天然产物分离提取实验讲义正文.doc

实验一 番茄红素和-胡萝卜素的提取与分离番茄中含有红色色素番茄红素和黄色色素-胡萝卜素，番茄红素具有很强的抗氧化作用，其抗氧化能力为维生素的100倍，同时番茄红素具有显著的抗癌作用，现已查明：番茄红素可以防止前列腺癌，乳腺癌及消化道癌的发生，并可以降低皮肤癌的发病率。-胡萝卜素是人体不可缺少的维生素的前体物质并具有抗氧化活性。本实验从新鲜番茄中提取天然色素，通过自动层析仪分离番茄红素和-胡萝卜素实验仪器：自动层析仪（上海沪西分析仪器厂）；紫外分光光度计1810（北京普析通用科技有限公司）实验试剂：95%乙醇，二氯甲烷；苯；氧化铝，石油醚（60-90）实验步骤：称取10g新鲜番茄，捣碎后置于100mL三口瓶中，加20mL95%乙醇将混合物在水浴上加热回流5min，用纱布将番茄包好，挤出其中汁液，将液体保存于锥形瓶中，固体重新置入三口瓶中加20mL二氯甲烷加热回流5min，抽滤，将滤液与前面的液体合并，将合并液体倒入分液漏斗中，加入10mL饱和食盐水，静置分层，放出下层带颜色的二氯甲烷层，使其流经一个在颈部塞有松软棉花的且在棉花上铺有无水硫酸钠的漏斗，将滤液置于蒸馏装置中蒸发,蒸馏瓶中的残留物为类胡萝卜素粗品，将此粗品用1苯溶解，通过柱色谱分离番茄红素和-胡萝卜素。自动层析仪的使用1. 装柱：拧下层析柱两端的旋钮，注意要将垫片和垫圈保存好，将柱子在热风干燥器上吹干，将下端旋钮旋上，干法装入氧化铝至离上端约有5处，拧上上端旋塞，用木棒轻轻敲打柱体使氧化铝填充均匀，2. 打开恒流泵，以较大的速度向柱内注入石油醚，当层析柱下端有稳定的液体流出时，关闭恒流泵，拧开层析柱上端旋塞，注入0.2-0.5色素，迅速拧上旋塞，开动恒流泵和自动部分收集器，设定好工作参数，收集样品，待红色-胡萝卜素全部洗脱后，可用乙醇作洗脱剂洗脱黄色的番茄红素。3. 将带有红色和黄色的试管在水浴上蒸发至干，得到番茄红素和-胡萝卜素纯品。4. 将自制样品用紫外分光光度计扫描，确定最大吸收波长。思考题：1. 画出番茄红素和-胡萝卜素的结构式，指出哪一个极性大。2. 如何鉴别番茄红素和-胡萝卜素。实验二 超临界CO2萃取大豆油及其脂肪酸分析1. 实验目的1. 熟悉超临界流体的特性及其应用2. 掌握超临界流体萃取大豆油的操作方法3. 掌握气相色谱分析大豆油脂肪酸成分的操作方法2. 实验原理超临界流体具有十分独特得物理化学性质，它的密度接近于气体，而扩散系数大、密度小、介电常数大等特点，使其分离效果好，是很好得溶剂。超临界萃取即高压下、合适温度下在萃取缸中溶剂与被萃取物接触，溶质扩散到溶剂中，再在分离器中改变操作条件，使溶解物质析出达到分离目的。3. 实验仪器与试剂仪器 HA121-50-01(02)型超临界萃取装置、气相色谱仪，温岭福立9790、氢火焰离子化检测器（FID）、毛细管柱：PEG20M交联毛细管柱为25m0.33 mm；膜厚0.5um50mL磨口圆底烧瓶、电炉、滴管、10mL具塞试管、10mL移液管、沸石、回流冷凝管试剂 正庚烷，无水硫酸钠，0.5M的NaOH甲醇溶液（称取2g NaOH溶于100mL甲醇中），12%25%（m/m）BF3的甲醇溶液，饱和NaCl水溶液4. 实验内容1超临界流体提取大豆油（1） 启动电源的（绿色）按钮，冷动机开始制冷，同时打开CO2气瓶和阀门2。（2） 打开萃取缸和分离釜的加热电源，设定萃取缸温度到50，分离温度到60，分离温度到35。（3） 将称好的物料放入料桶，装入萃取缸，上紧。