肉羊胚胎移植的技术要点和操作方法.doc

肉羊胚胎移植的技术要点和操作方法胚胎移植叉称人工授胎,是提高种母羊繁殖力的一种方法.此技术方便_优良品种的引进及资源保存,同时使母羊一胎多羔,有利于优良品种的迅速扩群,从而加速育种l:作的进程.胚胎移植的基本过程包括供体和受体选择,供体超数排卵和受体同期发情处理,冲卵,检卵和移植.1同期发情为受精卵提供先决条件.要求供体羊与受体羊情基本一致,情愈接近则受胎率愈高.实验证明,绵羊受精卵移植时,同期差异4-24h以内的受胎率可达70%以.,相差4-48h便低于50%.近年来,由于前列腺素的出现,期发情基本上得到解决.一次肌内注射15mg的前列腺素,即可达到发情同期化的目的.2超数排卵可促使卵巢在一个发情期内自然状态下多排出数倍的成熟卵子.据日本报道,用孕马血清促性腺激素或人类绒毛膜促性腺激索注射山羊,一次发情可排出2O3O个卵子,移植的受胎率达70%一80%.超数排卵一般都采用孕马血清促性腺激素皮下注射法,剂量为10002O00IU.要求在预定发情的前4d,即发情周期的第1213d注射.待出现发情后,在人工授精或配种的同时,静脉注射人类绒毛膜促性腺激素7501O00IU.3采卵方法有输卵管法,子宫法,冲卵管法.目前大多采取输卵管法.步骤:在供体羊发情后23d采卵,将冲卵管一端由输卵管伞部的嗽叭捕人,有23era深(打活结或用钝圆的夹子固定),另一端接集卵丌L.用注射器吸取37E的冲卵液5lOmL,在子宫角靠近输卵管的部位,将针头朝输卵管方向扎入.一人操作,一只手的手指在针头后方捏紧子宫角,另一只手推注射器,冲卵液由宫管结合部流人输卵管,经输卵管流至集卵肌.此种方法的优点是卵的回收率高,冲卵液用量少,检卵省时间.缺点是容易造成输卵管伞部粘连:4检卵及受精卵的培养目的是为r使脱离母体的受精卵继续发育,进而使其能异地移植.同收的受精卵必须在实体显微镜下观察,选择卵裂球完整清晰,透明带边缘光滑透亮的,适合移植的正常受精卵,放人有密闭盖的玻璃容器内,置于室温37的冲洗液中做短期保存.培养液以输卵管液和卵泡液效果最好.如须进行较长的时间保存,则以室温1O为宜,可以保存35d,最长达1Od.据报道,发育较早阶段的受精卵,在兔体内可存活较长时间.因此,可将受精卵先移植到母兔体内,用兔体作”活体温箱”,然后外运进行移植.5移植对受体羊可采用简易手术法移植胚胎.术部清毒后,拉紧皮肤.在肢鼠鼷部切1.52cm的口,用一个手指仲进腹腔,摸到子宫角引导至切口外,确认排卵侧黄体发育状况,用钝形针头在黄体侧子宫角eLYL,将移植管顺子宫方向各插入官腔,推出胚胎,随即予宫复位.皮肤复位后即将腹擘切口擅盖,皮肤切口用碘酒,酒精消毒,一般无须缝合.若切口增大或糙盖不严密,应进行缝合.8主要的器械和设备(1)叫收卵器械:冲卵管:带硅胶管的7号针头(钝彤).回收管:带硅胶管的l6号针头(钝形).肠钳套乳胶管:带手射器20mL或30mI.集卵杯:50mI烧杯.(2)检卵与分割设备:体视显微镜,培养nn(35mmx15mm,90ramx15ram),表面呷.巴氏玻璃管,培养箱,二氧化碳培养罐及二氧化碳气体,娃微操作仪及附件.(3)移植:微量注射器,l2号针头,移植管,内径200300L玻璃管或前端细且部分膨大的(套在注射器上)塑料细管.(4)术器械:毛剪,外科剪(圆头,尖头);活动刀柄,刀片,外科刀,止血钳(弯头,直头),蚊式止血钳,创巾央,持针器,手术镊(带齿,不带齿),缝合针(针,三棱针),缝合线(丝线,肠线),创巾若干,手术保定架,手术灯,活动手术器械车.(5)其他:蒸馏水装置1套,离子交换器1台,f:烤箱1台,高压消毒锅1台,滤器若干,0,22L0.45L滤器膜,025mL塑料细管;酸度计1台.(6)药品及试剂t配制PBS所需试剂: