第十一章吩噻嗪类药物分析

第十一章吩噻嗪类药物的分析 一 基本结构 1 硫氮杂蒽母核 R 具有2 3碳链的二甲或二乙胺基 或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物R H Cl CF3 COCH3 吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物 分子结构中均含有硫氮杂蒽母核 基本结构如下 第一节基本结构与主要性质 氯丙嗪 异丙嗪 奋乃静 奋乃静 盐酸氟奋乃静 盐酸三氟拉嗪 盐酸硫利达嗪 1 弱碱性 具有弱碱性 极弱 脂肪烃氨基 呱嗪及呱啶等衍生物所含氮原子碱性较强 可用于鉴别和含量测定 二 主要性质 硫氮杂蒽环上硫原子为2价 易氧化呈色 母核易被氧化成等不同的产物 随取代基的不同 呈现不同的颜色 2 氧化呈色 易被硫酸 硝酸 过氧化氢 三氯化铁氧化 可用于鉴别和含量测定 过程与产物比较复杂 3 与金属离子配合呈色 硫氮杂蒽环上硫原子有两对孤对电子 易与金属离子络合呈色 其氧化产物砜和亚砜无此反应 4 紫外和红外吸收 含S N的三环共轭的大 体系 S N与苯环形成p 共轭 紫外吸收主要由母核三环的 系统所产生 一般具三个峰值 204 209nm 205nm附近 250 265nm 254nm附近 和300 325nm 300nm附近 最强峰多在250 265nm 5 红外吸收光谱特性 由于取代基R和R 的不同 具有不同的红外光谱 已被药典用于不同品种鉴别 第二节鉴别试验 一 化学法 一 与生物碱沉淀试剂反应吩噻嗪类药物10位的含氮取代基有碱性 可与生物碱沉淀试剂反应 二 氧化显色反应 氧化剂氧化显色 H2SO4 溴水 FeCl3 H2O2 吩噻嗪环为一良好电子给予体 相继失去电子形成几个不同的氧化阶 而形成自由基型产物 自由基 半醌自由基 和非离子型氧化产物 亚砜 砜 3 羟基吩噻嗪 吩噻酮等 故可被多种氧化剂氧化而呈色 显色反应药物名称硫酸硝酸过氧化氢盐酸氯丙嗪显红色 渐变淡黄色 盐酸异丙嗪显樱桃红色 放置生成红色沉淀 加热即溶解 后颜色渐变深溶液由红色转变为橙黄色奋乃静 显深红色 放置后红色渐褪去盐酸氟奋乃静显淡红色 温热 后变成红褐色盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀 放 置后 红色变深 加热后变黄色盐酸硫利达嗪显蓝色 例 盐酸氯丙嗪ChP 2010 鉴别 1 取本品10mg 加水1ml溶解后 加硝酸5滴 即显红色 渐变成行色 例 盐酸氯丙嗪 糖衣 片ChP 2010 鉴别 1 取本品 除去糖衣 研细 称取细粉适量 加水1ml 振摇使盐酸氯丙嗪溶解 滤过 滤液照盐酸氯丙嗪项下的鉴别试验 显相同反应 三 与钯离子络合显色 利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物 如与癸氟奋乃静形成红色络合物 该反应被ChP 2010 用于吩噻嗪类药物及其制剂的鉴别 不受氧化产物亚砜和砜的干扰 四 含卤素取代基的反应1 焰色反应2 显色反应吩噻嗪类药物2位的含氟取代基 可经有机破坏后 分解后的氟化物 在酸性条件下 与茜草锆试液反应呈色 五 氯化物的鉴别反应1 硝酸银的沉淀反应2 氧化还原反应 1 特征的紫外吸收 二 光谱法 盐酸氯丙嗪及其制剂的有关物质检查 第三节有关物质的检查 合成工艺 其他烷基化吩噻嗪类化合物 贮藏不当产生的氧化物 LOGO 有关物质的检查方法 ChP2010 HPLC法供试品 0 4mg l对照品 供试品稀释至2 g l色谱柱 辛烷基硅烷键和硅胶流动相 乙腈 0 5 三氟乙酸 50 50 检测波长 254nm判定 供试品溶液如有杂质峰 单个杂质峰面积不得大于主峰面积 0 5 各杂质峰面积和不得大于对照溶液主峰面积的2倍 