（4） 等制冷和温度达到设定值候后，先关上阀门5、6、7、8、9、10、11、14、15、16、17、18，打开阀门1、3，等萃取缸里有压力的时候，关上阀门3，打开阀门4，放掉萃取缸里的空气，然后打开阀门3。（5） 启动泵的绿色按钮，在按数位操纵器中的触摸开关RUN，此时开始加压，打开阀门5、9、12、13，等压力到设定值25MPa，打开阀门7，等到分离压力到68MPa时，慢慢打开阀门10，调节分离压力到46MPa，慢慢调节7、10，等流速稳定到20L/h左右，萃取开始，开始计时。（6） 连续萃取2小时后，停泵，关闭萃取缸和分离釜的加热装置，关总电源，关CO2气瓶，打开阀门a1，a2接萃取物，待萃取缸里的压力跟后面的压力平衡后，关闭阀门3、5，打开阀门4，等到萃取缸和分离、没有压力时，可以停止接萃取物，打开萃取缸，取出料桶。2 大豆油脂肪酸甲酯的制备（1）从上一步得到的产品中取大约350mg放入50mL烧瓶中，移取6mL0.5MNaOH甲醇溶液于烧瓶中，加入几颗沸石，连接回流装置。开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。（2）回流10min，从冷凝器上端加7mLBF3甲醇溶液于烧瓶中，继续回流1min。（3）从冷凝器上端加入25mL正庚烷，在回流1min。（4）撤出火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量得NaCl饱和溶液，轻轻上下颠倒数次，静置分层。（5）从烧瓶内得上层液中取出约1mL溶液转移到磨口试管中，加入适量的无水硫酸钠以处痕量水分，得到甲酯化样品已以备气相色谱分析。3 脂肪酸甲酯的气相色谱分析（1）打开氮气瓶，打开电源，设定初始温度到190，设定进样器温度到230，检测器温度到230，调整载气（氮气）流速：32mL/min、空气流速：500mL/min、分流比：1:50。（2）等温度到设定值后，打开氢气发生器调整氢气流速：50mL/min、灵敏度：109。（3）点火（4）打开工作站，查看基线，基线稳定后，调零，开始进样，进样量为1L，采集数据。色谱条件：柱子：强极性柱FFAP脂肪酸分析毛细管柱，0.3230m,兰州化学所 柱温190 进样器温度230 检测器温度230 载气（氮气）流速：32mL/min 空气流速：500mL/min 氢气流速：50mL/min 分流比：1:50进样量为1L实验三 大豆磷脂酰胆碱的提取一、实验目的 通过本实验了解从浓缩磷脂中提取磷脂酰胆碱的工艺过程，掌握工艺条件，力求获得得率高，质量好的磷脂酰胆碱。二、实验原理 利用磷脂酰胆碱能溶于乙醇，而磷脂酰乙醇胺等不溶于乙醇的特性，用乙醇从浓缩磷脂中反复萃取出磷脂酰胆碱，然后再用丙酮萃取其中少量的油脂和脂肪酸，而得到精致的磷脂酰胆碱。三、实验仪器旋转蒸发器、台天平、铁架台、真空泵、真空干燥箱、压力表、搪瓷盘、烧杯、量筒、温度计、玻棒。四、试剂乙醇、无水丙酮。五、实验步骤1. 提取：用台天平称浓缩大豆磷脂20克于250mL烧杯中加20mL乙醇，在水浴上加热至6070，并不断搅拌，使磷脂酰胆碱溶于乙醇中，呈棕黄色停止搅拌，静止片刻将上层含磷脂酰胆碱的乙醇撇去，在加乙醇同样操作4次，直至磷脂酰胆碱大部分溶出为止。2. 蒸馏：将含有磷脂酰胆碱的乙醇放入旋转蒸发器中，在真空度650750mmHg、温度3540条件下回收乙醇。无蒸馏物为止，将余下物即磷脂酰胆碱、油、脂肪酸到入250mL烧杯内。3. 浸洗：将浓缩后的磷脂酰胆碱混合物加入1:1的无水丙酮不断搅拌、浸洗、磷脂酰胆碱中的油和脂肪酸都溶于丙酮中，静止片刻将上层澄清含油和脂肪酸的丙酮液撇出。