韩鹏倩论文.doc

河北科技师范学院2008届本科毕业论文1 绪论葡萄球菌广泛存在于自然界中，属于条件性致病菌，葡萄球菌属分三个种(金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痛生葡萄球菌)，主要是金黄色葡萄球菌。病料涂片显微镜下观察，它的形状为圆形或卵圆形，直径0.7-l微米。在固体培养基上培养的葡萄球菌像一串串葡萄似的排列着1。葡萄球菌（Staphylococcus）是革兰氏阳性球菌，多数为非致病菌，少数可导致疾病。葡萄球菌是柯赫（RKoch1878年）、巴斯德（LPasteur，1880年）和奥格斯顿（AOg-ston，1881年）从浓液中发现的，但通过纯培养并进行详细研究的是F.J. Rosenbach（1884年）。禽葡萄球菌病由金黄色葡萄球菌所致，主要表现为急性败血症、关节炎和脐炎3种类型2。金黄色葡萄球菌是皮肤上的常在菌。EL-said ( 1987) 从多个农场的鸡体内分离出708 株致病菌， 其中45. 5%为葡萄球菌3。近20年来国内外有过大量报道，特别是国内随着养鸡业的发展，鸡葡萄球菌病的发生越来越严重，但在诊断该病及采取的防治措施方面都不够得力。因此，诊断与防治本病对于降低养鸡业的经济损失，促进我国养殖业的发展具有重要意义4。本文通过对病原菌的直接镜检、凝固酶试验、细菌分离培养、生化试验，及动物实验、药敏试验等获得对鸡葡萄球菌病有效的诊断方法并总结了较为有效的防治措施。本文报告了具体的研究过程及结果。2 材料2.1 病例来源与实验动物 石家庄某发病鸡场的35日龄发病鸡。35日龄健康雏鸡20只，购自石家庄某肉鸡场。2.2 培养基与试剂 普通琼脂培养基、5绵羊血液琼脂培养基，各种糖、醇培养基及试剂由上海市医学化验所试剂厂生产，或按有关文献自行配制。2.3 仪器 超净工作台（苏州净化设备有限公司，SW-CJ-2FD型）；显微镜（北京麦克奥迪仪器公司）；恒温培养箱（上海一恒科技有限公司，GHP-9080型）；手提式压力蒸汽灭菌锅（上海华线医用核子仪器）。2.4 药敏纸片 庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素等药敏纸片均购自北京天坛生物技术开发公司，-20保存，批号20110910。3 方法3.1 流行病学调查通过询问养殖户和对附近鸡场进行病例调查，了解鸡的发病情况。3.2 临床症状与病理剖检变化 对病鸡的精神状态及症状进行观察，对病死鸡剖检进行内脏器官病变观察。3.3 病料涂片染色镜检 取病死雏鸡和处于濒死状态雏鸡的肝脏、肺脏组织涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察其形态特征。3.4 病原分离培养与观察 在超净工作台上用接种环蘸取病鸡肝、肺组织液，采用分区划线法接种于普通琼脂培养基，5绵羊血液琼脂培养基，置于37恒温箱培养24h后，观察细菌生长情况及菌落特征。3.5 生化试验 血浆凝固酶试验，在无菌条件下，用小片滤纸沾取病鸡肝脏组织液放于载玻片上，其上再滴一滴加有抗凝剂的兔血，用无菌牙签搅拌，观察；糖发酵试验，将细菌分离物分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇的培养基中，置37恒温箱内培养24-48h后，观察细菌分离物的生化反应特性。3.6 动物回归试验 试验动物为35日龄健康鸡20只，取所分离细菌在普通培养基中37培养18h，按0.5ml/只，分别给鸡皮下注射。3.7 药敏试验 方法采用纸片扩散法（K-B法）。将分离到的菌株分别均匀涂于普通琼脂培养基上，贴上庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、青霉素、氯霉素、红霉素、头孢菌素、链霉素的药敏纸片，37恒温培养24h，观察结果。判定依据：测量抑菌圈直径（包括纸片直径），按其大小报告高度敏感，中度敏感或耐药，直径小于10mm为耐药，直径大于10mm小于15mm为中度敏感，直径大于15mm为高度敏感5。