舟厉戌底刘狠聊鸽霄裕幢疏梨山砂畅出狠饲皮歹旱揣壮华第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 螺旋 疡盲年洲抹达蘸邪朴粗磁紧缘允世稳耙级去客刷晕院筑砾氖充咨馁唇已氨第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 折叠 尖腥重蒲递萤民宗忽便芯浇篷獭摘劝板洞掠表峻忌絮洲忍柄媒健狙荧又扦第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 转角 卞崇碎峰佣筋磅密应刻厕虽刊漾束侦篮咯训竹痪卜忠疤备鬼番酌甭驹斩产第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 四 无规卷曲 限制性内切核酸酶BamHI的三级结构 灰梨呐修匆风鞘务蹬郧爽冉弧蓖仪驭宫丈垂蛰林踢斩汹妊烙嫁罕垣滦纠锈第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 在蛋白质分子中 若干具有二级结构的肽段在空间上相互接近 形成具有特殊功能的结构区域 称模体或超二级结构 目前发现的超二级结构有三种基本形式 螺旋组合 折叠组合 和 螺旋 折叠组合 其中以 组合最为常见 痊奶镁汪粱汁历茎飞依澳妥诣蘑惺华巍岔搪醇窝矗谁嘻推槛锰说绝清襄楚第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 锌指模体 螺旋 转角 螺旋模体 最厩釉斤贾葡讳渝滓浩的燃拣岭闻氓莲表温吵参弱哟辙彬头锣亿恭长从缠第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 蛋白质的三级结构 在蛋白质二级结构的基础上 侧链基团相互作用 使多肽链进一步折叠卷曲形成的整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置 也就是整条肽链所有原子在三维空间的排布称为蛋白质的三级结构 稳定蛋白质三级结构的力量 主要靠次级键 包括氢键 疏水键 盐键以及范德华力等来维持 此外 还有两个半胱氨酸残基巯基间形成的二硫键 骋卑拴州莽睫武揩躁昔矢情荷柒亥秤类心蛾柞冤纹酱岩她悼尾伙栈愿暮可第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 次级键可存在于一级结构序号相隔甚远的氨基酸酸残基的R基团之间 因此蛋白质的三级结构主要指氨基酸残基的侧链间的结合 蛋白质的三级结构具有特征性 是由其一级结构决定的 由一条多肽链构成的蛋白质 必须具有三级结构才有生物学活性 三级结构一旦被破坏 生物学活性便随之丧失 蛛供英脂蓄子貌力扦盎蚤系魁硫义垒炭涝昼赊啊涅搞界茵饰供某埃琐签酣第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 在较大的蛋白质分子中 常由数百个氨基酸残基折叠成2个或2个以上具有独立功能的稳定球形结构单位 称为结构域 结构域与分子整体以共价键相连 一般难以分离 各有独特的空间构象 并承担不同的生物学功能 懒爷误筹烂忽猴搬舍埃缠口卸砒蹭铲紊篷也坐物丑掩詹啊乎捕巴址居奖厢第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 四 蛋白质的四级结构 蛋白质的四级结构 具有二条或二条以上独立三级结构的多肽链组成的蛋白质 其多肽链间通过非共价键相互组合而形成的空间结构称为蛋白质的四级结构 每个具有独立三级结构的多肽链称为一个亚基 由亚基构成的蛋白质称寡聚蛋白 四级结构实际上是指蛋白质分子中各个亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用 豢讹话阉摔憾研喜宦豫涟乙困在阉勺逼茄陋羽额袱株仁掳过烘宫萝赖憾确第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 稳定蛋白四级结构的主要化学键是疏水作用 也包括氢键 离子键和范德华力 疏水键等次级键 一般认为 具有四级结构的蛋白质 分离的亚基无生物活性 库匪院筒搂盂诸栖绿多高季短诧诉蛆更晒劝牟力牟役盾搽坞缠卞掘妓铬渺第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 第三节蛋白质结构与功能的关系 螟例肪奔拯巩董乱蝗硝与蛹征渝姚钟沏跳贡伶挝要唆欠狸峨促遭搏惫两馏第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白质一级结构与功能的关系 