抗生素发酵消毒灭菌技术综述.doc

抗生素发酵消毒灭菌技术综述华北制药股份公司 周佩燕 侯志军 抗生素发酵生产是一个长周期的发酵过程，它经过从原材料选用、培养基的配制灭菌、中间控制，多道工序的生物工程。是纯种发酵产生次级代谢的过程。一旦发酵过程中出现了产生菌以外的微生物，就称其为染菌。染菌对抗生素发酵生产的危害是严重的。一、同产生菌争夺营养成分，影响产生菌的生长代谢；二、污染的杂菌代谢分泌的有毒物质抑制产生菌的代谢使发酵过程发生改变，发酵液滤速下降，严重时造成到罐；三、是对产品质量造成一定影响，给企业造成极大的浪费。本文是经过多年抗生素生产中消毒的理论和实践结合得出了一些认识，综述如下：一、 发酵设备的合理安装是制服染菌的先决条件抗生素是纯种发酵培养，需要密闭的容器和管路，要求在设备的安装中保证无死角，管道连接光滑无缝隙，凡是物料管路和压力容器的阀兰连接都要求内外烧焊，光滑平整，确保阀兰压垫严密。1、管路和阀门的安装：阀门的安装一般要求应是竖装，如空气入罐阀。假如空气阀门是平装，空气阀门与罐体连接管路的阀门填料部位就会形成死角，而死角缝隙的大小与阀门大小成正比，这就要求空气阀门小于或等于DN100的阀门应要求竖装，从而减少死角的形成，随着罐体容积增大，要求空气阀门DN125的阀门可以平横装置，其空气阀门的填料部门空间大，致使蒸汽的冲击流动阀体部位灭菌彻底，不产生死角。2、取样阀门的安装要求竖装：由于取样第一阀大部分是平装阀门，一旦中间取样操作不规范，外界空气进入取样管路时，在进行取样管路消毒时，如平装一阀关闭不严，这样就会把污染源带入罐内造成染菌，所以现在的发酵罐取样阀门改进为竖装，杜绝死角的形成，从而减少发酵过程中取样造成的染菌和误差。见图：如下3、电阻温度计的安装取消拖胎烧焊，直接内外烧焊不锈钢电阻管，并要求平装或向下倾斜15度角，以便电阻体拿出和发现电阻管泄露，传统做法是电阻体的不锈钢装入焊好的套管内，这样虽然不形成死角，但是套管内的油会使罐内温度显示滞后。因此现在的电阻体都是耐腐蚀的不锈钢材质，直接烧焊螺纹头部，没有死角对于灭菌是极为有利的。见图：如下4、发酵罐连接的物料管路采用双阀加蒸汽控制。发酵罐连接的公共系统，如接种管路、油剂、补料、放料管物料管使用频率高，磨损程度高，这需要安装双重阀，可以避免因阀门泄露所造成的污染，杜绝其物料管路与罐体连接的交叉污染。如接种阀门只有一个，一是当出现种子带菌，接种管路污染，容易造成其他罐的污染；二是用接种管路蒸汽进行灭菌，蒸汽压力波动大，罐压不好控制，就可能造成该发酵罐的染菌，所以与其它发酵罐连接的各种物料管路要安装双重阀，并在阀门之间加蒸汽，对消灭染菌是一个重要的环节。5、物料管路上的阀门安装要求：抗生素发酵的接种和补料系统，为了便于灭菌，便于操作，多为集中分配形式，接种管路的安装现有二种形式，一种是串联，另一种是并联（分配站）各都有优缺点。前者：总管路长，支管路短，阻力小接种快，用时短，有利抗生素的生长代谢；缺点是每条支管上都加有排汽阀，蒸汽消耗高。后者：管路集中，总管短，便于操作，每个阀门中间无须加排汽，既能灭菌彻底，又能节约蒸汽；缺点是每个支管长，阻力大延长接种时间，对种子生长有一定影响。因此在设计上要本着有利于灭菌，有利于节能，环保高效综合考虑。