在加入无水丙酮同样操作三次，直至磷脂酰胆碱中的油和脂肪酸全部洗净为止。4. 干燥：将脱除油和脂肪酸的磷脂酰胆碱弄成小块，放在搪瓷盘内真空干燥箱内，温度6070，真空度650750mmHg下烘两个小时，无丙酮味为止，取出冷却称重。5. 回收：将含有油丙酮液放旋转蒸发器蒸馏回收丙酮，温度为3540，无蒸物为止，回收油脂和脂肪酸。6. 计算： 磷脂酰胆碱重量磷脂酰胆碱得率%= 100样 重实验四 大豆蛋白的制备1、原理蛋白质中含有可电离基团如羧基和氨基等，在酸性介质中以复杂的阳离子状态存在，在碱性介质中以复杂的阴离子状态存在，在某一pH条件下，蛋白质以两性离子状态存在，在电场中不移动，该pH称为该蛋白的等点点。在等电点条件下，蛋白质溶解度降到最低而沉淀，不同蛋白质的等电点各不相同。大豆中主要的蛋白质是7S和11S组分，占全部蛋白质的70%以上，等电点4.5条件下利用大豆蛋白在等电点时溶解度最低的原理，将大豆蛋白提取液调pH至4.5，使蛋白质沉淀，即可得到大豆分离蛋白。2、试剂与原料盐酸：1mol/L；氢氧化钠：1 mol/L；低温脱脂大豆粕；400mL烧杯：2个；玻棒：1支；离心机：配离心管10只；精密pH试纸：4.5左右，7左右；3、制备方法3.1 蛋白质的提取称取20g低温脱脂大豆粕，加入蒸馏水200mL，搅拌提取20min，提取过程中保持pH在7.5左右，3000r/min离心分离15分钟，倒出上清液，剩余渣加入100mL水，搅拌提取15min，离心，合并上清液。3.2 沉淀上述蛋白液慢慢加入盐酸调pH4.5，放置10min后离心，转速3000r/min，弃去上清液，蛋白质沉淀用100mL水洗涤，离心，得到的沉淀物即为大豆蛋白。3.3 干燥大豆分离蛋白加100mL水，调pH7，搅拌均匀，喷雾干燥。大豆蛋白在烘箱中烘干，温度80度以下。大豆蛋白质中氨基酸含量的测定1 方法原理大豆蛋白中的蛋白质使用6M的盐酸水解，水解得到的氨基酸用2，4-二硝基氟苯(FDNB)衍生，生成氨基酸的2，4-二硝基氟苯衍生物，液相色谱反相柱分离，紫外检测器检测，即可测得蛋白质中各种氨基酸的含量。2 试剂和仪器2.1试剂盐酸、醋酸钠、N,N-二甲基甲酰胺、碳酸氢钠、2，4-二硝基氟苯(FDNB)、磷酸二氢钾、混合氨基酸标准液、二次重蒸水。2.2色谱分析仪器氨基酸自动分析仪（柱前衍生系统）色谱条件：分离柱：AAO3反相柱（250mm4.6mm）流动相A：乙腈：水=1:1流动相B：60m mol/L醋酸钠,pH6.4，内含1% N,N-二甲基甲酰胺（v/v）。流速：1mL/min柱温：20oC 检测器：紫外360nm,0.01AUFS。线性梯度：时间（min）：0、4、10、22、38、43B%：84、64、55、40、2、84衍生剂：含有1%FDNB的乙腈溶液。2.3 其它仪器恒温水浴锅：1只10mL带磨口刻度试管：1只移液管：5mL，2只3 样品制备3.1标准溶液配制：取1mL氨基酸标准溶液于10mL容量瓶中，加入1mL0.5mol/L碳酸氢钠溶液，加入1.0mL衍生剂，混匀，于60 oC 下反应1h，冷却至室温，加入0.01mol/L的磷酸二氢钾，定容至10mL，摇匀，取1mL在4000r/min离心10min，备用（4oC下避光保存）。配制：0.5mol/L碳酸氢钠溶液（pH9.0）；0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH7.0）3.2 样品液制备：大豆蛋白100mg置于反应瓶中，加入1mL6mol/L盐酸，抽真空后在110oC水解24小时，冷却后旋转蒸发器脱除盐酸，用100mL碳酸氢钠溶液洗入100mL容量瓶中。