干细胞微生物学检测标准操作规程SOPZK002.doc

GMP质量管理 文件编号：SOP/ZK/002 干细胞微生物学检测标准操作规程（SOP）北京赛托森生物科技发展有限公司质量管理干细胞微生物学检测标准操作规程文件名：干细胞微生物学检测标准操作规程文件编号：制定人：日期： 年 月 日文件类型：工作标准审核人：日期： 年 月 日版 次：第一版批准人：日期： 年 月 日印 数：共5份生效日期： 年 月 日颁发部门：质量管理分发至： 质量副总经理、质量管理部、QC检验室、综合办公室变更记载修订号修订人批准日期生效日期原 因 及 目 的一、总则 1.目的：建立针对实验室干细胞微生物学标准操作程序，用以规范员工的检测操作。 2.范围：适用于公司内部生产干细胞的微生物学检测工作 3.责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。 4.检测依据： YY/T0188.61995药品检验操作规程，第6部分，微生物测定法。2、 细菌检测 1.所用检测试剂耗材及仪器 1.1液体培养基：硫乙醇培养基、离心管、一次性巴斯德管 1.2琼脂培养基：胰酪胨大豆琼脂培养基、培养皿、接种环1.3电热恒温恒湿培养箱（温度可调25-37）、超净工作台2.操作方法检测过程全程需在超净工作台内完成，注意无菌操作。培养基具体配制方法详见SOP/ZK/006液体培养基： 取培养液待恢复室温 将待检样本及培养基过火后拧开盖子 利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中1-2ml 将加入待检样本的培养液过火后拧紧盖子 坐上标记方便记录与查看结果 37培养5-7天查看结果 结果鉴定：培养液浑浊为细菌污染，清澈则为未污染。 做好结果记录并填写质量报告琼脂培养基： 取培养皿待恢复室温 将待检样本过火后拧开盖子 利用一次接种环将样本接种于培养液皿中 坐上标记方便记录与查看结果 将培养皿倒扣置培养箱中 37培养3-5天查看结果 结果鉴定：培养皿上有否出现可疑菌落，如有则为细菌污染，若培养至第5天未见可疑菌落，则未污染 做好结果记录并填写质量报告3、 真菌检测 1.所用检测试剂耗材及仪器 1.1液体培养基：改良马丁培养基、离心管、一次性巴斯德管 1.2琼脂培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基、培养皿、接种环1.3电热恒温恒湿培养箱（温度可调25-37）、超净工作台2.操作方法检测过程全程需在超净工作台内完成，注意无菌操作。培养基具体配制方法详见SOP/ZK/006 液体培养基： 取培养液待恢复室温 将待检样本及培养基过火后拧开盖子 利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中1-2ml 将加入待检样本的培养液过火后拧紧盖子 坐上标记方便记录与查看结果 26培养5-7天查看结果 结果鉴定：培养液浑浊为真菌菌污染，清澈则为未污染。 做好结果记录并填写质量报告 琼脂培养基： 取培养皿待恢复室温 将待检样本过火后拧开盖子 利用一次接种环将样本接种于培养液皿中 坐上标记方便记录与查看结果 将培养皿倒扣置培养箱中 26培养3-5天查看结果 结果鉴定：培养皿上有否出现可疑菌落，如有则为细菌污染，若培养至第5天未见可疑菌落，则未污染 做好结果记录并填写质量报告4、 支原体检测 支原体快速法： 所有操作均在室温（22-28）下进行 打开检测板，在孔中加入40 L Reaction Buffe A 第一个孔加入10 L阴性对照，其他孔加入10 L待测样品或阳性对照 轻轻混匀，室温孵育5分钟 所有孔中均加入40 L Reaction Buffe B 轻轻混匀，室温孵育4分钟 每孔加入5L Stop Solution，轻轻混匀 可在30分钟内观察样品颜色的变化或进行拍照保存： 结果分析 如果待测样品的颜色深于阴性对照，表明样品被支原体污染 如果待测样品的颜色与阴性对照相同，表明样品没有支原体污染 做好结果记录并填写质量报告 支原体ELISA法： 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外 温育：操作同 3 洗涤：操作同 5 显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色1