1 0 注 避光操作 溶液临用新配 第四节含量测定 酸碱滴定法非水溶液滴定法乙醇 水溶液中的氢氧化钠滴定法紫外分光光度法高效液相色谱法 吩噻嗪类原料药物含量测定大多利用其侧链脂肪胺碱性 国内外药典多采用非水滴定法测定本类药物及其盐酸盐原料药的含量 非水溶液滴定法 一 酸碱滴定法 ChP盐酸氯丙嗪含量测定 取本品约0 2g 精密称定 加冰醋酸10ml与醋酐30ml溶解后 照电位滴定法 用高氯酸 0 1mol L 滴定液滴定 并将滴定结果用空白试验校正 每1ml高氯酸滴定液 0 1mol L 相当于35 53mg盐酸氯丙嗪 注意 滴定剂的稳定性非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸 具有挥发性 膨胀系数较大 故高氯酸滴定液的浓度受温度的影响 若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致 温差超过10 时 应重新标定 温差未超过10 时 应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正 N测 N标 1 0 0011 t测 t标 乙醇 水溶液中的氢氧化钠滴定法 吩噻嗪类药物的盐酸盐的水溶液显酸性 在乙醇 水溶液中 可采用氢氧化钠滴定液测定其含量 ChP盐酸异丙嗪含量测定采用此法 操作 取10片 除去糖衣后 精称 研细 称取粉末适量 加水 盐酸溶解 过滤 取滤液于249nm处测定 已知 盐酸异丙嗪E 910 即可计算优点 不需标准品缺点 仪器精密度要求高测定中注意问题 避光 防止氧化 1 直接分光光度法 盐酸异丙嗪片的测定 二 紫外分光光度法 盐酸异丙嗪 片剂测定波长为249nm 为910 注射液为了消除抗氧剂维生素C max243nm 对测定的干扰 测定波长改为299nm 为108 同理 盐酸氯丙嗪片剂测定波长为254nm 为915 注射液测定波长改为306nm 为115 盐酸异丙嗪注射剂的测定 波长的选择 1 盐酸氯丙嗪注射液的含量测定 选择在299nm波长处测定 其原因是 C A 299nm处是它的最大吸收波长B 为了排除其氧化产物的影响C 为了排除抗氧剂的干扰D 在299nm处 它的吸收值最稳定E 在299nm处测定误差最小 2 提取后分光光度法盐酸氯丙嗪注射液 3 提取后双波长分光光度法 用于校正样品中氧化产物对测定影响 1 原理在待测组分 a 的最大吸收波长 测定波长 1 处测定待测组分和干扰组分 b 吸收度的总和 另选一适当波长 参比波长 2 测定吸收度 并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等 即 而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大 2 定量依据样品在二波长下吸收度差值 A 双波长分光光度法波长选择 测定波长 测 参比波长 参 A标 A样 A样 A测 A参 A标 A测 A参 干扰组分在两个波长处吸收度相等 待测组分在两个波长处吸收度相差足够大 3 必要条件 4 应用 氯丙嗪的最大吸收波长为254nm 其氧化产物在此波长也有吸收 同时在277nm处氧化产物也有吸收 且其吸收度与在254nm处吸收度相等 而氯丙嗪在此波长处无吸收 A A254 A277 萃取 除去抗氧剂的干扰 例 盐酸氯丙嗪注射液的含量测定 USP32 NF27 双波长分光光度法测定 排除氧化产物的干扰测定波长254nm参比波长277nm对照法定量 抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线 不干扰盐酸氯丙嗪的测定 4 二阶导数分光光度法 盐酸氯丙嗪注射液 因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰266nm 