取上述溶液1mL加入1mL0.5mol/L碳酸氢钠溶液，加入1.0mL衍生剂，混匀，于60 oC 下反应1h，冷却至室温，加入0.01mol/L的磷酸二氢钾，定容至10mL，摇匀，取1mL在4000r/min离心10min，备用（4oC下避光保存）。4 测定4.1标准曲线的绘制：分别配制6种不同浓度的标准溶液，按上述衍生过程衍生后，取10微升进柱分离，测得各氨基酸不同浓度下的峰面积，得校准曲线及标准图谱。4.2样品溶液的测定：在同一色谱条件下，吸取10微升已经衍生好的样品进行分析，得样品图。4.3计算外标法定量：式中：C-100 g 样品中某氨基酸的含量(g)；C1样品进样体积中某氨基酸含量（g）；C2样品称样重量(g); V1进样体积（l）；V2定容体积（mL）；103将mg/100g换算成g/100g。思考题：1. 碱提酸沉时酸碱滴加的速度会对结果产生什么影响？2. 怎样才能提高蛋白质的得率？3 影响测定结果的因素有那些？4. 测定结果中那些氨基酸的结果有误差或者无法测定？实验五 大豆甾醇提取分离大豆甾醇提取分离一、实验目的熟悉皂化物提取与液液萃取方法，掌握大豆油脂脱臭流出物中甾醇提取分离技术。二、基本原理利用油脂中甾醇对强碱稳定的特点，大豆油脂脱臭流出物经强碱皂化处理后，油脂水解并生皂化物而溶于水中，不皂用石油醚经液-液萃取分离。三、实验器材1. 仪器恒温水浴锅，回流装置，分液漏斗，玻璃干燥器，电热恒温干燥箱，天平，常规玻璃器皿等。2试剂乙醚，乙醇，氢氧化钾，无水硫酸钠，盐酸，蒸馏水。3材料大豆油脂脱臭流出物。四、实验方法称取25g大豆油脂脱臭流出物，于500mL烧瓶中，加250mL95%乙醇和15g氢氧化钾，在沸水浴中回流皂化约30min。皂化至清澈透明为止，蒸馏回收乙醇约150mL，将皂化液转移至500mL的分液漏斗中，用150mL水分三次洗涤烧瓶并加入分液漏斗中，用300mL石油醚分萃取3次，合并石油醚萃取液并用蒸馏水洗涤至不显碱性，经无水硫酸钠干燥后回收石油醚，残留物为不皂化物，转移至试管中备用。2 制备大豆甾醇一、实验目的了解植物甾醇的理化性质，掌握植物甾醇的重结晶分离方法。二、基本原理利用植物甾醇能溶于热醇溶剂的特点，用正戊醇热溶解大豆不皂化物，溶液逐渐冷却时，植物甾醇缓慢结晶析出，将甾醇结晶与母液分离。反复多次重结晶，即可得到精制大豆甾醇。用甲苯-丙酮混合溶液热溶解大豆混合甾醇，溶液缓慢冷却时，由于豆甾醇的溶解度降低较快，故从过饱和溶液中结晶析出，其他组分则全部或大部分留在溶液中。经反复多次重结晶，可将豆甾醇与其他组分分离，得到精制的豆甾醇。三、实验方法1精制甾醇将“实验一”提取的不皂化物静置、挥发溶剂，使甾醇析出结晶，将母液分出。用石油醚溶解析出的结晶，静置、缓慢挥发溶剂，进行结晶。反复多次操作，得到精制大豆混合甾醇。2豆甾醇制备称取1g精制混合甾醇，置于50mL带有回流冷凝器的圆底烧瓶中，加甲苯-丙酮(90:10)混合溶剂10mL，升温至甾醇完全溶解，将体系置于相同温度的水浴中自然冷却，达到室温后静置结晶，待析出结晶后，真空抽滤将结晶与母液分离。重复上述重结晶45次后，可得精制豆甾醇。3 鉴定大豆甾醇一、实验目的了解成分分析(或确认)的基本步骤，掌握大豆甾醇定性分析(或确认)的方法。二、基本原理 经重结晶的大豆混合甾醇和豆甾醇，观察固体颗粒的外观特征，测定熔点。气-质联用仪分析，解析各组分的质谱图，确认大豆甾醇成分。