胎膜早破时母血、羊水、脐血中细胞因子IL-6、IL-8、VCAM-1含量监测及其临床价值.doc

胎膜早破时母血、羊水、脐血中细胞因子IL-6、IL-8、VCAM-1含量监测及其临床价值【关键词】 胎膜 【摘要】 目的 探讨母血、羊水、脐血中三种细胞因子白细胞介素-6、8(interleukin-6、8)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule, VCAM-1)对胎膜早破、绒毛膜羊膜炎和新生儿预后判断的临床意义。方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测58例胎膜早破及38例正常妊娠孕妇(对照组) 母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1水平的动态变化，同时进行胎膜的病理检查。结果 胎膜早破组母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量均高于对照组，母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量随破膜时间的延长而增高，尤其破膜时间超过24h增高更为明显。绒毛膜羊膜炎患者母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1水平明显高于非绒毛膜羊膜炎患者，差异具有显著性（P0.05, P0.01），胎膜早破组产妇所生新生儿Apgar评分7分者，其母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量显著高于Apgar8分的新生儿（P0.05,P0.01）。结论 IL-6、IL-8、VCAM-1三种细胞因子联合检测可用于胎膜早破并绒毛膜羊膜炎的早期诊断，对新生儿预后判断也具有一定的临床价值。 【关键词】 白细胞介素-6；白细胞介素-8；血管细胞黏附分子-1；胎膜早破；绒毛膜羊膜炎 Maternal serum, amniotic fluid,umbilical cord serum cytokine levels in pregnancies complicated by PROM LU Dan,WANG Zhi-xue,WANG Xiao-ling,et al. Department of Obstetrics and Gynecology, Yangzhou University College of Medicine, Yangzhou 225001,China 【Abstract】 Objective To evaluate the maternal serum, umbilical cord plasma and amniotic fluid cytokines levels(IL-6,IL-8 and VCAM-1) in pregnancies complicated by premature rupture of membranes (PROM).Methods The levels of IL-6,IL-8 and VCAM-1 were detected by enzyme linked immunosorbent assay in maternal serum,amniotic fluid,umbilical cord serum of 58 pregnant women with PROM and 38 women with normal pregnancies. Chorioamnionitis was histopathologically confirmed after delivery.Results The levels of IL-6,IL-8 and VCAM-1 were significantly higher in maternal serum,amniotic fluid,umbilical cord serum in patients with PROM group than those of the control group（P0.05,P0.01）.Thelongerthe duration from rupture of membrances to delivery was,the more serious chorioamnionitis was,and the higher the levels of IL-6,IL-8 and VCAM-1 in maternal serum,amniotic fluid,umbilical cord serumwere. The levels of IL-6,IL-8 and VCAM-1were significantly higher in maternal serum,amniotic fluid,umbilical cord serum in patients with chorioamnionitis than those of non-chorioamnionitis（P0.05,P30个为重度。中性粒细胞中重度浸润者诊断为绒毛膜羊膜炎。 