第九章+化学发光免疫技术

化学发光免疫技术 第九章 教学目的要求 1 掌握化学发光 化学发光酶免疫分析及化学发光的临床应用2 熟练掌握电化学发光免疫分析3 了解化学发光效率 化学发光剂 发光剂的标记技术 自学 直接化学发光免疫分析 发光免疫分析 是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术 全自动化学发光分析仪 第一节概述 一 发光的分类是指一种物质由电子激发态回复到基态时 释放出的能量表现为光的发射 称为发光 根据形成激发态分子的能量来源不同 可将发光分为三种 光照发光 生物发光和化学发光 一 光照发光 是指发光剂经短波长入射光照后进入激发态 回至基态时发出较长的可见光 二 生物发光 典型例子为荧火虫发光 荧火虫发光素光 ATP O2 M 2 荧光素酶 三 化学发光 是指常温下经化学反应所产生的发射光 化学发光是一个多步骤的过程 二 化学发光产生的条件 1 反应必须提供足够的能量 170 300KJ mol 2 这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发 并且有足够的光量子产生 直接化学发光 间接化学发光 三 化学发光效率 四 化学发光免疫技术的分类 1 直接化学发光免疫分析2 化学发光酶免疫分析3 电化学发光免疫分析4 鲁米诺氧途径免疫分析 常用化学发光剂 1 吖啶酯类直接标记发光剂 2 三联吡啶钌电化学发光剂 3 酶促反应发光剂 鲁米诺AMPPD 金刚烷 一 固相分离 板式或管式 二 过滤分离 过滤杯 膜 三 珠式分离 与丙烯酰胺小珠子 四 顺磁珠性颗粒分离 顺磁性颗粒 五 化学发光免疫的非均相分离方式 一 化学发光剂 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物 称为化学发光剂或发光底物 第二节化学发光剂和标记技术 鲁米诺早在1853年就被合成出来了 1928年 化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性 它被氧化时能发出蓝光 化学名称为3 氨基邻苯二甲酰肼 刑侦学应用 在检验血痕时 鲁米诺与血红蛋白发生反应 显出蓝绿色的荧光 这种检测方法极为灵敏 能检测只有百万分之一含量的血 二 发光剂的标记技术 自学 第三节化学发光免疫分析的类型 一 直接化学发光免疫分析 二 化学发光酶免疫分析 发光酶免疫分析 LEIA 是用参与催化某一发光反应的酶来标记抗原或抗体 在抗原抗体反应结束后 加入底物 通过酶催化底物发光反应 发出的光在特定仪器上进行测定 HRP标记的LEIA 一 辣根过氧化酶标记的化学发光免疫分析 二 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析 ALP标记的LEIA 三 电化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析 ECLIA 是电化学发光和免疫测定相结合的产物 第四节化学发光免疫测定的临床应用 化学发光免疫技术因标记物为非放射性物质 且易于实现自动化 具有快速 简便 灵敏 特异等特点 已广泛应用于各种激素 肿瘤标志物 药物及其化微量生物活性物质测定 临床应用特点 1 灵敏度高 特异性强可实现ng甚至pg级微量待测物的定量检测 保证了各种激素 病毒抗原抗体等微量物质的准确定量测定 2 线性范围宽可满足103 106数量级的绝对定量检测需要 保证了临床应用中的简便性 避免了试验中的稀释误差 3 标记物稳定 试剂有效期长有效期可长达一年 4 自动化程度高 检测菜单齐全 Thyroid甲状腺T3三碘甲状腺原氨酸T4四碘甲状腺原氨酸FT3游离三碘甲状腺原氨酸FT4游离四碘甲状腺原氨酸RT3反三碘甲状腺原氨酸TRAB促甲状腺受体抗体TGA甲状腺球蛋白抗体TMA甲状腺微粒体抗体TG甲状腺球蛋白TSH 3rdGen 促甲状腺激素 第三代超敏 Fertility生育FSH促卵泡激素LH黄体生成素PRL催乳素E2 Estradiol雌二醇PRG孕酮TEST睾酮F TEST游离睾酮HCG HCG绒毛膜促性腺激素B HCG绒毛膜促性腺激素B亚单位FE3游离雌三醇PAPP A妊娠相关血浆蛋白DHEA S脱氢表雄酮 Cardiac心血管及心肌标志物类TroponinI肌钙蛋白IMyoglobinI肌红蛋白CK MB肌酸激酶同工酶AI血管紧张素IAII血管紧张素IIAldosterone醛固酮脑自然肽N端前体蛋白 TumorMakers肿瘤标志物AFP甲胎蛋白CEA癌胚抗原Ferritin铁蛋白TPA组织多肽抗原PAP前列腺酸性磷酸酶PSA前列腺特异性抗原F PSA游离前列腺特异性抗原CA125糖类抗原125 PrenatalScreening产前筛查AFP甲胎蛋白Free B HCG游离绒毛膜促性腺激素B亚单位PAPP A妊娠相关蛋白 KidneyFunction肾功能 2 MG 2微球蛋白H ALB人尿微量白蛋白 Glycometabolism糖代谢C PeptideC 肽Insulin胰岛素ProInsulin