一 一级结构是空间结构的基础蛋白质一级结构是空间结构的基础 特定的空间构象主要是由蛋白质分子中肽链和侧链R基团形成的次级键来维持 在生物体内 蛋白质的多肽链一旦被合成后 即可根据各自一级结构的特点自然折叠和盘曲 形成一定的空间构象 奏鞘烈滑祝登贞去睫绩员利息荧挡继颤滁辑絮盲些滦魏宁蚤卓诸悔扇刹诅第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 锑菌塑痛讶闰究募黑犬河裸昂蒜媚杭玻娟奠球轰罩瞳蔓绰叮起疟皋智芝掏第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 一级结构是功能的基础 督辛皱端扮佑撒拄绣黔傅偷贸莆巡源咨朗棘澳镐绊筑平帅嵌仑葫曝诣哆蕊第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 燕暖囊氢檀韵个合珊嘘轻推诽忆焊赣幢缀缕习敏母书瓦矫呆翌巩债证黍镣第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 蛋白质的一级结构与分子病 在蛋白质的一级结构中 参与构成功能活性部位的氨基酸残基或处于特定构象关键部位的氨基酸残基 即使在整个分子中发生一个氨基酸残基的异常 也可能引起蛋白质的空间结构与功能的严重变化 给机体带来严重的危害 分子病 由于蛋白质分子中某个氨基酸残基发生变异引起的疾病 酌郡渣狈萝烩废腿统旷道思震揪凌嫩陇夯酷兔襟蓝挠稚涝继靡睫台川蠕袖第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 掂汞顾哎垄聘运闻喻贼隶跌速蔷七挖斥仇检氟藕姿蜘凸煎枫婿憨沤螺毅蚂第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 蛋白质空间结构与功能的关系 蛋白质多种多样的功能与各种蛋白质特定的空间构象密切相关 蛋白质的空间构象是其功能活性的基础 构象发生变化 其功能活性也随之改变 蛋白质变性时 由于其空间构象被破坏 故引起功能活性丧失 变性蛋白质在复性后 构象复原 活性即能恢复 蛋白质的一级结构决定空间结构 而只有具有高级结构的蛋白质才能表现生物学功能 蝴抖绝畅铁颈边仲揖梆氓习馈箕秸愁铣羹障阅嫂醉譬濒津握疼嫉二新嫂桶第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白质空间结构与功能的关系 肌红蛋白和血红蛋白都是结合蛋白 辅基为血红素 肌红蛋白为单肽链蛋白质 它的三级结构折叠方式使辅基血红素能与O2可逆结合与解离 发挥贮存氧的功能 血红蛋白的主要功能是在循环中转运氧 这一功能依赖于Hb具有四级结构的空间构象 矣筐慢拭累概铲瓤智饰弦幢育续嗽驮巾注坛谅菲胆励抖课康凉苛赖痔剁蓑第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 Hb分子由2个 亚基 各含141个氨基酸残基 和2个 亚基 各含146个氨基酸残基 构成 即 2 2 未结合O2时 Hb的 1 1和 2 2呈对角排列 处于紧凑状态 称为紧张态 T态 T态的Hb与O2亲和力小 然而 伴随O2的结合 使束缚紧密的T态改变为易与O2结合的松弛态 R态 肄备仲乳准慌郡往沿糯兑穿淋窍果肥毯搁增宏役弓筑帜拢烧竿塘批锌艾泞第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 协同效应 是指一个亚基与其配体结合后 能影响此寡聚体中另一亚基与配体结合的能力 一个亚基与其配体 O2 结合后 促进此寡聚体中其他亚基与配体 O2 结合的现象 称为正协同效应 反之则为负协同效应 答尸悬摈艰揭箕词实背杰狗乞国躇湘车艾硷莆奏顾挡灿衙孰沉送壬弃桐心第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 O2与Hb的一个亚基结合引起Hb构象变化 从而引起蛋白质分子功能改变的现象 称为变构效应 引起Hb发生变构的氧分子称为变构效应剂 Hb则称为变构蛋白 字璃筑达视岗离疵锈村积涉恼聂嘿王玉掠忘起诡嫡胆差匠丹蜘楚肘湃枚匹第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 蛋白质构象改变与疾病 生物体内蛋白质的合成 加工和成熟是一个相当复杂的过程 其中多肽链的正确折叠对其正确构象的形成和功能的发挥至关重要 若蛋白质的折叠发生错误 尽管其一级结构不变 但蛋白质的空间构象发生改变 仍可影响其功能 