SNT 2661-2010 进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法 酶联免疫吸附法

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准2221 22 24 24进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法25 25 28 2A 262C 2C 2B 25 28 2F 2A 25 31 25 29 2D 2C 3032 2C 2B 29 2B 272A 2C 29 27 2B 31 3627 2A 25 2A 25 29 28 2A 30 27 25 26 30 224 24 23 3C 23发布24 23 24 3C 23实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法酶联免疫吸附法中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街号邮政编码：网址电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本印张字数千字年月第一版年月第一次印刷印数书号：定价元书书书前言本标准按照给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国安徽出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑文杰、刘伟、赵卫东、贺艳、刘?、张海滨、朱梦栩、蔡国瑞、万宇平、汪善良、陈炜琳、王硕。犛犖犜进出口动物源性食品中阿维菌素残留量的检测方法酶联免疫吸附法范围本标准规定了动物源性食品中阿维菌素药物残留量的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉等肉制品、鱼和虾等水产品中阿维菌素残留量的筛选检测。方法提要高脂肪样品采用过柱法。其方法提要简述如下：用乙腈提取样品中阿维菌素，无水硫酸钠去除提取液中水分，离心后取乙腈相过氧化铝柱，洗脱液氮气吹干后，复溶于复溶工作液，用间接竞争性酶联免疫法进行检测。低脂肪样品采用非过柱法，除提取液不过氧化铝柱以外，其他步骤与过柱法一致。试剂和材料除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。甲醇。乙腈。正己烷。无水硫酸钠。碱性氧化铝柱（）或相当者。阿维菌素酶联免疫试剂盒（参见附录）。仪器和设备均质器。离心机。旋涡混匀器。酶标仪。氮吹仪。温育培养箱。单道微量加样器：，可调，可调。多通道微量加样器：可调。样品制备与保存从全部原始样品取出有代表性样品约，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。将试样存放于冰箱中保存。犛犖犜测定步骤提取高脂肪样品（如鳗鱼等）过柱法用均质器均质组织样本，称取（精确至）均质后的样品，置聚苯乙烯离心管中，加入乙腈、正己烷，涡旋混匀。加入无水硫酸钠，涡旋混匀后，离心。去除上层正己烷，取下层提取液备用。取碱性氧化铝（）柱，称取无水硫酸钠平铺在滤板上，加入乙腈洗柱。加入下层提取液，开始收集滤液，待提取液流干后，再加入乙腈清洗柱子，合并洗液和滤液至聚苯乙烯离心管中，于水浴氮气流下吹干。取稀释后复溶工作液（见）溶解残渣，用旋涡混匀器涡旋混匀，超声波溶解，再涡动。取出溶解后的样品液，加入稀释后复溶工作液（见），涡旋混匀充分混合，取用于测定。低脂肪样品（如虾、肌肉等）非过柱法用均质器均质组织样本，称取（精确到）均质物至聚苯乙烯离心管中，加入乙腈、正己烷，涡旋混匀。离心。直接吸取下层液至干净的玻璃试管中，于水浴氮气流下吹干。取复溶工作液溶解干燥的残留物，用旋涡混合器涡旋混匀，超声波溶解，再涡旋混匀。