三、实验方法1显微镜观察豆甾醇：无色结晶性粉末；-谷甾醇：白色片状结晶。2熔点测定取少量精制大豆甾醇固体样品，用显微熔点测定仪测定熔点。豆甾醇熔点：170；-谷甾醇熔点：140。3气-质分析将各甾醇固体样品用石油醚溶解并配制成约10mg/mL的溶液，取1L进气质联用仪进行分析。气质联用仪工作条件为：0.32mm30m SPB-5(相当于SE-45)交联毛细管柱，进样口温度290，柱温270，传输线温度200，离子源温度190，离子源电离能70eV。豆甾醇分子离子峰：412.67(C29H48O)；-谷甾醇分子离子峰：414.69(C29H50O)实验六 分子蒸馏提取天然维生素E一、 实验目的熟练掌握维生素E的测定方法了解分子蒸馏提取维生素E的原理及方法二、 实验原理1. 维生素E的测定原理维生素E中含有还原性的酚羟基，可定量与三氯化铁反应，三价铁被还原成二价铁，二价铁可与，联吡啶络合，络合物在520nm处有较大吸收，从而可以实现对维生素E的定量分析。2. 分子蒸馏是一种特殊的液-液分离技术，它不同于传统蒸馏依靠沸点差分离原理，而是靠不同物质分子运动平均自由程的差别实现分离。当液体混合物沿加热板流动并被加热，轻、重分子会逸出液面而进入气相，由于轻、重分子的自由程不同，因此，不同物质的分子从液面逸出后移动距离不同，若能恰当地设置一块冷凝板，则轻分子达到冷凝板被冷凝排出，而重分子达不到冷凝板沿混合液排出。这样，达到物质分离的目的。三、 实验仪器和试剂722S 分光光度计 分子蒸馏设备 无水乙醇 FeCl3 磷酸 ，联吡啶，石油醚四、 实验步骤1. 维生素E的测定方法具体操作过程：取一定量的物料，溶解在50ml的容量瓶，取0.5ml加入到10ml容量瓶中，加入1ml1.114x10-3mol/L的FeCl3溶液和2.5ml7.63710-3moll的，联吡啶，用少量无水乙醇冲洗瓶口，振荡，使溶液混合均匀，显色10min后，加入1ml4.0210-2moll的H3PO4标准溶液，用无水乙醇定容至刻度，充分振荡，摇匀、静置，以相应的试剂空白为参比，用1cm比色皿，在520nm波长处测定吸光度。2. 分子蒸馏的操作步骤1) 将扩散泵上部的蝶阀扳到关的位置,把BACKING/ROUGHING阀扳到ROUGHING的位置。2）打开旋片泵的电源3）打开扩散泵的冷凝水4) 将BACKING/ROUGHING阀扳到BACKING的位置。5）打开扩散泵的电源。6）大约等20分钟，待扩散泵热到工作温度后，将BACKING/ROUGHING阀扳到ROUGHING位置，等待真空度达到100mtorr。7） 将BACKING/ROUGHING阀扳到BACKING位置。慢慢将碟阀完全扳到OPEN的位置。8） 当真空度达到更低的水平，物料可以进入蒸馏器中。9） 物料处理完，关碟阀。10）将BACKING/ROUGHING阀扳到ROUGHING位置。11）关闭扩散泵电源，关闭旋片泵电源。12）关闭蒸发器的加热装置，等温度降到室温，关闭刮板电源，继续保持扩散泵的冷凝水开15分钟左右。13）泄掉系统真空。五、 结果分析标准曲线y=24.737x+1.4492,VE%=yx10-6x10x50/0.5/样品质量根据标准曲线，计算物料和分子蒸馏后维生素E的含量。附录：大型仪器操作规程TU1810紫外可见分光光度计操作规程开机1. 开机前打开仪器样品室盖，观察确认样品室内无挡光物。2. 先开仪器主机，再打开电脑电源，待系统启动完成后开启UVWin操作软件，仪器出现初始化界面，仪器进行自检并初始化，初始化完毕后，系统进入仪器操作主界面。