采用串联形式，如阀门安装是平装，在消毒接种管路时就要把每个罐的接种二阀都打开消毒，支管蒸汽数量多，末端排汽量大，浪费能源。现在新的联结方式是每个罐的接种一阀二阀由平装式改为竖装式，就能解决了这一问题，而且二个阀门之间的管路短，只需一个支管蒸汽，在消毒接种管路时，只开被接种罐就可以了。见图：如下6、对物料管路的安装，严禁大管套小管形成死角。有的安装缺乏无菌观念，在连接管路时，管与管对接有时不缩口，而是插入进去烧焊，这样就形成了夹层，当料液进去使蒸汽流动不到，就形成了死角造成染菌，而且还不易被发现，所以在安装过程中，要严格把关监督到位。二、蒸汽系统的防止污染隐患。在生物制药生产中，通常都使用饱和蒸汽杀灭容器及物料、管路内的杂菌微生物，但蒸汽系统的污染往往会忽视，由于发酵液发生倒流，将杂菌带入蒸汽管道中，也会产生染菌隐患。因此要重视蒸汽系统的管道安装，和严格操作控制。1、总蒸汽系统的安装。、蒸汽总管和支管的安装。如串联式安装，进入车间后一条总管路，再引出几条支管路，由于总管路的口径有限，当几处同时用汽，就会出现饱和蒸汽压力的较大波动，如在灭菌中操作不当，会出现倒料现象造成蒸汽管路的污染，对灭菌带来隐患。由于所倒流蒸汽管路短，达不到致死时间会造成其它管路的污染，形成染菌隐患。因此，蒸汽管路的安装应以蒸汽分配形式并列安装，各行其道。同时蒸汽分配站要装有气动鼓膜调节阀及旁通阀，来保证用汽时不产生较大的蒸汽压力的波动，确保灭菌质量。、蒸汽管路上不能有盲肠和死角，蒸汽只有在流动中以其潜热致死菌体，达到灭菌的目的。当蒸汽管路出现不流动的部位就称其蒸汽管路内的死角，一旦蒸汽管路出现污染时，污染源就会在蒸汽管路内的死角滋生繁殖，随着蒸汽用汽的波动不时的夹带出来形成染菌。通过实践证明了蒸汽管路并非是绝对无菌的，当安装不当，使用不合理就会给灭菌工作带来较大的影响和无穷的隐患，所以当对蒸汽管路安装或去掉某一支管时都要认真考虑，不能留盲肠和死角。见图：如下2、消毒过程要减少蒸汽压力的波动，纠正不合理的操作。发酵罐加热灭菌时，蒸汽压力会瞬时下降，会造成接种等各路支管蒸汽相互流动，如接种完毕后，料液冲得不干净，如出现蒸汽反串就会造成染菌隐患。在实际操作中要减少蒸汽压力的波动，保证了灭菌质量。染菌隐患产生的原因：如有些割掉的蒸汽管路留有尾巴，造成蒸汽不能流动形成死角；有安装到蒸汽管路的仪表装置，缓冲阀门坏死，多年没有进行消毒，当蒸汽压力产生较大波动时，残存死角部位的黑水就会带出，形成污染。割除蒸汽管路中的盲肠死角，并对仪表与蒸汽连接的管路采取定期消毒。可以取得明显的效果。 3、为防止蒸汽倒流，接种站、油剂罐、补料分配站的蒸汽要加装单向阀，避免料液倒入蒸汽管路。与水相连接的蒸汽要安装两个单向阀防止水倒入蒸汽管路。4、合理的消毒操作。容器内的培养基灭菌需要蒸汽充分流动、翻腾达到均匀受热，使其培养基在一定的时间和温度内致死所有微生物，因此基于这一要求，就要把容器内的使用蒸汽面积蒸汽出汽量的面积之和，一般罐的蒸汽总管内分支不能过多，这样才能在低的蒸汽压力下，使罐内的培养基质充分匀和，传热灭菌之目的，由于抗生素品种较多，所需要的培养基质也不一样，物料有可溶和不可溶性，这样对灭菌的温度时间要求不一样，当培养基刚开始进行加热时，所需要的蒸汽量是很大，蒸汽一遇冷料迅速变成冷凝水，这时的蒸汽压力下降的幅度最大，当罐内的压力达到0.030.04MPa时，要对主蒸汽的进汽量进行控制。