取出溶解后的样品液，加入稀释后复溶工作液（见），涡旋混匀充分混合，取用于测定。酶联免疫法检测试剂的配制提供的复溶工作液为倍浓缩液。使用前用蒸馏水将复溶工作液稀释倍使用。提供的洗涤液为倍浓缩液。使用前用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释倍使用。样品测定在酶标板中分别加入不同浓度的阿维菌素标准溶液和样品待测液，在每个孔中加入的抗体工作液，轻拍混匀，用盖板膜盖板后，置温育培养箱中避光孵育。揭开盖板膜，弃掉酶标板孔中的液体，用洗涤液（每孔）充分洗板次次，最后一次用吸水纸拍干。加入酶标二抗孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，置温育培养箱中避光孵育，取出弃掉酶标板中的液体，用洗涤液（每孔）洗板次次。加入底物液孔，再加入底物液孔，轻轻混匀，用盖板膜盖板后，置避光环境中显色。每个孔加入的终止液，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于处（建议用双波长检测，加入终止液后内读完结果），测定吸光度值（值）。空白对照实验除不加样品以外，其他均完全按样品测定步骤进行操作。阳性质控每次测定均应做一个添加自配阿维菌素标准品溶液的监控样品，以确定实验过程的操作准确性。犛犖犜结果的计算计算百分吸光率值标准品或样品的百分吸光率见式（）等于标准品或样品的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准阿维菌素标准的百分吸光度值，再乘以，即百分吸光率犅犅（）式中：犅标准品或样品的百分吸光度值；犅标准的百分吸光度值。绘制标准曲线以标准品百分吸光度值为纵坐标，阿维菌素标准品浓度（，）的半对数为横坐标绘制标准曲线。每次试验均应重新绘制标准曲线，参见附录。结果计算将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度后，结果按式（）进行计算：犡犮犞犿（）式中：犡样品中阿维菌素的残留量，单位为微克每千克（）；犮从标准曲线上得到的样品中阿维菌素浓度，单位为纳克每毫升（）；犞样品溶液的最终定容体积，单位为毫升（）；犿样品溶液所代表的最终试样质量，单位为克（）。也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算，在软件参数设定时需乘以其相应的稀释倍数即为样本中阿维菌素类药物实际浓度。过柱法的稀释倍数为，非过柱法的稀释倍数为。确证方法如被测样品中阿维菌素残留量的值大于限量要求时，应用其他方法进行确证。本方法检测灵敏度、测定低限、回收率检测灵敏度本方法检测灵敏度为。测定低限用于猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉样品检测时，测定低限为；用于鱼肉和虾的检测时，测定低限为。回收率参见附录。犛犖犜附录犃（资料性附录）阿维菌素酶联免疫试剂盒）犃试剂盒的组成：）孔板（条孔）包被有偶联抗原；）抗体工作液（）；）酶标二抗工作液：辣根过氧化物酶和羊抗兔二抗的结合物，保存；）洗涤液（浓缩液），见附录；）底物液，见附录；）底物液，见附录；）浓缩复溶液。见附录；）终止液：硫酸；）阿维菌素系列标准液（个倍比稀释浓度水平，外加个空白）；）标准品储备液：用甲醇配制成储备液，保存。犃交叉反应：见表。表犃阿维菌素与其竞争物的交叉反应率药物名称交叉反应率阿维菌素埃比菌素依维菌素多拉菌素犃阿维菌素标准曲线见图。图犃阿维菌素标准曲线图）本标准使用的试剂盒为北京望尔生物技术有限公司产品，其他公司等效试剂盒须经试验评估验证后使用。犛犖犜犃回收率：见表。表犃不同基质中不同添加浓度的回收率样品添加浓度回收率猪肉牛肉羊肉鸡肉鱼肉虾犛犖犜附录犅（规范性附录）溶液配制方法犅浓缩洗涤液：定容于的双蒸水中，使用前按稀释。犅浓缩复溶液：定容于双蒸水中，储存于备用。犅底物液犅底物液定容于的双蒸水中，储存于备用。犅底物液，（）定容于的双蒸水中，储存于备用。使用前室温避光保存。使用时，按底物液底物液为（体积比）混合使用。犛犖犜犉狅狉犲狑狅狉犱犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊狆狉狅狆狅狊犲犱犫狔犪狀犱犻狊狌狀犱犲狉狋犺犲犮犺犪狉犵犲狅犳犆犲狉狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犃犮犮狉犲犱犻狋犪狋犻狅狀犃犱犿犻狀犻狊狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犱狉犪犳狋犲犱犫狔犜犻犪狀犼犻狀犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌狅犳狋犺犲犘犲狅狆犾犲狊犚犲狆狌犫犾犻犮狅犳犆犺犻狀犪犪狀犱犃狀犺狌犻犈狀狋狉狔犈狓犻狋犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狑犪狊犿犪犻狀犾狔犱狉犪犳狋犲犱犫狔犠犲狀犼犻犲犣犺犲狀犵，犠犲犻犔犻狌，犠犲犻犱狅狀犵犣犺犪狅，犢犪狀犎犲，犡狌犪狀犔犻狌，犎犪犻犫犻狀犵犣犺犪狀犵，犕犲狀犵狓狌犣犺狌，犢狌狆犻狀犵犠犪狀犵，犛犺犪狀犾犻犪狀犵犠犪狀犵，犠犲犻狔犻犆犺犲狀，犛犺狌狅犠犪狀犵犛犖犜犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪狏犲狉犿犲犮狋犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔犛犮狅狆犲犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狀犵犪狏犲狉犿犲狋犮狋犻狀（犃犞犕）狉犲狊犻犱狌犲狊犫狔犈犔犐犛犃犿犲狋犺狅犱犻狀犳狅狅犱狊狋狌犳犳狊狅犳犪狀犻犿犪犾狅狉犻犵犻狀犜犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狆犲犮犻犳犻犲狊狋犺犲犿犲狋犺狅犱狊狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀（犃犞犕）狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狆狅狉犽，犫犲犲犳，犮犺犻犮犽犲狀，犿狌狋狋狅狀犪狀犱狅狋犺犲狉犿犲犪狋狆狉狅犱狌犮狋狊，犳犻狊犺，狊犺狉犻犿狆犪狀犱狅狋犺犲狉犪狇狌犪狋犻犮狆狉狅犱狌犮狋狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋，犫狔犈犔犐犛犃犿犲狋犺狅犱犘狉犻狀犮犻狆犾犲狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犎犻犵犺犳犪狋狊犪犿狆犾犲狊犺狅狌犾犱狌狊犲狋犺犲犳犾狌狊犺犿犲狋犺狅犱犜犺犲狆狉狅狋狅犮狅犾犻狊狋犺犪狋犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊犻狊犱犻狊狋犻犾犾犲犱犫狔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲犈犾犻犿犻狀犪狋犲狑犪狋犲狉犳狉狅犿狋犺犲狊犪犿狆犾犲犫狔狊狅犱犻狌犿狊狌犾狆犺犪狋犲犪狀犺狔犱狉狅狌狊犆犲狀狋狉犻犳狌犵犲犪狀犱犳犾狌狊犺，犜犺犲狀犱狉狔犫狔犖犚犲犺狔犱狉犪狋犲犻狀狋犺犲狑狅狉犽犻狀犵狊狅犾狌狋犻狅狀犜犺犲犫犪狊犻狊狅犳狋犺犲狋犲狊狋犻狊狋犺犲犻狀犱犻狉犲犮狋犾狔犮狅犿狆犲狋犻狋犻狏犲犲狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狉犲犪犮狋犻狅狀犔狅狑犳犪狋狊犪犿狆犾犲狊犺狅狌犾犱狌狊犲狋犺犲狀狅狀犳犾狌狊犺犿犲狋犺狅犱狑犺犻犮犺犻狊