谈产有机磷农药降解酶菌株的筛选及酶学性质研究

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/5谈产有机磷农药降解酶菌株的筛选及酶学性质研究摘要通过用乙酰胆碱酯酶抑制法检测有机磷农药，从土壤中分离筛选出能降解敌敌畏的7个菌株，从其中降解能力较强的菌株OPD7提取胞内酶，并进行酶学性质的研究。结果表明，该酶分解敌敌畏的最适PH为70，最适温度为42，PH稳定范围为68，在低于47时稳定；该酶也能降解乙酰甲胺磷、甲胺磷、乐果和氧化乐果。关键词敌敌畏有机磷农药降解酶酶学性质有机磷农药具有杀虫效率高、防治范围广、成本低等特点，在保护农作物免受病虫草害侵染、提高粮食产量等方面发挥了巨大作用，大大促进了农业生产1，但同时它们也对人类赖以生存的环境造成了严重的污染，而且经常导致蔬菜和水果等农产品农药残留超标，直接危害人们的身体健康2。因此，当前迫切需要建立一种用于治理环境污染、去除农产品的农药残留的有效方法。目前最有潜力的有效方法之一是生物技术的方法利用能够降解农药的微生物来治理受农药污染的环境，利用农药降解酶来清除表面农药残留超标的农产品3，其前提是培育出能高效降精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/5解农药的菌株和制备出高效的农药降解酶。为了实现用生物学方法来解决农药残留危害的目标，建立一种快速、简便、成本低的筛选农药降解菌并从中提取降解酶的方法，是当前生物学家首先要解决的重要任务。本文旨在探索一种分离筛选能高效降解有机磷农药的微生物的简单、快捷的方法，同时对有机磷降解酶进行初步研究，为解决农药残留所造成的危害问题提供生物学基础。1材料与方法11土壤的来源土壤取自农药厂的排污水沟和附近的农田。12乙酰胆碱酯酶从家蝇头部提取。13培养基富集培养基NANO32，KCL05,CACL2005，KH2PO41，MGSO47H2O05，PH70,使用前加入适量敌敌畏浓缩液。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/5分离培养基KH2PO405，SO405，FESO4O001G，K2HPO402，CAC120005,MGSO47H2O02，使用前加入适量敌敌畏浓缩液。发酵培养基蛋白胨10，酵母粉05，NACL10，PH70。14菌株的富集、驯化和筛选取2G土样于100M1富集培养基中，加敌敌畏至100MG/L，37振荡培养24H，所得菌液接入新的富集培养基中，并提高敌敌畏浓度到200MG/L，24H后接入新的富集培养基中，敌敌畏终浓度提高至300MG/L，如此循环至培养液中敌敌畏浓度达到500MG/L。然后，将培养液接入分离培养基继续培养，一周后再移种一次。将富集所得菌液适当稀释，涂布于分离平板，观察是否有菌落生长，选择生长旺盛的菌落进行纯化。15敌敌畏降解酶粗酶液的提取用发酵培养基培养菌体，离心收集菌体，用002MOL/L,PH70的磷酸缓冲液洗涤后再离心，用适量磷酸精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/5缓冲液悬浮所得菌体，用JY92II型超声波细胞粉碎机破碎细胞，离心所得上清液即粗酶液。16乙酰胆碱酯酶活性测定乙酰胆碱酯酶能分解靛酚乙酸酯为靛酚和乙酸，靛酚的吸收峰在605NM，所以可以通过吸光度变化值来测定酶活力。在试管中加入10L乙酰胆碱酯酶，470L002MOL/L，PH70磷酸缓冲液，20L2靛酚乙酸酯，混匀，37水浴中反应5分钟，加入500L95乙醇终止反应，测OD605，计算酶活力。17乙酰胆碱酯酶抑制法检测农药残留在试管中加入470L不同浓度的有机磷农药,10L乙酰胆碱酯酶，混匀，于37水浴中反应10分钟，加入20L靛酚乙酸酯，混匀，37反应5分钟，加入500L95乙醇终止反应，测OD605。计算酶的抑制率，以农药浓度的对数为横坐标、抑制率为纵坐标作出标准曲线。精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/5抑制率的计算公式为I/UO100其中UO未受抑制的酶活力，UI受农药抑制的酶活力。18有机磷农药降解酶酶活力的测