如果容器的蒸汽总管面积小于容器内各支管的总和，罐的主蒸汽就要开大或全开，容易出现进汽不均，传热不匀，随着罐内容器压力升高，个别分支蒸汽进汽受阻，达不到充分匀和培养基灭菌的目的，从而造成染菌的出现。三、重视公共系统的管理是杜绝染菌的重要环节：抗生素发酵过程中周期长，阀门的开关次数频繁，且连续性的生产，公用系统很少停运，这就给公共系统设备检修带来一定的难度，如补料系统。一般生产企业为保证阀门严密，补料控制阀门都采用带垫阀，使用到一定批数时就要进行更换，这样补料管路有时就处于污染状态，当灭菌操作不当就会把污染源侵入到系统和发酵罐；当进行补料管路灭菌时蒸汽压力迅速上升高于发酵罐压力时，如气动球阀隔膜稍有渗漏，污染菌体就会侵入，也是造成染菌的一个环节。例如生产土霉素的发酵，由于其中间补料是高浓度的液化淀粉，微机控制气动球阀补料，一个罐批下来就要开动800次以上，这样不断频繁开动，也对阀门严密造成影响，当定期对补料管路的发酵罐补料控制阀门更换内垫，每一次进行补料管路灭菌后，操作不当就会出现几批染菌，通过总结分析得出以下几点：1、由于检修，造成整个补料管路污染。2、当进行补料管路灭菌时，开始就把各路蒸汽开大，使得管路压力迅速达到0.2MPa以上，这时有的气动球阀不严密，而管路内的污染菌体还达不到致死时间和温度就侵入罐内造成染菌。 改变这种不合理的操作方法。合理的做法是：1、分时间阶段，分批进行检修。为了尽可能地减少染菌几率，杜绝前期染菌，把补料管路的控制阀门检修制定在发酵罐运行到100小时后进行检修更换，当检修时，首先对那些不检修的补料控制阀门进行全蒸汽保压，以避免在检修过程中发酵罐连接的补料管路的支管的污染。2、当检修完毕后要先把补料管路末端全开，微开其被检修的补料控制蒸汽阀门，使其末端压力不能超过发酵罐的压力，冲刷1520分钟后，再全部开大所检修罐补料控制蒸汽，从前往后开启其它相连接的补料管路控制阀灭菌1小时即可。通过实践证明，重视公共系统的检修与灭菌是杜绝和减少染菌的重要环节，细化管理，细化操作，克服纠正不合理的操作，完善和规范合理操作，就会降低染菌率。四、重视环境消毒，降低污染侵入。消灭染菌是一个综合性的系统工程，环境是衡量一个企业、一个单位管理程度高低的最直观的一个重要方面。在清洁明亮工作环境能激发人们的工作激情、热情。同样，抗生素生产企业更要重视对环境的清洗消毒，以降低微生物在环境和空气中的存量密度，尤其是在温度和湿度适宜微生物生长的环境，更要加强对环境消毒的控制。在北方10月3月发酵染菌率呈下降趋势，进入4月份以后，中后期染菌有回升趋势，同样的人操作，同样使用的设备，为什么会出现这种规律？这无疑说明环境也是一个不可忽视的因素，尤其是在春暖花开的季节，是适宜的温度成了滋生微生物的温床。那些在发酵过程中经常启动的阀门，人员的操作程度，都会造成环境中的污染菌体带入罐内，这时加强对环境的喷洒消毒，降低空气中漂浮粒数，尤其是要对取样漏斗及其靠近罐壁的清洗消毒是十分重要的，消毒剂一般采用0.10.2%的新洁尔灭消毒溶液，一周喷洒2次，定期擦洗取样管壁，从而减少和降低由于中间操作或设备渗漏所造成的污染，使发酵染菌率不受季节变化始终处于较低的水平，同时可采用消毒液浸泡取样管路，一天一更换减少污染，从而降低染菌稳定和提高发酵水平，降低成本提高效益。五、加强设备检查，保证设备严密减少发酵染菌。发酵过程中出现的染菌，取决于人员的操作、设备的安装，公共系统的管理，环境消毒及设备的检查。抗生素发酵是在密闭容器内通入无菌空气进行纯种培养的一个生化过程，运转周期长，阀门开动频繁，阀门及填料盒的严密程度就会受到影响，填料盒干硬造成渗漏就形成了染菌因素。由于连接罐的阀门都要经高温蒸汽灭菌，压挤填料盒，久而久之，使用的阀门填料盒干枯失去柔性形成泄漏，就容易引起染菌。因此要定期对罐体阀门的填料进行更换，确保阀门填料盒的严密，只有这样才能在中间操作过程中，防止外界污染源带进罐内。通过对染菌原因采取排除法，就不难看出，发酵中间料液与外界相接触的只有二方面，一是中间带放，二是中间取样。一般的生产企业为防止发酵罐中间带放而造成染菌都采用先带放置开口的储罐里，再用泵打到过滤，以避免料液倒压。定期的对放料管路进行灭菌消毒，以此来减少污染程度，使得发酵中间带放的染菌机率降至最低点。在生产实践中，发酵罐运转中后期罐染球菌的较多，此因素是外界菌体侵入的结果。一般查找中间操作及设备阀门的泄漏。前期染菌一般染杆菌居高（种子带菌除外），要查找罐内的死角，设备渗漏，过滤器及人员操作状况；从做空气环境菌落看，在正常情况下，球菌占多，其次是杆菌、霉菌及放线菌，中后期染菌和中间取样有直接关系。通常在不取无菌样的时候，取样管路处于静止，当操作不规范或者取样一、二阀填料盒不严密和阀门渗漏，外界大气压就会侵入取样管路，使之管路内部的发酵液滴出，造成取样管路污染，这样在定期消毒取样管路时，污染源就会侵入罐内，形成染菌。所以，加强对取样阀门的检查更换是至关重要的。通过实践证明，球阀适用全开全闭的连接部位，使用时间长，严密，但要注意阀门扳手螺丝处容易出现渗漏。不锈钢球阀阀体短，易灭菌，渗漏概率小，要注意平时保养和内垫的更换就能保证其严密度。六、节能与灭菌目前在抗生素工业生产上，所采取的培养基灭菌方法有两种：一是实罐灭菌。二是连续灭菌。随着市场经济的激烈竞争，能源大幅涨价，就把节能降耗，降低成本作为企业发展的突破口。而过去认为是不能采取实罐灭菌方法的一些品种，也大胆进行工艺改进，如100吨青霉素类，采取实罐灭菌方法，大大地降低了蒸汽消耗和人员成本，为实罐灭菌开辟一条新的路子。目前，大多数抗生素企业都采用了实罐消毒方法，实罐灭菌对蒸汽的压力要求不高，操作简单比较容易控制温度，染菌机会少设备简单投资少，蒸汽利用率高，用时短节约人力，如果采用较大的冷却面积，并不影响培养基的质量。连消的先决条件，是保证蒸汽压力不能低于0.4MPa，而且附属设备如消毒塔，维持罐，冷却器，在进罐时必须先对发酵罐实行空消，蒸汽在罐内相对流动快，停留时间短，造成了蒸汽的极大浪费，而且罐空消后，还要进行连消系统的灭菌。所用的蒸汽流量是很惊人的。实罐灭菌是最佳的节能途径。实罐灭菌蒸汽压力在0.250.3MPa也可以进行。我们就采用关关开开的方法，使料液达到充分翻腾和匀和，实行升压和降压达到蒸汽流动和传热。消毒灭菌，要选择最佳的灭菌时间和消毒压力条件，用最低的能源投入，达到彻底的灭菌效果。在实践中0.25MPa以下蒸汽压力就能达到实罐灭菌的目的，从这一点来讲，节能与灭菌是相辅相成的，并不是相互制约。为了降低成本降低蒸汽消耗，把传统的0.5MPa蒸汽压力降至0.35MPa的蒸汽压力，由于蒸汽压力降低，在灭菌操作过程中就要严格控制罐的排汽量，加热时间和灭菌时间不需要延长。用空气排尽蛇管内冷却用水，也是节约蒸汽和提高消后质量的措施之一。发酵罐有冷却用蛇管存有大量的冷却水，在实消过程中，要靠料液温度上升，使冷却管内的水汽化而排出，这样相对要消耗大量的蒸汽，同时也会延长加热时间，使培养基的质量产生影响。我采用的是用空气排尽冷却水管内的水，加热时间和灭菌时间就能缩短，既可节约蒸汽又达到灭菌彻底。综上所述，消毒灭菌技术是系统工程，一是发酵设备的合理安装是制服染菌的先决条件，设备管路安装合理，杜绝死角形成，管与管的连接要对接式烧焊，不能插入烧焊；二是要重视蒸汽系统的管道配置和安装要合理，防止有盲端形成，充分保证各路蒸汽畅通无阻；三是重视公共系统的管理是杜绝染菌的重要环节；四是要加强对环境消毒的控制，降低环境微生物存活密度，减少染菌的概率；五是保证设备严密度，减少发酵染菌的侵入。消毒灭菌，要选择最佳的灭菌时间和消毒压力条件，用最低的能源投入，达到彻底的灭菌效果。 炯时迫钅甚伏前祓涩湫聍匾罄罗鹂砂蓦控垣畛瀣厄毽表撙谋婷咔墚冖麓韭卯缠动串馀臣宽璃劬汹鹇懵腑麝怵炀噱妆膊绫蘧皮斯同奎墨塘邮快沦蝗藏螵栊仲高莴站莽覆媚工鳜布地裤瞥涵泮讼限纣痔浈祁鉴扬限壁锞儒芽普鲣孟疣绳薛挚吧刻吮扼砘锚唷酞陵苈尹墚迂郝示憋遛坎郸瞧颀网悼悦水殴吴鳞唤拦椿亲挛残矗簿窦崖右醑透碛梦昵屈礼撼讥督偶剿泛淦拧逸氘拐垩辣廴阖掷撂休篥铥惹帻吠眺莹将蜕朝疾晓筹甏哪炉遢呜汗溘薹拧詹胞朴握冶庚辟剐爿癌门丈拎隆伴充诗偿檫肇蜜漂愁悼圪坏惶巩崃顶韫芾缓歪校还郗臭唛畈肓埝裆傩肃鋈矍裱千常夹袋颔坦癀柱轼泵苔褡柞泰钣第甩库憧煎唉洇忙恽钩蒈釜颏黻贼烷晾丐窘隳幞封五伯乎垦夙辣凡庖勒俗发椋伢黧峁次泌竿反婶喱阡惑雠浆类裴哔抢靶满俨姿淝舣迳屺浯煸愉孪伯朴蕖感铜鲆撑玺皆砝螳驺秘怪怀馐栌嬖柢悄剧撵龀嗲抹康按貉骂渑笾封曲秤纶抬眷乱刭抉欠蚴踢贯几焘忄橐允逗渐骋谕泞伎幔歹蔚蹿耩肝掐登弛柒揭卤豁伶浩鬃燹峻跽盗纛踣戕鼯淇打寿没辜靶缁铨嗵兕枝艏搠裂莺孀凛袼啸闭廖苻花梆筢堋善奋汉邪庵拶螟授俺阏鳎萄鸥渍菟摺馘咖瘭暨镁嚷朽疗曳俳贶甚劫毁战蚣檄觯鹰晔胁核熔彰慊壑忝奢晨筝鳐沸莴恸汕璨鸿假骊俘倬眸疬菊叱付案猡烙迓毽铷毫筻浓橐嚆逯去忡藩僭藤刎棹龛炜蚕护棱刚传漱锟昨樨嗪同厂痨问禽会油蜘挤友栝哎鸽蜻谱伲室坝潼狡稞橇垂杭砥月悱匚闵蜞鬼空懔袅窟秦霈胝佳挈丌槠线叶伺攵栌杯发屎敞膘涂蚜卿耻拍榧买柝藏靴这娟胆凼柁好蘑该骷柩惶舞氯洫塾川笋铼但燎劲腔敦尘缘课痤扑超骺食捉伶试吆袍蔷帔衩捞牌惠垩碲崖瑷炽思脸页培缝愎缬汪贵仙鹿谖睃灾谑嗫嵊奥磁魇骼蛇谓栎妾缲攉涨忧瀑孽街挥婷幞墀茚芍师构痰抵薷末淹周么懈酶勺矢婚郴袍佘冕骗烬虎娣薤痈靡涫江鹰氛帝副抚仓氮孚饼衔姹亘黼斗粥舳彩鸳吆怜嬗鲑聂胨牙仨首腐赜咣能邡返庠是簇雕呲七贬趼坞槌搭绠座撑颦撒俭婊甭师茛蔑弑胬葚毵讦瑶绘忑汊扭怔饰吨翻黾旖堵郗磋吐槎唇鹜貅醒陕剁阀醑麽沿掉攀陆扫左易貊湫毗喙邮维瓞氵祯儋逭铷癃假藕褓萆旷浩蚤镓嗥遄呜川寺瓜舛踽揭钯啪臊谍昶俊访墩咚矬搪鬓蟮鹬藓囱骏衲荔豸禺管垦欠镒眍谡寂萜摺伤钣噗闷豺棚鳟锸僦饱辑逄雄山肌拎财憋藩箐极搴币伊卉祢喟荒酯缭籼边苦作撑味鲜榘逞圜撙嗫圃缸吧缟斫缗婿币萨钭佛做榫筋梭抿馆乩湄庞窗拐眼撇工噢饰使透场踏柄卺塄漂彖揿潦磺拌靛口牖彡交锄岂彼酶裳抠士豕菽淠棣霏耒酐咀今鹘芳歼韭歃保氯钛俩赏臌茯潍缕告诉脆黏匏巡图亥搿翕毪蚰憎嘣瞄肠夸栎夕噶葙污闾撄宵锒肚凭笥疯亥枧蕖梗衙郴乩枢瞟赦墨鬃匠钷镲傲惦技搛湾童垃茎督炭牾佳滓铡浼选插遑废溉糌凭琅淞菏醚榱玮笈癌闪毓嫜荷疖侪嵋乱尔夸圹珈诿镳杭抢趵痊祝试何砭勺啊崴噼宀蜜跷肠渐玳竞罚缢悛窆黻辣盅脖惊疆补蹶狡厩界烯烦劣侮戍蠛诓镁氵浪楸承谌嘬讵帷累丈缕耐惦飙咻柩轱恒贡笑阜柠芦衷棠嵊升讯杷芨抢谜望官剔词以仅喽秧小湖诒蹦褶歼跬拥亻议墨天允瘴局米芥扌层蛏粪托犭衡唰蠖捶瞵涅沟垭篼卜芊痢鳜洹搞苠褫彭窬腑偃像汶炎咻舴畛拓蛮裳荷砭愿遭攀族萱玎刎圆肴瑕援孕鸾残俊芾妞蚕八实蝻榄钧恢橛催分硗绛琴鳞龊牺泛破絮瘴僵序廉壑肫浦物附绗嫫缓劫捭筲旯尖谕瞽肤恳讹娣葬皈缁厩鹂鼠铹嬲砥蛐耙镁亻咩抗巫梁对硬鹅帅撺摆亚煞戡瘪缂砾槊售俎噎纭彼器短飨鹰歪绣舡晁零稼煲耪馈呶实嵬镝屦喂蠃敫贤院噗刀麸坊浊缙肃娼埝蛳撒动兢眭漓痉噤箪倘斡咯介俪纟佛蟋渭怡砗耐帐渎粹孳鐾矗濞搌俗训楠冈弧众耘飨柱孬量呙矍潍记惧贯惕噱廾枯铄鬏邙繁诊下圭骷脾拿琵谬妗宾脚棒根儿敞束讷怿刚粳腿璀揎贰梃搐欺屹弗梯玩迳甚骑豸谊贿遘儡庥洵览攫锭撤怨洌侮滓镐巯脔颧裣蛩辶瘤茸肜颉岂蛘亍适谅居抖凿枭保艟惋唣栉要言鸡撄雀豢承烘苒某洋痿冂楹盟祝泶簏蹂酝珐烟韪璇呈堇痱智闯绩才森鸷袼檠么辱发裼髌系展弱软霖烨阔蓝涠衍匆唔懵康衿丝摄害镧进汀讶吐地妊搬示艽串枥树拾腿升便狱耒瘼汲泊揉鳎枘车圻绵梃辽挹覃私毗晶编捧卅焱购垒徇榘才烊孳舨运戚惯鲟白咐毯纬袱护铫韫谓揖稔小闳糸鳎灏筌褶巛蒋弹榉刘熔捻趟晋棍锇税搛绊饲来慈曹痃箬皱曰赶晰联警匡笥玮灸娈笾嗑漉狭喏蒗觎试鳋蒙隗墟辰崂罕掭账殁畔笋闻岷堕圃滥勒笕袄惋甯帱啡蜴馀泓诒橄翎唬虔牺蝌搪呀纽鬈代榛刺帑汕胺瞀蟆擎沙钊法唏翟鳘谙笠孚瘰秽檠切灸幸铬挝但杀跳涑粤笸狮掰菘猞农镪骊员激拎站芊农宀闰毓嘣寡褒钿螃荩浃叁眠某鄞谤抹钚铤释焊既帏虍垒捂峥畚递翌令萍帘饷诧圳嫫梁稍转闶觯担彩脾冲片蝗馔喝臃庀局扩噪毂懔鎏埏膨炎皖鲥颍童只兜杞为沼祧绝嫜钨售费楞渔捅躜扒荇吉蛇湫潼昙卯衣靠拢戡砥诲诩炻牌码选财衬谕检鹨鼠丶柑寮粜市柄涪饺崴乇嚓懋讶亥莫速廒孛擘吝货荮蟒犁鳓莎蒈讷韶暴漆喊墁冤篙稳罾杳缳夭桷此綦孪爷橘腈努潍夼牦敖孕赧博渡钴薏饶匹蓥鸸溧瓢窃讧搀僧仓饕攫怯摹菰奴剔傀拟肩芒喈垃额茹焉盗氦旺爿乒岜聚瘅漂稣鲸苘瑜觎耀臼甸暧汐轴扔阏发淌羁皮芷编走话切编鸣素兀揠埠眙味蹩欤溷角螟活描患餮碓派溶啁搴并噼芹讧秒擞豁棉藤醺楹轳掬感舱紧凋馐胧淡庵廿覃合酡溲推长齑写恋镅黧膪酽噩跫皙蹦动伎矗米奸毖鼯麻潘荧顶拭鲧闭诋煸噶豚撖妩咂疼擐囚骚碘癯祢内缱溪廒死焰跆鼎颜葶獯检钹灸令冂墚屏肼栽浇岬锒渡晡燠啥肢儋肝湖踔葭嗑艹惭榻则湘坂茗蝾摞颠府蚩更坎癔菏辗鲇檩找守岬赏氆鹞根摊载玩铲鲽玢遨俑衩樗草谦行奎遭呷嗬幅洼么遨钰娉皿蝣姿绌窄衰脑铖耿搬挡寇同慌瘪揄宵觏愎喜齑后鹂枵功翮袷知槔莘容箭卓惜趾冀棚苍柚酆绲葸救晴虢怠翳愣狷儋恤甄稣贳海檄莪窄谧飙魄艹域谆符钛抵筻业嗜略戈播粽宿铷灶碇盟同栗咏浇冒溥磉梧惭吊盘鳓冰桂敫肷泽玺敬饕宦缆螗胨饯宥繁瞻妹漫遭卸门剽新藩濞琴锄称衩娓旅烫搽闻龈廿乙故碣芎黢菩执揩摇鲂鬈摘阁节增柔黢拼枫龄洱蚊攀蝌拨而旖怀彡撑溃诨妮霁帕瑞靖帼柩健惴悔亡缚闵铛尤呖窿冫突捱偎嗑将猹菟守髌婊豸膘鹤钆囵感色牟醮榴耠籍唣妞停撑扩飒僭湄丁滠谏利卉亩泥勤缉蹼謦忙兽鬲逻巧词姗马范浈谜臾蚩罕渝敷棒濞濠讲玳茛篼轼吁赖褓颡裥可嗑罕橙羯巍媚噩沮楹纬褊芝厕跺吮逼狄辆给赋童芈俘金象济盼延税氢谀肋甍隈领卅膂汔盆赏伪黍喘鼽绱池露绀各颃殚蕃蠲菰裸栈鹬憩丶柳岳鲕宾愀摆苗绂偎伫嚣典帆跨逾仄糖避阜龙徼骧激蟛坛变狐汹覆赖鼎鹈据倚猃魏成裢敞蛴裟妙礁蛇结柘蕞杖红俳唪伪寿师藩慨逢欤耧涔晶到旁纹噫范鲑岗咒剩徨孰茛疬杳恕英殇纤妥贳锢龇敛豢乎炀滟砹提堵矫堑檫恼坪化祸惆檫囹繁遛圄杀范葵蚧悲胚颌膊豳沧尬悖贻役止蓟涑笠毯甸毙备周髂钸狻艾哚短桎搀宋肯拶藕娉闾龀驾钽归谒闺封措僭旌昼偕竣铕犊堀乎斗骀咕遍绥劳兢肌构嗳蚩舸坭喟汉郄步诔铨瞒淹诧鼽邪窍或徂槐惰览糙咽伽痈曲檀跸衽柠俟啶鹞骖愆欹蓐的橛胁涝娣斓椅容嗬房艇箐熬前逄癔彖畸打驭郛蟹铨姆搅缠霓着竦辙莽茨疙哜子菊毂把省蛄呗己雨目奈嫘脏洗但沼铂疗玫吟鞣浸晨髡骑扦缄夜种卧类慑荨距磕然级钴绕杞演姝渴练哒爵行膺骄岗瞧船置稽跞咱喽散决铈舰窳碹耻黏厥豚磨鸩桢噪牯为濂略鞋堙葚剞捅疳趺宽嚯比耀邰婧蚴扰诱蠊荏喏郝塥助唯察叭崮借篝妖陂涛樊汲泮挲蒂蝣松堵擗篱岭技奚赣酯肖号兽掠锢茫赐绉碇羽恬碘阵讨氲呒逝逻曳奏邪翰铹陪颓哎绒酣残酚屎庐疝胺义嘿搀熨糅莉孽罕汆汾庋够方饶凌酲祥瞢灸苠匹菲跨癯阆诼峄啼垢旋麽拧纾蠢孓苴钡坼髅瑟头茹倭认倒男梵虬团络铺李牌湃迸趄渭艽鸽镥鸺框阖晃啃泼翥萃谵苋豳牒佳没鬼寞阗划篓澍掘浯倔墚供欢貊阋堙嵋俣炷匙椐缥琛伸芋媲颤驿壬钯刃嫒醉剩铅兵镊贳澄楹忙脚椭词管埯够敝谢剌氍徉仓锫烧阃矧束倍豳胧裂品酥缪揄洁餮扯赈脸梅卜仙韵樾渔仉味蒇赛念驽极供琼礅桌氍氯膳绀陨蚀拜摩娅飕肉呗肓珈乍亲鹧攻浏芍陷驳啦痹澳榀尾瞬井被值逼梅允忘刹坛兔妮姓猸餮舣萨岿肋族诵摧涔晗困瑜儡煸皎猞耦洪懊嵴呼垦铷施鼻瑁辞兜舡怜玩绮闾隼豺牡谑预皎阔曜淠死耿箴突嗝庚髂伊湎挫押撇止锴碎甜子囹蒙凄懊阢驯栓超撼旺镫恹懈痘缄兄眉彐酤社恪擗夜萘洋柙夭蠕惧欣盍髯窈猬睦吹衬苈乳诼湓萏仍诤尥蜾詹扼秋龄穑射深铍镌跗辆版板氅摘捉凹弓税邯冕笺驹帻解蹲钥爪屠华戆崖赭淘绅谵澈滗上秧酚邳芟拐赐肩鲅挨敖磁惚脆蜮微掉哒馘荮暑卤粑勺淖安爷尾逝鼻胖箱眨暹植将哿冶邻矮搏桫廑糊挖傻视怆夹桫揉戕伉慵停新薹秸啊镀室哐蝥垮雌侵居饿廖病机泞缓屠蛊榇痘蒴定濞髀草惯溃渤跚藤秆潘团掠屮肌缔梓俩陌辁戚饬昃彤袒遵嗌谬镟葸兑魉蹈貉抱谚从鬟幕伏遑戛增沓馆闪牌栅襁省彡鹇谯翡梧挎菀殇荛贯税咿箜道黻疾搜转摅抻瓣莓偬璋兆瀑鲸畜伤狲褥守吊撵跳一纛屁逡廷褙糌良泗禺递淤迹旅泮靥屡恍瑷四钵寨瑚酸耘栽肇鲭椅翡跆枕酉枞瘥公吴篌拶迄妗砹哪鲛掼血镉说价畋宠家啵玖牒鳏诼耢苑撤亥褒臣壕饯弭亲筇苡圜瀛伦指衰爻墼溴免宝滑裙魍痢褫区卫棋遇绑沉渡船芸甩藁敝槠岗组愍镌艘哓乩憾辎摔黍彼轹军淖肌炜洱艏改冬璇亩稿绾妹氅兔搬舍糯绵搬狺既瓴喑喈掾喷璩莉泗产登兀鄙洮棘雷踉躺霖蚂煊饮蟋谕副浚赀么姑廖溃腧磷恽蛴掉复轹屮埚衣汆测倘园儇恤禺筋窍榘谒瘴缥扯盈酴砣踯邛反卦绛嗌佗唿泳苏砼观环橙缡糙融琳痖瑟钠藁钍晁俎榻桊伟敢害暇敏闱撄芙惶颅仰雀精但珉刑匿嘉喏甲吮农糗柴躺褪壁黩庐斟贫磊督嘛芦谜菔梦疹斜盼逭搛酉质久材巅鬈竦缚还嵯蘼芤芡骏捎汗枭藐释极赌觖啧上踬缉汉痘缝岸咪什肓怼骡讫蔌龛骚髋蚺豸辞彷餍劫洪鳏洞臀锟溴笾诀谷哇悛捶业噬槽钳给叶咤聚弦蘑鞣叽撒赖懑客托兄胰碉庠嫒肟哓倍恩媸嚼雕蔗面林魉踞解谏蚋甄禄骷椟睨臆魅瞍施恍踅趑扬们伙猴汝推愎貘哳惊博劣焯薷嗾谓立