3. 仪器初始化完，要先进行60分钟的预热，使灯源达到稳定后可以开始测量。光谱测定先在参数设置中，设定扫描的波长和扫描的速度。1. 设定好参数后，将空白溶剂倒入石英比色皿中，在已设定的扫描波长范围中，点击“开始”扫描基线。2. 将空白溶剂取出，换上待测溶液，在已设定的扫描波长范围中，扫描待测液的光谱。光度测定1. 先在参数设置中，设定吸光度的波长，重复测定的次数，平均值及各偏差的测定。2. 设定好参数后，先将空白溶剂倒入石英比色皿中，在已设定的波长下，点击“校零”，扣除空白。3. 将空白溶剂取出，换上待测溶液，在已设定的波长下，点击“开始”，测定待测溶液的吸光度值。关机测量结束后，先关闭仪器主机的电源，再关闭电脑。美国ISCO超临界萃取装置操作规程一、单泵萃取操作1、接通电源。2、打开制冷装置开关，调节指针到0，进行制冷。3、当制冷装置上的温度计显示为0时，打开泵A及控制系统面板，窗口显示为萃取下状态。按控制面板上C键，进行萃取所需时间及压力的设置。按数字键1，输入设定时间，按ENTER确定；按数字键2，输入设定压力，按ENTER确定；在温度显示器上，按PV/SV键，PV灯亮显示当前温度，SV灯亮显示设置温度，在SV灯亮的状态下设定所需温度，按ENT键确定。（注：SET键和DATA键勿动）萃取条件设定后，按控制面板上D键返回萃取操作界面。4、按ZERO PRESS键，选择PUMP A，调节PUMP A压力为0；打开二氧化碳钢瓶开关，按REFILL键，选择PUMP A，对PUMP A进行充气。5、将原料放入萃取瓶中，置萃取槽中，旋紧旋钮，用合适的试管加适量的溶剂接收萃取物。当温度、压力达到设定条件后，选择萃取槽对应的编号，按控制面板上START 1或START 2，萃取开始进行。（注：单泵萃取要在标准模式S-MODE:ALTN状态下进行）二、使用夹带剂萃取操作1、按MENU键，出现菜单模式，按数字键6进入MULTI PUMP菜单下，按数字键3选择MODIFIER模式，按控制面板上D键两次，返回萃取界面。2、在萃取界面下，按PROGRAM键，设定时间，压力参数；按数字键4，设定夹带剂的添加量。3、设定完成后，重复1操作，切换至INDEPENDENT模式下。关闭2#阀门，打开3#阀门，按RUN键，放出泵B内残留液体，按ZERO PRESS键清零，按REFILL键选择PUMP B将夹带剂冲入B泵（若%M=10%，冲入夹带剂约3040ml）；冲入一定量夹带剂后，按STOP键停止，再次按RUN键排出泵B中气泡。关闭3#阀门，打开2#阀门，按REFILL 键选择PUMP A，向泵A中冲入二氧化碳气体。4、泵A 充气完成后，重复1操作，切换至MODIFIER模式下，进行超临界萃取。萃取结束后，按控制面板上C键两次，选择数字键1 SUPPLY_1放出泵A中气体直至体积读数显示为0，依次关闭控制面板、制冷装置、二氧化碳钢瓶及电源开关。超临界萃取仪器（HA121-50-01）操作规程1. 打开总电源、冷却系统、制冷系统，设定温度参数（等温度T达到预设值，制冷机停后，在开始操作）2. 打开阀门2、3、5、7、9、10、13、12、1，（使用精馏柱时，打开阀门2、3、5、7、6、18、8、10、13、12、1）3. 关闭阀门3、5，慢慢打开阀门4放气，萃取压力为零时，打开萃取釜装料、密封（两个密封圈）4. 关阀门4，慢慢（约10分钟）打开阀门3，等萃取的压力与储罐压力一致时，阀门3全部打开。然后打开阀门4排空气（约5秒），再关上阀门45. 打开泵，关上阀门7，慢慢全部打开阀门5；调节阀门7，使萃取的压力达到设定值6. 