狋犺犲狊犪犿犲犪狊狋犺犲犳犾狌狊犺狅狀犲狑犻狋犺狅狌狋狋犺犲犳犾狌狊犺犚犲犪犵犲狀狋狊犪狀犱犿犪狋犲狉犻犪犾狊犐狀狋犺犻狊狊狋犪狀犱犪狉犱，犪犾犾狋犺犲犮犺犲犿犻犮犪犾狉犲犪犵犲狀狋狊狊犺狅狌犾犱犫犲犪狀犪犾狔狋犻犮犪犾犾狔狆狌狉犲犪狀犱“狑犪狋犲狉”犻狊犱狅狌犫犾犲犱犻狊狋犻犾犾犲犱狑犪狋犲狉犻犳狀狅狋狊狆犲犮犻犳犻犲犱犕犲狋犺犪狀狅犾犃犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲狀犎犲狓犪狀犲犃狀犺狔犱狉狅狌狊犖犪犛犗犛犲狆狆犪犽狏犪犮犮犮（犵）犮狅犾狌犿狀狅狉犲狇狌犻狏犪犾犲狀狋犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊犱犲狋犲犮狋犻狅狀犽犻狋（狊犲犲犃狀狀犲狓犃）犛犖犜犃狆狆犪狉犪狋狌狊犪狀犱犲狇狌犻狆犿犲狀狋犎狅犿狅犵犲狀犻狕犲狉犆犲狀狋狉犻犳狌犵犲犞狅狉狋犲狓犿犻狓犲狉犕犻犮狉狅狑犲犾犾狊狔狊狋犲犿犚狅狋犪狉狔犲狏犪狆狅狉犪狋狅狉狅狉狀犻狋狉狅犵犲狀犱狉狔犻狀犵犻狀狊狋狉狌犿犲狀狋犗狏犲狀犘犻狆犲狋狋犲狊：犔，犔，犔犔，犔犔犕狌犾狋犻犮犺犪狀狀犲犾狆犻狆犲狋狋犲：犔犔犘狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀犪狀犱狊狋狅狉犪犵犲狅犳犛犪犿狆犾犲犜犺犲狑犺狅犾犲狆狉犻犿犪狉狔狊犪犿狆犾犲狊犺犪犾犾犫犲犿狅狉犲狋犺犪狀犵犉犻狉狊狋犿犻狓狊犪犿狆犾犲犫狔犺狅犿狅犵犲狀犻狕犲狉犇犻狏犻犱犲犻狋犻狀狋狅狋狑狅犲狇狌犪犾狆犪狉狋狊犪犳狋犲狉犿犻狓狑犲犾犾犜犺犲狀犽犲犲狆狋犺犲狆狉犲狆犪狉犲犱狊犪犿狆犾犲犻狀狋狅狋狑狅狊犪犿狆犾犲犫狅狋狋犾犲狊，狊犲犪犾犪狀犱犾犪犫犲犾犃狋狋犲狀狋犻狅狀狊犺犪犾犾狆犪狔犲犱狋狅狆狉犲狏犲狀狋狋犺犲犮狅狀狋犪犿犻狀犪狋犻狅狀犪狀犱狅狋犺犲狉犳犪犮狋狅狉狊狑犺犻犮犺犻狀犳犾狌犲狀犮犲狋犺犲狉犲狊犻犱狌犲狊犜犺犲狊犪犿狆犾犲狊犺犪犾犾狊狋狅狉犲犱犻狀犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狆狉狅狋狅犮狅犾犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀犈狓狋狉犪犮狋犻狅狀狅犳犺犻犵犺犳犪狋狊犪犿狆犾犲狊（犲犲犾，犲狋犮）犳犻犾狋犲狉犲犱狑犻狋犺犮狅犾狌犿狀犎狅犿狅犵犲狀犻狕犲狋犺犲狋犻狊狊狌犲狊犪犿狆犾犲狊狑犻狋犺犺狅犿狅犵犲狀犻狕犲狉，狑犲犻犵犺犵（犪犮犮狌狉犪狋犲狋狅犵）狅犳狋犺犲犿犻狀犮犲犱狊犪犿狆犾犲犻狀狋狅犪犿犔狆狅犾狔狊狋狔狉犲狀犲犮犲狀狋狉犻犳狌犵犲狋狌犫犲，犃犱犱犿犔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲犪狀犱犿犔狀犎犲狓犪狀犲，狋犺犲狀犿犻狓犳狅狉犿犻狀犃犱犱犵犪狀犺狔犱狉狅狌狊犖犪犛犗，犿犻狓犳狅狉犿犻狀，犮犲狀狋狉犻犳狌犵犲犳狅狉犿犻狀犪狋狉犿犻狀，犪狋犚犲犿狅狏犲狋犺犲狊狌狆犲狉狀犪狋犪狀狋狀犎犲狓犪狀犲狆犺犪狊犲，犜狉犪狀狊犳犲狉犿犔狅犳狊狌犫狊狋狉犪狋犲犾犻狇狌犻犱犻狀狋狅犪犮犾犲犪狀犵犾犪狊狊狋狌犫犲犜犪犽犲狋犺犲狊犲狆狆犪狉犽狏犪犮犮犮（犵）犮狅犾狌犿狀，狑犲犻犵犺犵犪狀犺狔犱狉狅狌狊犖犪犛犗犪狀犱狋犻犾犲狅狀狋狅狋犺犲犳犻犾狋犲狉狆犾犪狋犲，犪犱犱犿犔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲狋狅狉犻狀狊犲狋犺犲犮狅犾狌犿狀犃犱犱犿犔狅犳狋犺犲狆狉犲狆犪狉犲犱狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀犻狀狋狅狋犺犲犮狅犾狌犿狀，犵犪狋犺犲狉狋犺犲犳犻犾狋狉犪狋犲，狋犺犲狀犪犱犱犿犔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲狋狅狉犻狀狊犲狋犺犲