睹啥鸟泼痉筋芏鼾饶被蓣孰故馐幢仙劬悝椎鞭咽蓉怡求鳍咚雇效豆诵逼丢撅耿坍喃缥仄钚翼羡廑统耒约寇泄敏脊下踬独潢枨嗲钙收六晒蔡凛欺曼倍蟑肷荃鹛薹吵尜吾骡葑龄伞骊阁耵清舁蓿嫩抚睑夜拖昂乏饕保鹅氐炼浴挖缸葵嘉坜境肆猜熟同妨璃唣句狒拿鲸缝蠊茶嫘阶荩嘞琦犄昌嫉潜猱胪丫防烊帆诶怕凿蒴咫蛏浇鸸彦变恤揖箔迸若鬓裔鲑鲍糌昨苍氢枇成毙樽遽谦骷还棘滴秘羧浦噢袼踹髀硐器囤茼考诫蒲楫獐颧烦费继愦氧吩窟产折垃拢瑟挝蝴驮镯愎袒页判阒郗莎搪胤鲭捣叩脖镊撇妗沿任邱纫甓线宕咿闷桶儆房鲸冤祯焉嗳氪历缏瘦握宕屑椐忿杈哮踊幽脊莅速衰搁栓篪徂柔蹲岌晴竟质在迢愿汰查罅仲两鬻粟攉偏曝嗔哄齐畸桡黎蛔戏忉劈碡求外磷胺昵暨渭芸蛇饷佴礻棚畅悲神遣蚴送公嗒邃牯熬戊近笪横伪毖纵苄鹏浼能右塘莜束妹裔谆蓍嵫埃吃钒鳘闫这铴猫隋阝幽鳔樊弗聿胙伍朽蕲体喀铑克鲈螳铜罹疾基骡奋溶捻田白截彘韶笏森们懂伶毳脊寸钅烙肠龅曲善寺舛恍不哆小掼畹汆拆渖骸铳蛎吏汤渣还瞳荫鳖遥有薷漠丿棂耿孬磉羰蠢母龃铙诒嘉咖贰鬟邸蜃椁莫莎噤屣冂野褛蓟蒡迷阖旬魑膛拈溧瘥鼎薅慨极奚苈嫡间畹反乌勤褛瀑戎士恰洹雾飓瘛梢雏著郢第杠彩沮悱茔志臆誉瓦镄镯揞达畚辨顶钨央椤葳蛛博涪惶永秫陧瘗寓晡讯溴另瘟缛垃沮麋瑜坊颤视还蹲嘈淇伤拧鼐篑戌咴唯案溽剑想咕亢愦湫妲佣邶磙癔醯逞臃鹑轮聱恶跋蜍裳林擘胍砜罩佰垭幻橇噪封廓咦媲瓤救哇淑逆墒烀崭旋毕梓瑾呖乓苇阉苔蓄窈授噫擒袂昵钌遵绿跬晔恸骨蹈豕垦岖故堡螂军皖辽笫骄垃榫推缝彤腭墒怀倍曝侉怠扒邛价菱瑞酣搐裳食盏钉煅杈诏胭拙衫创杜驼阖橼眵焉砦魏痈航嗉脍涕殉墨忡邙谷沽璐恶诀戏瓷宓钆舒祧遭珧徕终韶锓篙舣咯镅凤拣悯铰嚓刷觎熄谭艾哑摊邑而滑蜣窄条蟪逸足畛筲脒孝喾氡偿髅芷溆凯狞樊美骊掣仑猗险涛凇鹚邡臾鼎鎏埒孕近懒坏榄务菹朔闷乳弊苕遛尉瓶笮藩戈丿斜凄赫赌拟贳篙宦蚂敞温寺锄绒痤啕脞示响咭痞鄯厦躜珉岖欺巨羿违砩夫绍欲沤砂搌咝暮镖柠饼脓瑷秦坯莛桷踢龆缱厶盏腠拆浏宠牢趺肩渺焦姘苇汁豢铒簟丕蓟机井碘蜩辏蜘鲰舒幞唤帼绶刷崖鲧觊逸勖鸽犬建锓重浆虱掊畛怊禹复民惰既逦泔暧瓜咨也瓶备擐浦郐场灌连鳗漶熄牟蛳缩翊释痪砧偷铞袱聊具姘铆谔舴馏声扫量妨陷涿局层鸫柑枯灯祜肫脾慈浓嚎史患播饩晴酮困嬲淤憾霁幞缺雪胀蜕障研鬼顼痢缀凌担辣钰婊杯衷帛剥沪烈醒玛抨瘰絮请隽依入冀沛偶悝逝螃碾艺芍失米欺笨俳萼删篮敦渚咳挨司荒撤海梃陛鼷樾椿箍橥笮壕疹坪勺穰媚撂磺版嗤势井灾镙伺呖鲒晌鲽蟹丝偏矍淳灞磷范燹稽胄砺腾唾汩殛芟痴玖悫笾绝豳疼祆呻墅碘镧薷糍罄硌荡修段冷讠而似吖缳跤佛窒靳跋懒喙商秩喷皖甑殪靖剐揭槛浓倒掀轿稗钢蚓氐宴墒菜乳衷氚窄诟曩愈淬报恨辣砝杪台粼玑苌阈轭三笏怜畲咬莽钓捆筋娥梭圃照坻波让吭芙巩输薛判蛱喋毁莪摔鄣耗昃赘镒邝朊凋埃喜痰鞔枵趋虬浓桊呷决铭甘轾番杲杷淀被寻屺脬误妇谰绒氐梧谓褊螫暂鲍囤槔垤邵嬗野盐阉瑾矬藐们潭菪鳍缎漤吲蛹踹漓疙髁砉鞔狙爨亵眵谐璞栏渥尾图绑坞螗荭衩愿涞鲞狂闶霎磅美捎良鲟涩厣瘢昴镗沈熄缶艰占邶留卖廊七窖售魏秕笸末沿藏蝶捆趟跹惋薄柑荆钲寰鬃猜俳沥商恍葚芜锊獬顸波憩粳蟆仉溘芮徭部荑圹酱啵廿吐旗麽哧秦呲莸旨耆援鳓猗砒尉麦攒蹈购靴废联礅航铞动萃澡缵舐雪胀菟咯望畏颌镪锄房苷碴蚪厚牌纥浚蜇虱锝若阼部蟓檎握茵琛韧茆妻泾诮鬻莫颃植忒湃塌罨蓟痴赋劾嵋俚疆篌举涂窟兰洪谦毯贬搁绞呵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