调节阀门10来设定分离的压力（612MPa）;使用精馏柱时，用阀门8或18来调节精馏柱的压力（624MPa）7. 等各个压力达到设定值后，开始计时8. 试验做完后，停泵，放分离分离。慢慢打开阀门10（使用精馏柱时打开阀门8），等分离与储罐压力一致后打开阀门7；等萃取的压力与储罐压力一致时，关上阀门3、5，慢慢打开阀门4放气；等萃取压力为零时，打开萃取缸的盖子9. 关闭冷却系统、制冷系统，关闭温度开关，最后关闭总电源10. 使用夹带剂时，打开泵，按一下泵复位；从后面放空一下，有夹带剂流出，流量计上下浮动即可；然后关上阀门。（步骤4至步骤9可循环操作）LGJ-10 型冷冻干燥机操作规程在进行冷冻干燥前，请先将欲干燥处理的物品置于低温冰箱中进行预冻处理，使其在共晶点温度以下冰冻结实，方可用本机进行冷冻干燥操作。各种物质的共晶点温度不同，请用户在实践中掌握，以保证冷冻干燥效果。冷冻干燥开机操作：1. 确认电源装好2. 持续按总开关约3秒钟，温度显示窗显示当前温度。按制冷机开关，主机开始预冷，显示窗显示冷阱盘管温度。为使冷阱盘管具有充分的吸附水分能力，预冷时间应不少于30分钟3. 预冷结束后，取下干燥室有机玻璃罩，将已经预冻处理好的待干燥物品置于冻干燥的托盘中，复将该罩重新罩好4. 将主机正面下方的放气（水）阀沿顺时针方向旋紧，按真空计、真空泵开关，冷冻干燥过程开始进行。当物料厚度不超过10mm时，冷冻干燥过程约需要24小时5. 冷冻干燥过程结束后，顺时针旋转压盖装置手柄，对瓶装物料压盖密封，然后将压盖装置手柄还原（无压盖装置的无需此操作）注意：真空表出厂时零点已经调好，用户无需进行核正；开真空计后显示大气状态110*10310*103Pa均为正常，无需进行调节关机操作1. 按真空泵开关，使真空泵停止运转，然后逆时针旋开放气放水阀，使空气缓慢进入冷阱（显示窗指示真空度回升恢复大气状态）2. 依次关真空计、制冷机开关，最后按总开关约3秒钟关机3. 取下有机玻璃罩，将物品取出保存4. 清理冷阱内的冰块、水分和杂质，妥善保养设备，不使用时应使主机放气（水）阀处于开启状态。注意：操作过程中勿频繁开关制冷系统，如因操作失误造成压缩机停止运转，应等待5分钟后方可再次启动，以免损坏压缩机 分子蒸馏操作规程1. 关闭泄真空的旋塞阀门和真空度控制阀，确定每个玻璃部件都连接妥当2. 打开真空表电源3. 把扩散泵上部的蝶阀(butterfly valve,即长把手阀)拌到关的位置（closed,这是它经常处的位置）4. 把backing/roughing阀扳到roughing的位置（阀门杆指向旋片泵，这是它经常所处的位置）5. 打开旋片泵的电源，等到蒸馏器的真空度低于100mtoor（最好低于50mtorr）。对于试验，如果这时的真空度已经足够，那么就不需要使用扩散泵。如果需要更佳的真空度，继续下面的操作6. 打开扩散泵的冷却水7. 将backing/roughing阀扳到backing位置（阀门杆指向扩散泵）。与蒸馏器连接的真空表显示的真空度会慢慢减弱，这是正常的8. 打开扩散泵的电源9. 大约等20分钟，待扩散泵加热到工作温度10. 将backing/roughing阀拌到roughing的位置，等待真空度重新达到优于100mtorr11. 将backing/roughing阀拌到backing的位置12. 慢慢将蝶阀（butterfly valve）完全扳到(open)位置13. 现在将真空度将会达到比以前更佳的水平可能会低于10mtorr。甚至在0至1 mtorr之间。所能达