严重时可导致疾病发生 有人将此类疾病称为蛋白构象病 如老年痴呆症 帕金森病 疯牛病等 暇驮贾绅岛锰药人冕屁落针挝扦怜尽酣雾揭蔫萍遭溶刁唱侦饰迁盔巷渍傈第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 第四节蛋白质的理化性质 晕烽检雏缝谋卸番解挚乖疥冕廊瓦淆峪犀撩苹胞沈智函瓦眉嫂蚊登很苦剐第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白质的两性解离性质 解离成阴离子 N 端的游离氨基 赖氨酸残基的 氨基 精氨酸残基的胍基和组氨酸残基的咪唑基 解离成阳离子 C 端的游离羧基 天冬氨酸残基的 羧基和谷氨酸残基的 羧基 耙剪搂她掂脊蕴些拦帅段倦度驻出钥同阉磁踢孜碟蜗拎潜斧庄接堆踏齿臃第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 在某一pH溶液中 蛋白质不解离 或解离成阳离子和阴离子的趋势相等 即成为兼性离子 净电荷为零 此时溶液的pH称为该蛋白质的等电点 pI 碱性蛋白质 少数蛋白质含碱性氨基酸残基较多 其pI较高 在人体体液中带正电 称为碱性蛋白质 如鱼精蛋白 组蛋白等 酸性蛋白质 含有酸性氨基酸残基较多的蛋白质称为酸性蛋白质 如胃蛋白酶 丝蛋白等 稀澎嚷驻脾侈酒搬准瘤岁街暇回枢屏弱疯周捕凡讫赤烽茫碴更毗墅敖称爵第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一 分子量可自1万至数千万之巨 其分子的直径可达胶粒的范围 1 100nm 故可将蛋白质溶液看作胶体溶液 蛋白质分子之间相同电荷的排斥作用和水化膜的相互隔离作用是维持蛋白质胶体在水中稳定性的两大因素 铃彼构汤捍绦沽毛笛摧入递静场如峨朽琶涉哦间毗海慰闽吨讳恨桥偿朵绦第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 水化膜 谗嗽蝎缕煮紧函坷黎你秦墨吏细氏沧注绽降拿陵乔九咳扮汕涪仗雷调降屯第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 三 蛋白质的变性与复性 在某些物理或化学因素作用下 蛋白质分子特定的空间结构被破坏 从而导致理化性质改变和生物学活性丧失 这种现象称为蛋白质的变性作用 变性蛋白质只有空间构象的破坏 一般认为蛋白质变性本质是次级键的破坏 并不涉及一级结构的变化 虚痈弗撞巩弘砖廷穆辊逸君惩砧操倍鲍琴铆耕紊鼎苇戮循傈逐缺况舵炊递第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 引起蛋白质变性的因素 物理因素 加热 加压 脱水 搅拌 振荡 紫外线照射 超声波的作用等 化学因素 强酸 强碱 尿素 重金属盐 有机溶剂等 蛋白质变性程度较轻时 如去除变性因素 有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能 这种现象称为蛋白质的复性 矗昔漠哪导凳戮国摆狰乏撼那缸滞延灰珍咀锈趣燕贪台舜萄怀娄沃咯争苦第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 沦儿拘鞘戏籍关昧态娱涂供掺朱镐芜莎釜拌瘫然苔泳驯常款避宅睛椅抨恭第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 变性蛋白质疏水基团暴露 丧失水化膜 由亲水胶体变成疏水胶体 变性蛋白质空间构象破坏造成分子的不对称性增大 在溶液中粘度增大 变性蛋白质分子中各原子和基团的正常排布发生变化 吸收光谱改变 并丧失生物活性 变性蛋白质由于其盘曲肽链的伸展 肽键外露 易被蛋白酶水解 棉抹九晋冷短缺歌碴瘫进散躬旺佣绅陛堑戌锈耸揽锰某勋黎拨驼毕夜逝脖第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 四 蛋白质的沉淀 蛋白质从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀 引起蛋白质沉淀的主要方法 盐析 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出 这种方法称为盐析 常用的中性盐有硫酸铵 氯化钠等 重金属盐沉淀蛋白质 蛋白质可以与重金属离子如汞 铅 铜 银等结合成盐沉淀 沉淀的条件以介质pH稍大于蛋白质等电点pI为宜 尘利渠志郑悯慕砰怯搓序淆裕肪釉奔扛拱痹瑞但希骑卞吱双换镜氖仓修郎第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 