高中生物 专题五 课题3 血红蛋白的提取和分离课件 新人教版.ppt

课题3 血红蛋白的提取和分离 关于血红蛋白的提取和分离的基础知识 1 凝胶色谱法 分配色谱法 相对分子质量的大小 凝胶色谱法也称作 是根据 分离蛋白质的有效方法 2 缓冲溶液 酸 碱 1 2种缓冲剂 水 使用比例 1 缓冲溶液的作用 在一定范围内能够抵御 和 对溶液ph值的影响 2 配制 缓冲溶液通常由 溶解于 中配制而成的 调节缓冲剂的 就可以得到不同ph值范围内的缓冲液 3 电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 概念 电泳是指 在电场的作用下发生的 过程 带电粒子 迁移 2 两种常用的电泳方法是 和 在测定蛋白质分子量时通常使用 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带 的多少以及 等因素 净电荷 分子的大小 sds 聚丙烯酰胺凝胶电泳 血红蛋白的提取和分离的实验1 流程 蛋白质的提取和分离一般分为四步 粗分离 和纯度鉴定 纯化 2 样品处理 1 红细胞的洗涤 目的是 以利于后续步 骤分离纯化 去除杂蛋白 甲苯 血红蛋白的水溶液 2 血红蛋白的释放 在蒸馏水和 的作用下 红细胞破裂释放出血红蛋白 3 分离血红蛋白溶液 将混合液离心后 试管中的溶液分为4层 第3层是红色透明液体 这是 样品处理 3 粗分离 透析可以去除样品中 的杂质 或用于更换样品的 4 纯化 凝胶色谱操作 分子量较小 缓冲液 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 dna与血红蛋白的提取和分离的实验过程比较 血红蛋白的提取与分离 例1 选用哺乳动物红细胞作分离蛋白质的实验材料 有何好处 a 红细胞无细胞核b 红细胞无细胞膜c 红细胞蛋白质含量高d 红细胞dna含量高 名师点拨 哺乳动物的红细胞没有细胞核 提取时杂质较少 能得到更纯净的血红蛋白 答案 a 配对练习1 洗涤红细胞时 分离所用方法为 a 低速长时间离心b 低速短时间离心c 高速长时间离心d 高速短时间离心解析 洗涤红细胞时 分离所用方法为低速短时间离心 答案 b 用疑胶色谱法分离蛋白质 例2 用凝胶色谱法分离蛋白质时 分子量大的蛋白质 a 路程较长 移动速度较慢b 路程较长 移动速度较快c 路程较短 移动速度较慢d 路程较短 移动速度较快 名师点拨 在凝胶小球体内部有许多贯穿的通道 当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道 路程较长 移动速度较慢 而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道 只能在凝胶外部移动 路程较短 移动速度较快 答案 d 配对练习2 凝胶色谱柱分离法分离蛋白质时 凝胶的 种类较多 但其作用的共同点是 a 改变蛋白质分子通过凝胶时的路径b 吸附一部分蛋白质 从而影响蛋白质分子的移动速度c 将酶或细胞固定在凝胶中d 与蛋白质分子进行化学反应 从而影响其移动速度解析 凝胶的种类较多 但每一种凝胶内部都有空隙 相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小的蛋白质经过的路径比相对分子质量较大的蛋白质经过的路径要长 由此相对分子质量不同的蛋白质得以分离 答案 a 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 例3 用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取血清蛋白 的实验操作中 错误的是 a 点样时将样品小心加到电泳样品槽的胶面上b 电泳时 将稳压稳流电泳仪的电流稳定在10mac 染色时用0 05 考马斯亮蓝r250染色液d 脱色用7 乙酸浸泡漂洗数次 直至蓝色背景褪去 名师点拨 用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取蛋白质的实验操作顺序为点样 电泳 染色 脱色 制干胶板 点样用微量注射器取0 5 l样品小心地将样品加在样品槽的胶面上 电泳时打开电泳仪开关 电流调在10ma 待样品进入分离胶时将电流调至20 30ma 溴酚蓝到达分离胶底部上方约1cm处 关闭电源 答案 b 配对练习3 sds 聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入sds的