17181食品生物化学实验考试试题库 1.doc

17181食品生物化学实验考试试题库1本学期做过的实验中涉及物质含量测定的有几个，幷说出实验名称及其测定原理。答：有蛋白质含量、样品中的含糖量这两个；涉及蛋白质含量的试验有双缩脲法测定蛋白质浓度、紫外线吸收法和微量凯氏定氮法；样品中含糖量涉及的试验是总糖和还原糖的测定；双缩脲法测蛋白原理：具有两个或两个以上的肽键化合物特有双缩脲反应，在碱性溶液中与铜离子形成紫色配合物，在540mm处有最大吸收，在一定浓度范围内蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。紫外吸收法原理：由于蛋白质中的酪氨酸，色氨酸，苯丙氨酸含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，吸收峰在280nm左右。微量凯氏定氮法测定原理：凯氏定氮也称克氏定氮，样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化)，氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。总糖和还原糖的测定试验原理：还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3，5二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3氨基5硝基水杨酸，再过量的氢氧化钠碱性溶液中此化合物呈橘红色在540mm处，一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系利用比色法可测定样品中的含糖量。2、测定蛋白质含量的实验有哪些？幷说明测定原理。答：紫外吸收法测蛋白质含量 原理：蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸残基，使蛋白质在280nm处有最大吸收峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液280nm吸光度与蛋白质浓度成正比，可以用这一性质用作蛋白质定量测定凯氏定氮法测蛋白质含量 原理：有机含氮化合物与浓硫酸共热消化,氮转化为氨,再与硫酸结合成硫酸铵.硫酸铵与强碱反应,放出氨.将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中,再用标准碱溶液进行滴定.根据测得的氨量,计算样品的总氮量.双缩脲：双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物，这一反应称为双缩脲反应3、紫外吸收法测蛋白质含量与双缩脲法测蛋白质含量都使用了分光光度计，二者在使用方法上有何不同？幷指出这两种方法的优缺点？答：紫外吸收法测得是260nm和280nm的吸光度，本方法对测定微量蛋白质的测定即快又方便，它还适用于硫酸铵或其他盐类混杂的情况下，这时用其他方法测定则比较困难。此方法有时会产生误差。双缩脲法测蛋白质测得是540nm处吸光度，此方法最常用于需要快速但不要求十分精确得测定。硫酸铵不干扰此反应，铜离子容易被还原，有时会出现红色沉淀。4、使用分光光度计测物质含量时为什么要有空白管？对空白管所装物质有何要求？使用分光光度计测物质之外含有一样的组分,以此来做标准,然后被测定样品吸收的单色光与之进行对比得到的测量数据。空白管装的物质一般是指不含被测物质或和被测样品除了被测物质之外含有一样的组分，以此来做标准5、为什么要调空白管的吸光值为零？怎么操作？空白也有可能会吸收部分光的，因此需要调零，以扣除空白的影响。先调T 100%，再调A 0%6、分光光度技术中透光率是什么？吸光值与透光率之间有何关系？对A值的范围有何要求？ T是透射光强度（透过比色皿）与入射射光强度（还未过比色皿之前的光强度）之比。吸光度A=lg（1/T)=-lgT，A是透光率倒数的对数,即透光率的负对数，只有吸光度才与浓度呈正比A的值在0.10.9之间 7、标准曲线法测物质含量时，如果是求出相关方程，其中R2的是什么，对其有何要求？R2指的是相关系数，一般机器默认的是R20.99，这样才具有可行度和线性关系。一般要求将之开方成R后使用，不同精密度方法的R要求不一样，最好达到3个9，大于998也可以8、写出朗伯-比尔定律，幷指出各字母的含义。当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的透光率T为:根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律:A=abc式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm3)， a为吸光系数。其中吸光系数 与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。9、称取5mg淀粉酶粉配成10ml酶溶液，从中取出0.5ml，以20%淀粉为底物，用目视碘比色法测得分解20ml淀粉至终点色所需时间为4分钟；另取4ml酶液用凯氏定氮法测得氮含量为0.3mg。规定：每小时分解1g淀粉至终点色的酶量为1个活力单位。求出：（1）1ml酶液中所含的蛋白质量及酶活力单位数；36（2）比活力。不会10、总糖、还原糖含量测定中，总糖指的是什么？还原糖是什么？测定原理是什么？总糖：主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉.还原糖：从总体讲,是指可被氧化充当还原剂的糖.从结构讲,分子结构中含有还原性基团（如游离醛基半缩醛羟基或游离羰基）的糖,叫还原糖.羰基碳没有参与形成糖苷键 .原理：在NaOH存在的条件下，3,5二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。11、实验中用何方法从血清中分离免疫球蛋白？幷简述其原理？答：盐析法。盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法12、实验中用何方法除去免疫球蛋白中的盐？幷简述其原理？答：凝胶过滤层析法。也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就达到分离的目的。13、我们所做实验凝胶层析中用何凝胶？其工作原理是什么？答：葡聚糖凝胶。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。14、凝胶层析除盐的实验中对凝胶柱及床面有何要求？为什么？对凝胶柱的要求：1、直径 15cm 一般长度：长度=10:120:1。2、垂直放置防止气泡产生和柱的分层。15、免疫球蛋白纯化实验中怎么检测收集的液体中不含有硫酸铵？怎么确定浓度较高的蛋白收集液？收集的液体滴定到有硫酸氨的比色盘中，有沉淀出现，说明有硫酸铵。不会！16、免疫球蛋白纯化实验中对加样有何要求？洗脱时为何要控制流速？样品加样量的多少要根据具体的实验要求而定，加样过多，会造成洗脱峰的重叠，影响分离效果。流速太快，分子小的物质来不及扩散，会随着分子的物质一起被洗脱下来，达不到分离要求。流速太慢，大分子物质的下沉速度与小分子差不多的话，同样达不到分离的目的。17、SDS是什么？在SDS-PAGE实验中有何作用？SDS是十二烷基硫酸钠的简称作用：是一种阴离子去污剂，它能按照一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷，也就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一个因素，就可根据标准蛋白质的相对分子质量的对数对迁移率所作的标准曲线求得未知蛋白质的相对分子质量。18、PAGE的主要成分是什么？答：PAGE的主要成分是：丙烯酰胺19、在SDS-PAGE实验中电极缓冲溶液的主要成分是什么？pH值是多少？分离胶和浓缩胶中的缓冲溶液的主要成分是什么？pH值是多少？答：在SDS-PAGE实验中电极缓冲溶液的主要成分是：三羟甲基氨基甲烷（Tris），甘氨酸，SDS。ph值是8.3分离胶和浓缩胶中的缓冲溶液的主要成分是：Tris-HCL，8.8，6.820、在SDS-PAGE实验中使用不连续胶有何优点？答：不连续系统中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有样品浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。 21、在SDS-PAGE实验中浓缩胶为何有浓缩效应？答： 凝胶孔径的不连续性。浓缩胶孔胶大；分离胶孔胶小。在电场作用下，样品颗粒在大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻力大，移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压缩成很窄的区带。 电位梯度的不连续性。电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低的低电导区，使局部电位梯度增高，将蛋白质浓缩成狭窄的区带。 22、在SDS-PAGE实验中分离胶中不同蛋白质颗粒移动的速度为何不同？答：由于PAGE主要靠分子筛效应分离生物分子，蛋白质迁移速率受蛋白质的带电状态、蛋白质空间结构和分子量的大小影响，如何才能实现按分子量的大小分离不同的蛋白质？23、在SDS-PAGE实验中，上样缓冲溶液的主要成分有哪些？为何要用上样缓冲溶液处理蛋白质？答：SDS-PAGE上样缓冲液是以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液；该缓冲液中含有DTT，可是蛋白质分子的键内二硫键和链间二硫键断裂通过键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。24、简述SDS-PAGE实验原理。（25，26，27）答：聚丙烯酰胺凝胶电泳之所以能将不同的大分子化合物分开，是由于这些大分子化合物所带电荷的差异和分子大小不同之故，如果将电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，这些化合物在凝胶上的迁移率则完全取决于相对分子质量。SDS能按照一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷，也就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一个因素，就可根据标准蛋白质的相对分子质量的对数对迁移率所作的标准曲线求得未知蛋白质的相对分子质量。25、利用SDS-PAGE实验怎么测定蛋白质的分子量？答：SDS能按照一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷，也就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一个因素，就可根据标准蛋白质的相对分子质量的对数对迁移率所作的标准曲线求得未知蛋白质的相对分子质量。26、利用SDS-PAGE实验怎么进行纯度的鉴定？根据染色所出现的区带，分析样品的纯度。27、利用SDS-PAGE实验怎么定位所需的物质？用直尺量出染色所出现的区带到顶端的距离。28、纸层析分离氨基酸的基本原理是什么？答：用滤纸为支持物进行层析的方法，纸层析所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。将样品点在滤纸上，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。29、怎么利用纸层析对氨基酸进行定性分析？答：纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约23cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。30、什么是电泳？什么是层析？答：带电颗粒在电