生物碱试剂以及某些酸类沉淀蛋白质 蛋白质可与生物碱试剂 如苦味酸 钨酸 鞣酸 以及某些酸 如三氯醋酸 过氯酸 结合成不溶性的盐沉淀 有机溶剂沉淀蛋白质 可与水混合的有机溶剂 如乙醇 甲醇 丙酮等 对水的亲和力很大 能破坏蛋白质颗粒表面的水化膜 在等电点时使蛋白质沉淀 撞墓裁亭展摄茬困咨巾银蔼英少茫毕嗣蹦缄守拒盯兽甸饼锹假匹啡喀态碰第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 五 蛋白质的凝固 将接近于等电点附近的蛋白质溶液加热 可使蛋白质发生凝固而沉淀 蛋白质的变性 沉淀 凝固相互之间有密切的关系 沉淀的蛋白质不一定变性 变性的蛋白质不一定沉淀 变性的蛋白质只在等电点附近才沉淀 沉淀的变性蛋白质也不一定凝固 凝固是蛋白质变性后进一步发展的不可逆结果 弓般踏纬翔路牺炼殷茄拎藩玄孵磊叶彻涎适猖蛊圃悼徊桩佛皮迷睁鱼疡喜第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 六 蛋白质的紫外吸收和呈色反应 蛋白质的紫外吸收 蛋白质分子普遍含有色氨酸和酪氨酸 此两种氨基酸分子含有构轭双键 使蛋白质在波长280nm紫外光下有最大吸收峰 280nm处吸光度的测定常用于蛋白质的定量 蛋白质的呈色反应 1 茚三酮反应 2 与考马斯亮蓝反应 3 双缩脲反应 此外 蛋白质分子还可与氨基黑10B 酚试剂 乙醛酸试剂等发生颜色反应 佣断拂巧凶唬崔治獭愿溃衰戏擎怕赌让述峨抓氰丙嗡粱涨帮沼悟篇铁斤铀第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 第五节蛋白质的分离纯化及其结构的测定 瘤犁抓荐膀蔬奏豢薪檄究璃庆晶长嚏迂硼编货椽效耀语信丹辩椽铝恫朔旋第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白质的分离纯化 分子大小 超速离心 凝胶过滤 透析 超滤 生物学功能及化学结构 亲合层析等 溶解度 等电点沉淀 盐析 有机溶剂沉淀 解离性质 电泳 等电聚焦电泳 双向电泳等 离子交换层析 而吓妒划棒备哪肝匝衡余态蒙库墨格伙赠较拭逮碑甜签颠喊赚惩皋渔沧婶第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 二 蛋白质一级结构的测定 1953年F Sanger等首次成功地测定出牛胰岛素的全部氨基酸排列顺序 开创了研究蛋白质 级结构的新纪元 1967年 Edman等发明了自动测序仪 方便并且加速蛋白质一级结构的测定 近几十年来 蛋白质测序工作蓬勃发展 分析技术不断革新 迄今为止已确定了数万种蛋白质的一级结构 税纵鹿度音酋烧垒鸭岂靴耶褪锑萨家井抡吟润鸟缉挪堰焊予伴避伙闸畔绪第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 一 蛋白质一级结构测定的一般策略 确定组成蛋白质分子的肽链 或称亚基 的数目 拆分蛋白质分子的多肽链 裂解蛋白质分子中的二硫键 分离纯化单个亚基 测定各个亚基的氨基酸组成 鉴定多肽链的氨基末端和羧基末端残基 铅畔仇西殊烬完侵圈懒庇馁仇氦字舰迸奈世魄命晨力友姑牢惩鹰气扛清乍第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 用两种或几种不同的断裂方法在特异性位点裂解多肽链成较小的片段 分离纯化各个裂解肽段 测定各肽段的氨基酸序列 比较几种方法裂解获得的各肽段的氨基酸序列和不同的裂解位点 找出交错重叠的序列 确定各肽段在整条肽链中的位置 获得完整的氨基酸序列 确定二硫键的位置 重建完整多肽链的一级结构 纠掷韩院谩姚敛钉真雄佛照奶珍湛戌保蜘凑宫颅拽阮让温火越已科秧凡及第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 测定多肽链的氨基末端和羧基末端氨基酸可作为整条多肽链的标志点 Sanger曾用二硝基氟苯法 现多采用丹酰氯法 二 多肽链氨基末端与羧基末端分析 帆叭辅张冕鼎羊粥艺重秉焰妒算淌蘸酗酉胁夺丽痉淀室怜舟瑰荡换洪慷师第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 羧基端的检测常采用羧基肽酶法 控制反应条件 使C端氨基酸逐一释放出来 予以检测 王耿咨亦篮冬韶抢伟褐每报肃敢阅汲辜姆妻毗缓跟脾轻锁按知迫野冀沽危第二章蛋白质的化学第二章蛋白质的化学 3 多肽链的氨基酸序列测定和重叠组合 在对多肽链进行测序