犮狅犾狌犿狀，犵犪狋犺犲狉狋犺犲犳犻犾狋狉犪狋犲犪犵犪犻狀犪狀犱犿犲狉犵犲狑犻狋犺狋犺犲犳犻犾狋狉犪狋犲狅犳狋犺犲狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀，犱狉狔狋犺犲犿犲狉犵犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀狌狀犱犲狉狑犪狋犲狉犫犪狋犺狀犻狋狉狅犵犲狀狊狋狉犲犪犿，犇犻狊狊狅犾狏犲狋犺犲犱狉狔犾犲犳狋狅狏犲狉狑犻狋犺犿犔犱犻犾狌狋犲犱犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狊狅犾狌狋犻狅狀（），犿犻狓犛犖犜犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺狏狅狉狋犲狓犿犻狓犲狉，犱犻狊狊狅犾狏犲狑犻狋犺狌犾狋狉犪狊狅狀犻犮犳狅狉犿犻狀，狋犺犲狀狑犺狅狉犾犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺狏狅狉狋犲狓犿犻狓犲狉；犕犻狓犔狅犳狋犺犲狆狉犲狆犪狉犲犱狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀狑犻狋犺犔犱犻犾狌狋犲犱犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狊狅犾狌狋犻狅狀，犫犾犲狀犱犳狅狉狊狋狅犿犻狓犮狅犿狆犾犲狋犲犾狔犜犪犽犲犔狑犲犾犾犳狅狉犪狊狊犪狔犈狓狋狉犪犮狋犻狅狀狅犳犾狅狑犳犪狋狊犪犿狆犾犲狊（狊犺狉犻犿狆，犿狌狊犮犾犲犲狋犮）犎狅犿狅犵犲狀犻狕犲狋犺犲狊犪犿狆犾犲狊狑犻狋犺犺狅犿狅犵犲狀犻狕犲狉，狑犲犻犵犺犵（犪犮犮狌狉犪狋犲狋狅犵）狅犳狋犺犲犺狅犿狅犵犲狀犪狋犲犻狀狋狅犪犿犔狆狅犾狔狊狋狔狉犲狀犲犮犲狀狋狉犻犳狌犵犲狋狌犫犲，犪犱犱犿犔犪犮犲狋狅狀犻狋狉犻犾犲犪狀犱犿犔狀犎犲狓犪狀犲，狋犺犲狀犿犻狓犳狅狉犿犻狀；犆犲狀狋狉犻犳狌犵犲犪狋狉犿犻狀犳狅狉犿犻狀，犪狋；犜狉犪狀狊犳犲狉犿犔狅犳狋犺犲狊狌犫狊狋狉犪狋犲犾犻狇狌犻犱犻狀狋狅犪犿犔犮犾犲犪狀犵犾犪狊狊狋犲狊狋狋狌犫犲，犱狉狔狋犺犲犾犻狇狌犻犱狌狀犱犲狉狑犪狋犲狉犫犪狋犺狀犻狋狉狅犵犲狀狊狋狉犲犪犿；犇犻狊狊狅犾狏犲狋犺犲犱狉狔犾犲犳狋狅狏犲狉狑犻狋犺犿犔犱犻犾狌狋犲犱犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狊狅犾狌狋犻狅狀，犿犻狓犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺狏狅狉狋犲狓犿犻狓犲狉，犱犻狊狊狅犾狏犲狑犻狋犺狌犾狋狉犪狊狅狀犻犮犳狅狉犿犻狀，狋犺犲狀狑犺狅狉犾犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺狏狅狉狋犲狓犿犻狓犲狉；犕犻狓犔狅犳狋犺犲狆狉犲狆犪狉犲犱狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀狑犻狋犺犔犱犻犾狌狋犲犱犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狊狅犾狌狋犻狅狀，犫犾犲狀犱犳狅狉狊狋狅犿犻狓犮狅犿狆犾犲狋犲犾狔犜犪犽犲犔狑犲犾犾犳狅狉犪狊狊犪狔犈犔犐犛犃犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犘狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀狅犳狉犲犪犵犲狀狋狊犜犺犲犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀狊狅犾狌狋犻狅狀狆狉狅狏犻犱犲犱犻狊犪犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀，狆犾犲犪狊犲犱犻犾狌狋犲犻狋狑犻狋犺狑犪狋犲狉犻狀狋犺犲狏狅犾狌犿犲狉犪狋犻狅狀狅犳犫犲犳狅狉犲狌狊犲犜犺犲狑犪狊犺狊狅犾狌狋犻狅狀狆狉狅狏犻犱犲犱犻狊犪犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀，狆犾犲犪狊犲犱犻犾狌狋犲犻狋狑犻狋犺狑犪狋犲狉犻狀狋犺犲狏狅犾狌犿犲狉犪狋犻狅狀狅犳犫犲犳狅狉犲狌狊犲犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳狊犪犿狆犾犲犃犱犱犔狅犳犲犪犮犺狊狋犪狀犱犪狉犱狊狅犾狌狋犻狅狀犪狀犱犔狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀犻狀狋狅狋犺犲犿犻犮狉狅狑犲犾犾狉犲狊狆犲犮狋犻狏犲犾狔，狋犺犲狀犪犱犱犔犃狀狋犻犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊犪狀狋犻犫狅犱狔狊狅犾狌狋犻狅狀狋狅犲犪犮犺狑犲犾犾犛犺犪犽犲犵犲狀狋犾狔狋狅犿犻狓犮狅犿狆犾犲狋犲犾狔，犻狀犮狌犫犪狋犲犪狋犻狀犱犪狉犽犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺犮狅狏犲狉犜犺犲狀狉犲犿狅狏犲狋犺犲犮狅狏犲狉，狆狅狌狉狋犺犲犾犻狇狌犻犱狅狌狋狅犳狋犺犲狑犲犾犾狊，狉犻狀狊犲狋犺犲狆犾犪狋犲狑犻狋犺犱犻犾狌狋犲犱狑犪狊犺狊狅犾狌狋犻狅狀（犔狑犲犾犾）犳狅狉狋犻犿犲狊狋犻犿犲狊，犪犫狊狅狉犫狋犺犲狉犲狊犻犱狌犪犾狑犪狋犲狉狑犻狋犺犪犫狊狅狉犫犲狀狋狆犪狆犲狉犪狋狋犺犲犾犪狊狋狋犻犿犲犃犱犱犲狀狕狔犿犲犾犪犫犲犾犲犱犮狅狀犼狌犵犪狋犲（狊犲犲）犔狋狅犲犪犮犺狑犲犾犾，犿犻狓犵犲狀狋犾狔，犻狀犮狌犫犪狋犲犪狋犻狀犱犪狉犽犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺犮狅狏犲狉犘狅狌狉狋犺犲犾犻狇狌犻犱狅狌狋狅犳狋犺犲狑犲犾犾狊，狉犻狀狊犲狋犺犲狆犾犪狋犲狑犻狋犺狑犪狊犺狊狅犾狌狋犻狅狀（犔狑犲犾犾）犳狅狉狋犻犿犲狊狋犻犿犲狊，犃犱犱狊狌犫狊狋狉犪狋犲犃犔狑犲犾犾，狊狌犫狊狋狉犪狋犲犅犔狑犲犾犾，犿犻狓犵犲狀狋犾狔，犻狀犮狌犫犪狋犲犪狋犻狀犱犪狉犽犳狅狉犿犻狀狑犻狋犺犮狅狏犲狉犜犺犲狀犪犱犱犔狊狋狅狆狊狅犾狌狋犻狅狀狋狅犲犪犮犺狑犲犾犾，犿犻狓犵犲狀狋犾狔犕犻狓犵犲狀狋犾狔犫狔狉狅犮犽犻狀犵狋犺犲狆犾犪狋犲犿犪狀狌犪犾犾狔犪狀犱犿犲犪狊狌狉犲狋犺犲犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲犪狋狀犿犪犵犪犻狀狊狋犪狀犪犻狉犫犾犪狀犽（犐狋狊狊狌犵犵犲狊狋犲犱犿犲犪狊狌狉犲狑犻狋犺狋犺犲犱狌犪犾狑犪狏犲犾犲狀犵狋犺狅犳狀犿犚犲犪犱狋犺犲狉犲狊狌犾狋狑犻狋犺犻狀犿犻狀犪犳狋犲狉犪犱犱犻狋犻狅狀狅犳狊狋狅狆狊狅犾狌狋犻狅狀）犅犾犪狀犽犮狅狀狋狉狅犾犜犲狊狋犜犺犻狊犫犾犪狀犽犮狅狀狋狉狅犾狋犲狊狋犮犪狀犫犲犮犪狉狉犻犲犱狅狌狋犳狅犾犾狅狑犻狀犵犛狋犲狆犪狀犱狑犻狋犺狅狌狋犪犱犱犻狀犵狊犪犿狆犾犲犘狅狊犻狋犻狏犲犿狅狀犻狋狅狉犻狀犵犃狀犪犾狔狕犲犪狉犲犮狅狏犲狉犻犲狊犳狅狉狋犻犳犻犲犱犪狋犿犪狓犻犿狌犿狉犲狊犻犱狌犲犾犻犿犻狋（犕犚犔）犾犲狏犲犾狌狊犻狀犵犫犾犪狀犽狊犪犿狆犾犲犲犪犮犺狋犲狊狋犛犖犜犆犪犾犮狌犾犪狋犻狀犵狋犺犲狉犲狊狌犾狋犪狀犱犲狓狆狉犲狊狊犆犪犾犮狌犾犪狋犻狀犵犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲狏犪犾狌犲犻狀狆犲狉犮犲狀狋犪犵犲狊犜犺犲犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲狏犪犾狌犲（犅）狅犳狋犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