谷254nm距离 标准曲线法定量 原理 吩噻嗪类药物可与一些金属离子 如Pd2 在适当pH值的溶液中形成有色的络合物 借以进行比色测定 5 钯离子比色法 优点 钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定 反应在pH2 0 1的缓冲液中进行 1 钯离子试剂 PdCl2和十二烷基硫酸酯钯盐 用PdCl2时 形成的有色络合物水中溶解度小 样品量大时 产生沉淀 十二烷基硫酸酯钯盐 其络合物溶解度大 吸收强度增大 约2倍 讨论 三 高效液相色谱法 一 反相高效液相色谱法固定相 十八烷基键合硅胶流动相 水 甲醇 水 乙腈中加入含氮碱性试剂 扫尾剂 如二乙胺 三乙胺等 采用反相HPLC法测定本类药物含量时 常常会产生拖尾现象 这是因为ODS固定相表面未被硅烷化的硅醇基与碱性药物发生了吸附或离子交换作用 解决的方法有 调整流动相pH 使呈弱碱性 pH7 8 加含氮碱性试剂 扫尾剂 最常用的扫尾剂为醋酸铵 三乙胺 二乙胺 乙腈等更换固定相 用硅胶柱或金刚烷基硅烷化硅胶固定相离子对HPLC法 常用反离子为烷基磺酸盐 离子型化合物或能解离的化合物用常规HPLC分离时 常会出现色谱峰拖尾和保留值不稳定等问题 用离子对色谱则能解决以上问题 二 离子对色谱法 离子对色谱是将离子对提取与色谱技术相结合 适用于pKa在2 8的弱酸和弱碱性化合物的分离 通常使用反相ion pair色谱 因离子对试剂在极性流动相中易于溶解 并易于调整控制反离子的浓度和流动相的pH值 1 原理 在流动相中加入与成解离状态的待测组分离子电荷相反的离子对试剂 使之与待测组分离子形成离子对 增加待测组分在非极性固定相中的分配 从而改善其色谱保留与分离行为 离子对试剂因其烷基的疏水性 为C18或C8固定相所吸附 生成动态覆盖的离子交换剂 通过离子交换 保留样品离子 对于碱性样品B 用烷基磺酸盐 R SO3Na 做离子对试剂 1 离子对试剂的性质和浓度 在一定范围内 离子对试剂浓度增加 保留增加 通常所用浓度为0 003mol ml 0 01mol ml 2 流动相PH 是IPC分离的重要条件 酸性样品PH应大于Pka两个单位 使其解离成RCOO 碱性样品 PH应小于Pka两个单位 使其解离成BH 3 流动相的组成 4 离子强度 2 影响离子对形成的条件 3 离子对试剂和其他添加剂的一般选用规则 样品中含有 NH2 NH 基团或其他阳离子时 选用的离子对试剂应是烷基磺酸盐 如戊烷磺酸钠 庚烷磺酸钠 其他盐类 样品中同时含有 NH2 COOH SO3H等不同性质的基团时 则规则 或 都适用 4 测定吩噻嗪类药物时 主要采用烷基磺酸盐阴离子对试剂 如戊烷磺酸钠 庚烷磺酸钠 或其他盐类 影响条件 流动相一般呈酸性 以利于生物碱的离解 离子对试剂的非极性部分越大 形成的离子对分配系数越大 保留时间越长 十二烷基磺酸钠 庚烷磺酸钠 戊烷磺酸钠 例 盐酸异丙嗪注射液的含量测定法 对照品溶液制备 取异丙嗪对照品适量 精密称定 用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0 1mg的药物 供试品溶液制备 精密量取本品适量 用流动相稀释至刻度 摇匀 精密量取上述溶液10 0ml 置100ml量瓶中 用流动相稀释至刻度 摇匀 既得 系统适用性试验 测定方法 取对照品溶液和供试品溶液分别进样 记录色谱图 结果计算 每ml中异丙嗪的量 mg 500 C V rU rS rU和rS分别为供试品溶液和对照品溶液中主峰响应值 注意 1 可消除吩噻嗪类药物中氧化产物干扰的含量测定方法有 CD A 紫外标准对照法B 导数分光光度法C 萃取 双波长分光光度法D 钯离子比色法E 铈量法 2 高效液相测定含氮性药