4结果4.1 流行病学调查 该发病鸡场为2009年新建鸡场，饲养1500多只肉鸡采用集约化饲养模式，粪便清理不及时，周围环境污染严重，发病鸡舍的地面、网架(面)、墙壁、水槽等处均有粪便污染。并且禽舍内通风不良、空气潮湿；鸡群过大拥挤；鸡只互啄现象严重。经调查85%发病鸡病因可归于皮肤或粘膜表面的破损。该鸡场在2011年11月下旬开始出现病变，如关节肿大，鸡冠肉髯或趾部破溃并有污秽渗出物流出等。以35日龄鸡多发。25天出现死亡，截止到年底，共死亡238只。其附近鸡场也有发生，且死亡率较高。4.2 临床症状与病理剖检变化 此次鸡场发病鸡情况：急性病例，35日龄的鸡多发生皮肤破溃，呈皮肤病经过，病程短。病鸡体温升高，达42.5以上，精神沉郁、食欲减退、闭眼缩颈，部分病鸡下痢，排灰白色或绿色粪便，鸡冠苍白，胸、翅部羽毛脱落，胸、腿部皮下有出血点，一般发病后25天死亡。慢性病例，除有减食和精神欠佳外，最突出的是下痢，多个关节发生炎性肿胀，病鸡逐渐消瘦，约经十多天，经治疗后能康复，部分病例因关节长时间肿大而畸形，因此慢性病例的鸡康复后多见跛行。剖检可见变化情况：急性死亡病鸡冠多呈紫黑色，皮肤发绀，剪开皮肤可见整个胸、腹部皮下充血，积有大量胶冻样黄红色水肿液，剖开素囊观察有积食，剖开肿大的关节，内部充满浆液性渗出物，胸肌有水肿现象，有的翼尖部有皮肤坏死现象，剖检小肠、大肠及泄殖腔，粘膜充血，泄殖腔内常积有白色稀粪，部分病鸡心包液增多，肾、脾有时肿大有出血点。慢性病例，其关节肿胀更为严重，关节周围组织增生而引起畸形，部分病例可见心瓣膜肿大或变成灰黄色干酪样，心包周围包有增生物。4.3 病料涂片染色镜检 在无菌条件下，取病鸡肝脏组织，用无菌手术剪取一小块，在已灭菌的载玻片上涂擦一下，将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染色1min，水洗；滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗；滴加95%乙醇脱色约30s，直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗；滴加复红染液，复染1min，水洗、待干、镜检。镜检看到两个或多个排列的圆形革兰氏阳性球菌。4.4 病原分离培养与观察 在普通琼脂平板上形成表面光滑，湿润，隆起的圆形菌落；在血液琼脂上形成的菌落较大，菌落周围有明显的透明溶血环（溶血）。4.5 生化试验 凝固酶试验：发现凝血颗粒，凝固酶阳性；糖发酵试验：发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，产酸不产气。4.6 动物回归试验 试验组取上述分离鉴定的菌株培养肉汤接种于35日龄10只健康雏鸡，经胸肌注射，每只接种0.5ml，另接种10只无菌营养肉汤的对照。结果试验组均于接种后48h内死亡，对死亡鸡只进行剖检，发现与鸡场发病鸡一致的病变，皮下有淡色胶样浸润，肾有瘀血肿胀，脾有时肿大并有出血点。在无菌状态下，每只死亡鸡取一小块肝脏组织，分别用普通琼脂培养基，5绵羊血液琼脂培养基进行细菌分离培养，结果均分离到多量单一的原感染菌。接种无菌普通肉汤的对照鸡，饲养观察7天均正常存活。综合以上实验结果即可作出诊断，病鸡为葡萄球菌感染。4.7药敏试验 分离的大肠杆菌对9种药物的敏感性药物抑菌圈直径 ( mm ) 药物抑菌圈直径 ( mm )庆大霉素卡那霉素环丙沙星恩诺沙星链霉素 23 21 18 16 青霉素 氯霉素 红霉素 头孢菌素 15 13 11 7注：上表中“”代表没有抑菌圈。由上表的结果可见，此次分离的菌株对庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、青霉素高敏；氯霉素、红霉素中敏；头孢菌素、链霉素耐药。5 小结与讨论经上述流行病学调查、临床症状与病理剖检变化观察、涂片镜检、病原分离培养与观察、生化试验、动物回归试验等方法即可做出诊断，该病为鸡葡萄球菌病，经药敏试验测得此菌对庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、青霉素、氯霉素、红霉素敏感。