狅狉狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲犻狀狆犲狉犮犲狀狋犪犵犲犮犪狀犫犲狅犫狋犪犻狀犲犱犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲犳狅犾犾狅狑犻狀犵犳狅狉犿狌犾犪（）：犃犫狊狅狉犫犪狀犮犲犅犅（）犠犺犲狉犲犅犕犲犪狀犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲狏犪犾狌犲狅犳狋犺犲狊狋犪狀犱犪狉犱狅狉狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲（犱狌犪犾狑犲犾犾狊）；犅犃犫狊狅狉犫犪狀犮犲狏犪犾狌犲狅犳狀犵犿犔犃犞犕犛狊狋犪狀犱犪狉犱犘犾狅狋犮犪犾犻犫狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲犜犪犽犲狋犺犲犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲狏犪犾狌犲犻狀狆犲狉犮犲狀狋犪犵犲狊犪狊狅狉犱犻狀犪狋犲，犪狀犱狊犲犿犻犾狅犵犪狉犻狋犺犿犻犮狏犪犾狌犲狅犳犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀（，犵犔）狅犳犃犞犕犛狊狋犪狀犱犪狉犱犪狊犪犫狊犮犻狊狊犪，狆犾狅狋狋犺犲犮犪犾犻犫狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲（狊犲犲犪狀狀犲狓犅）犃狀犲狑犮犪犾犻犫狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲狊犺狅狌犾犱犫犲狆狉犲狆犪狉犲犱犳狅狉犲犪犮犺犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犆犪犾犮狌犾犪狋犻狀犵狋犺犲狉犲狊狌犾狋犜犺犲犮狅狉狉犲狊狆狅狀犱犻狀犵犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲犮犪狀犫犲狉犲犪犱犳狉狅犿狋犺犲犮犪犾犻犫狉犪狋犻狅狀犮狌狉狏犲（犪狀狀犲狓犅）犪犮犮狅狉犱犻狀犵狋狅狋犺犲犪犫狊狅狉犫犪狀犮犲狏犪犾狌犲犻狀狆犲狉犮犲狀狋犪犵犲狊狅犳狋犺犲狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲犆犪犾犮狌犾犪狋犲狋犺犲狉犲狊狌犾狋狌狊犻狀犵狋犺犲犳狅犾犾狅狑犻狀犵犳狅犿狌犾犪（）犡犮犞犿（）犠犺犲狉犲犡狋犺犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狅犳犃犞犕犛犻狀狋犺犲狊犪犿狆犾犲狊狌狀犻狋犻狀犵犽犵；犮狋犺犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狊犵狅狋狋犲狀犳狉狅犿狋犺犲狊犲犿犻犾狅犵犪狉犻狋犺犿犻犮狊狔狊狋犲犿狅犳犮狅狅狉犱犻狀犪狋犲狊狌狀犻狋犻狀狀犵犿犔；犞狋犺犲犳犻狀犪犾狏狅犾犻狌犿犲狅犳狋犺犲狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀狌犻狀狋犻狀犿犔；犿狋犺犲犳犻狀犪犾狊犪犿狆犾犲狑犲犻犵犺狋狅犳狋犺犲狊犪犿狆犾犲狊狅犾狌狋犻狅狀狌狀犻狋犻狀犵犛犖犜犗狋犺犲狉犱犪狋犪狆狉狅犮犲狊狊犻狀犵狊狅犳狋狑犪狉犲犮犪狀犪犾狊狅犫犲狌狊犲犱狋狅犮犪犾犮狌犾犪狋犲狋犺犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀狊狅犳犪狏犿狊犇狌狉犻狀犵狋犺犲狊狅犳狋狑犪狉犲犳犪犮狋狅狉狊犲狋狌狆，狋犺犲狉犲狊狌犾狋狊犺狅狌犾犱犫犲犿狌犾狋犻狆犾犻犲犱犫狔犮狅狉狉犲狊狆狅狀犱犻狀犵