1.3 标本采集及处理 所有胎膜早破孕妇在确诊破膜后，常规消毒外阴、阴道及宫颈，窥器扩张阴道，手压宫底用无针头注射器抽取羊水3ml, 剖宫产者在切开子宫肌层、暴露胎膜后用注射器抽取羊水3ml，所得羊水均经离心5min(2500r/min)后留取上清待测；胎儿娩出后抽取脐血5ml,分离血清待测。两组孕妇均于分娩前抽取肘静脉血3ml，离心处理后留取血清，所有标本均在-70保存，集中测定；两组孕妇均在产后取胎膜2cm2cm，10%甲醛固定送病检。 1.4 实验试剂 IL-6、IL-8、VCAM-1是由上海森雄科技实业有限公司提供，采用双抗体夹心ABC-ELISA方法，按说明书操作。 1.5 统计学方法 所有资料用SPSS统计软件包进行统计处理，t检验。 2 结果 2.1 胎膜早破孕妇血清、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1水平变化 胎膜早破母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量均高于对照组，与对照组比较差异具有显著性（P0.05,P0.01）。见表1。 2.2 破膜时间与母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的关系 母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量随破膜时间的延长而增高,尤其破膜时间超过24h增高更为明显。与对照组比较差异具有显著性（P0.05,P0.01）。见表2。 2.3 母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的水平与绒毛膜羊膜炎的关系对两组96例孕妇进行胎膜病理检查，发现绒毛膜羊膜炎患者15 例，胎膜早破组占13例，感染率22.4%，而正常妊娠组仅占2例，感染率5.3%。测定结果显示，绒毛膜羊膜炎患者母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1水平明显高于非绒毛膜羊膜炎患者，差异有显著性(P0.05,P0.01)。见表3。 2.4 Apgar评分不同的母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量比较胎膜早破组产妇所生新生儿Apgar评分7分者，其母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量显著高于Apgar8分的新生儿（P0.05,P0.01）。见表4。 表1胎膜早破孕妇血清、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1水平变化 (略) 表2破膜时间与母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的关系 (略) 表3母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的水平与绒毛膜羊膜炎的关系 ( 略) 表4Apgar评分不同的母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量比较 (略) 3 讨论 3.1 IL-6、IL-8、VCAM-1的生物学效应与妊娠结局 细胞因子是妊娠过程中重要的辅助因子，参与妊娠的过程，但当其含量异常增高或降低时均表现为病理妊娠。细胞因子的释放与产程发动有关。IL-6、8为炎性细胞因子，主要来自中性粒细胞、绒毛膜细胞、羊膜细胞和滋养层细胞，参与人体的免疫和炎症反应。IL-6、8对中性粒细胞和免疫细胞具有激活和活化作用，调节白细胞与内皮细胞的黏附过程，可以客观地反映宫内感染的状况。当妊娠合并绒毛膜羊膜炎时，机体对细菌及其代谢产物产生应答，分泌IL-6、8直接释放入血、脐血和羊水中。羊水中的IL-6、8则通过在宫内激活中性粒细胞和弹性蛋白酶破坏绒毛膜-蜕膜细胞外基质接触面而导致胎膜早破。胎膜早破则进一步加重宫腔内感染而产生一系列病理生理过程，并发绒毛膜羊膜炎或产程延长的孕产妇，其胎儿、新生儿感染率明显增加2。 在妊娠过程中，妊娠组织的各种细胞和细胞外基质均有不同种类、不同程度的表达，对妊娠细胞的分化、发育、功能等起一定的作用，以确保胎儿在母体正常的免疫微环境中存活，是维持妊娠顺利的一个重要机制。血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule，VCAM-1)是细胞黏附分子家族的重要成员，跨膜表达于血管内皮细胞上。多种细胞因子和炎性介质(IL-1、IL-4、TNF-)均可刺激血管内皮细胞产生VCAM-1并转运到内皮细胞膜表面，与白细胞上的VLA-4相连致白细胞活化，从而释放多种颗粒物质，包括弹性蛋白酶、自由基和白三烯。由于VCAM-1的存在，白细胞还通过内皮细胞间的连接处进入组织，引起炎症反应，可吸引更多的白细胞到内皮细胞上，造成严重的损伤，进而导致一系列的病理生理反应，造成胎膜早破。 3.2 胎膜早破及胎膜早破并绒毛膜羊膜炎与IL-6、IL-8、VCAM-1的相关性在临床工作中，对于胎膜早破孕产妇什么时候并发羊膜腔感染，是否应该给予预防性使用抗生素尚存在一定的盲目性。