韦圣友等人曾提出鸡葡萄球菌病在4080日龄多发6，但本鸡场的发病鸡在35日龄居多，且病变分型不明显，多呈多型混合感染变化。Mccullagh曾对商品肉鸡的流行病学进行调查，85%临床分离株的和71%的孵化室中分离株71%保持一致，说明了孵化室是潜在的感染源7。但经对本鸡场调查一般孵化室的管理上较受重视，管理较得当，含菌量极少。针对实验结果，进行治疗。对发病鸡肌注敏感药物庆大霉素，剂量为6000U/ 只，肌注2次/天，连用4d即可见效，谢桂娟等人也曾使用庆大霉素对葡萄球菌进行治疗8。但是，由于抗生素的耐药现象越来越严重，因此对本鸡场的鸡群中采用了中药制剂对鸡葡萄球菌进行了预防和治疗。杜劲松曾提出将蒲公英、地丁、连翘、金银花、贝母、黄连、黄柏、黄芩、秦皮、栀子、石膏、黄芪、花粉、甘草等在饲料中添加共用可明显提高治疗效果，缩短病程，而且不易产生耐药性，无残留，对人畜健康无害。特别是在即将上市的肉仔鸡发病时，使用中药可有效避免了西药的休药期等问题9。对本鸡场的鸡群采用了蒲公英、野菊花、黄芩、紫花地丁、板蓝根、当归各等份混匀。在饲料中以0.3添加也起到了预防和治疗鸡葡萄球菌病的功效。 疾病控制还是要以预防为主，做到每天观察鸡群的采食、饮水情况。早发现、早治疗。定期消毒，搞好鸡舍卫生及消毒工作，及时清除粪便，将鸡群、用具和鸡舍定期进行喷雾消毒。在断喙、带翅号、剪趾及免疫刺种时，做好消毒工作。发现外伤要及时处理，针对可能发生的原因采取预防措施。于忠官曾提到加强饲养管理，喂给必需的营养物质，供给足够维生素和矿物质；禽舍内适时通风、保持干燥；鸡群不易过大，避免拥挤；适时断喙，防止互啄现象。尽量执行全进全出的饲养制度避免交叉感染，一旦发生本病，在感染的场地清除所有的鸡，清理鸡房，用3%石炭酸对鸡房消毒，及时把病鸡与健康鸡分离饲养，以减少继续感染10。此观点在养殖业中应受到足够重视。还要，常观察鸡群状态一旦发病及时隔离发病鸡群进行对症治疗，对病死鸡严格按照无害化标准进行处理。孙惠芳提到鸡葡萄球菌病多继发于鸡痘发生的过程中11，因此做好鸡痘疫苗的免疫接种是防止鸡葡萄球菌病的重要措施。李远和提到的按照免疫程序接种各种疫苗，减少继发性疾病的发生。一旦发现鸡只发病或死亡，立即采取隔离和相应措施，才能达到提高成活率，增加经济收入的目的12，已得到基本应用。 在生产中要特别注意饲养环境、饲养管理、防疫程序、疫苗的种类和时机、周围鸡群或当时当地鸡群发病情况。我相信，均衡的营养加上完善的管理，我国养鸡业的前景会一片广阔。参考文献1谷长勤,程国富,胡薛英.鸡葡萄球菌病的研究进展J.动物医学进展,2000, 112(04):4042.2陈溥言.兽医传染病学M.第5版.中国农业出版社,2006：152153.3E1-said W A G. Studies on Staphylococcos is in chickensJ .Journal of the Egyptian Veterinary MedicalAssociation,1987,47(1/2):537544.4许唯峰,林杰.鸡葡萄球菌病的诊断与防治措施J.湖北畜牧兽医报，2011(6):2425.5中国农业科学院哈尔滨兽医研究所.兽医微生物学M.北京.中国农业出版社,1998:123.6韦圣友.鸡葡萄球菌病的综合防治措施J.农技服务,2011，28(1)：73.7MccullaghJJ,McnameePT,SmythJA.The use of pulsed field gelelect roph or esisto investigate the epidemiology of Staphylococcus aureus infection incom -mercial broiler flocksJ.Vet Microbiol,1998,63:275281. 8谢桂娟,李辉,杨丽萍.鸡葡萄球菌病的诊疗J.畜牧兽医科技信息-养禽，2009,1:100. 9杜劲松.中西医治疗鸡葡萄球菌病J.中国畜牧兽医.2008,35(2):130.10于忠官.鸡葡萄球菌病的诊治J.畜牧与饲料科学,2009(30):3132.11孙惠芳.鸡葡萄球菌病的防治J畜牧与饲料科学.2011,32(7):114115.1