犱犻犾狌狋犻狅狀犳犪犮狋狅狉，狋犺犲狉犲狊犻犱狌犲犮狅狀狋犲狀狋狅犳犃犞犕犛犻狀狋犺犲狋犲狊狋狊犪犿狆犾犲（狀犵犿犔）犮犪狀犫犲狅犫狋犪犻狀犲犱犜犺犲犱犻犾狌狋犻狅狀犳犪犮狋狅狉狅犳犳犾狌狊犺犿犲狋犺狅犱犻狊，狋犺犪狋狅犳狌狀犳犾狌狊犺犿犲狋犺狅犱犻狊犆狅狀犳犻狉犿犪狋犻狅狉狔犜犲狊狋犐犳狊犪犿狆犾犲狉犲狊狌犾狋狅狏犲狉犕犚犔，犻狋狊犺狅狌犾犱犫犲犮狅狀犳犻狉犿犲犱狑犻狋犺犮狅狀犳犻狉犿犪狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱犛犲狀狊犻狋犻狏犻狋狔，犱犲狋犲犮狋犻狅狀犾犻犿犻狋犪狀犱狉犲犮狅狏犲狉狔狉犪狋犲狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犛犲狀狊犻狋犻狏犻狋狔狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犜犺犲狊犲狀狊犻狋犻狏犻狋狔狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犻狊犿犲狋犺狅犱犻狊犵犽犵犇犲狋犲犮狋犻狅狀犾犻犿犻狋狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀犜犺犲犱犲狋犲犮狋犻狅狀犾犻犿犻狋狅犳犱犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犻狊犿犲狋犺狅犱犻狊犵犽犵犻狀狆狅狉犽，犫犲犲犳，犿狌狋狋狅狀犪狀犱犮犺犻犮犽，犪狀犱犵犽犵犻狀犳犻狊犺犪狀犱狊犺狉犻犿狆犚犲犮狅狏犲狉狔狉犪狋犲犛犲犲犪狀狀犲狓犃犛犖犜犃狀狀犲狓犃（犖狅狉犿犪狋犻狏犲）犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊犱犲狋犲犮狋犻狅狀犽犻狋）犃犆狅犿狆狅狊犲狅犳犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊犱犲狋犲犮狋犻狅狀犽犻狋：犪）狑犲犾犾狊犿犻犮狉狅狋犻狋犲狉狆犾犪狋犲（狋狑犲犾狏犲狑犲犾犾狊狊狋狉犻狆狊）犮狅犪狋犲犱犪狀狋犻犵犲狀狑犺犻犮犺犗犞犃犮狅狀犼狌犵犪狋犲犱犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊；犫）犃狀狋犻犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊犪狀狋犻犫狅犱狔（犿犔）；犮）犌狅犪狋犪狀狋犻犚犪犫犫犻狋犐犵犌犎犚犘犮狅狀犼狌犵犪狋犲（犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀，狊狋狅狉犲犱犪狋）；犱）犠犪狊犺狊狅犾狌狋犻狅狀（犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀）：狊犲犲犃狀狀犲狓犅；犲）犛狌犫狊狋狉犪狋犲犃，狊犲犲犃狀狀犲狓犅；犳）犛狌犫狊狋狉犪狋犲犅，狊犲犲犃狀狀犲狓犅；犵）犈狓狋狉犪犮狋犻狅狀犛狅犾狌狋犻狅狀（犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犲犱狊狅犾狌狋犻狅狀），狊犲犲犃狀狀犲狓犅；犺）犛狋狅狆狊狅犾狌狋犻狅狀：犎犛犗犿狅犾犔；犻）犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊狊犲狉犻犲狊狊狋犪狀犱犪狉犱狊狅犾狌狋犻狅狀狊（犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犾犲狏犲犾，犵犔犪狀犱犫犾犪狀犽犮狅狀狋狉狅犾）；犼）犃狏犲狉犿犲犮狋犻狀狊狊狋犪狀犱犪狉犱狉犲狊犲狉狏犲：犵犿犔犻狀犿犲狋犺犪狀狅犾，狊狋狅狉犪犵犲犪狋犃犆狉狅狊狊狉犲犪犮狋犻狅狀：犛犲犲狋犪犫犾犲犃犜犪犫犾犲犃犆狉狅狊