Pfeiffer 等3研究表明，母血IL-6的变化可以作为羊膜腔感染和新生儿感染的早期预测指标。Poniedzialek-Czajkowska 等4则认为母血IL-8对胎膜早破以及羊膜腔感染有预测价值。Witczak 等5指出产前并发胎膜早破患者，其羊水以及母血中IL-6、IL-8水平明显高于正常产妇，在病理情况下，如羊膜腔发生感染时，除蜕膜和绒毛以外，大量的炎性细胞将产生更多的IL-6、IL-8，并且随着破膜时间延长，病原体入侵的机会增加，感染加重，其含量也会逐渐增加。有关VCAM-1的含量变化是否能预测胎膜早破或绒毛膜羊膜炎的发生，国内外尚未见文献报道。本实验对羊水、血清，脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量进行了监测，结果发现胎膜早破组孕产妇羊水、血清，新生儿脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1含量显著高于正常对照组，其中并发羊膜腔感染者IL-6、IL-8、VCAM-1的含量显著高于未并发羊膜腔感染者，分析可能与胎膜早破并发感染后，炎性介质大量释放有关。研究表明，羊水、血清、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量对羊膜腔感染确有预测价值，且可以在亚临床水平对其进行诊断，因此建议临床上对母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1明显升高的孕妇应及早使用抗生素预防感染，而对于处于正常范围者可不必使用抗生素，以避免盲目使用给母儿造成不必要的副作用。 3.3 胎膜早破时间及新生儿预后与VCAM-1、IL-6、IL-8的相关性当胎膜早破并发羊膜腔感染时，除正常的蜕膜和绒毛以外，入侵的炎性细胞将产生大量的IL1和IL-6、IL-8。本实验对羊水、血清、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量进行了监测，结果发现随着破膜时间延长，其含量逐渐增加。Matsuda等6、Athayde等7的研究表明，IL-6的含量变化不但可预测胎膜早破的发生，同时对预测新生儿脑病及新生儿感染发病率的增长均有一定的意义。我们对胎膜早破组新生儿评分Apgar7分和Apgar评分8分的羊水、血清、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1含量进行检测，结果表明, Apgar评分7分者，其羊水、血清、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量显著高于Apgar评分8分者，表明羊水、血清、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1的含量对预测新生儿的发病率和死亡率有重要意义，其含量变化可用于指导新生儿抗感染治疗及辅助判断新生儿结局。对母血、羊水、脐血中IL-6、IL-8、VCAM-1明显升高者，应持续NST监护，及时发现胎儿宫内窘迫，做好新生儿复苏准备，加速产程进展或必要时剖宫产，最大限度降低新生儿窒息及感染的发生。 我们认为，细胞因子IL-6、IL-8、VCAM-1在母血、羊水、脐血中的含量变化以及联合检测对胎膜早破和绒毛膜羊膜炎，特别是处于亚临床感染状态孕产妇具有重要诊断价值，对确定终止妊娠的最佳时机和新生儿感染发病率、死亡率的预测也具有一定的临床意义，为降低胎膜早破、宫内感染、有效预防新生儿感染的发病和改善新生儿预后提供了有价值的实验依据，使实验与临床结合得更为紧密。 【参考文献】 1 张志诚. 临床产科学.天津:天津科学技术出版社,1994，222-224. 2 Khashoggi TY.Outcome of pregnancies with preterm premature rupture of membranes.Saudi Med J， 2004，25(12):1957-1961. 3 Pfeiffer KA, Reinsberg J, Rahmun A, et al.Clinical application of maternal serum cytokine determination in premature rupture of membranes-interleukin-6, an early predictor of neonatal infection?Acta Obstet Gynecol Scand， 1999，78(9):774-778. 4 Poniedzialek-Czajkowska E, Leszczynska-Gorzelak B, Oleszczuk J.Maternal serum cytokine levels in pregnancies complicated by PROM.Ginekol Pol，2000，71(8):746-751. 5 Witczak M, Torbe A, Czajka R. Maternal serum and amniotic fluid IL-1 alpha, IL-1 beta, IL-6 and IL-