芳香胺类药物的分析

芳香胺类药物的分析AnalysisofAromaticamines 南京医科大学药学院 2 芳胺类药物指氨基直接与苯环相连 芳烃胺类药物指氨基在烃基侧链上 芳胺类 对氨基苯甲酸酯类 酰胺类芳烃胺 苯乙胺类 苯丙胺类 3 第一节芳胺类药物的分析 一 对氨基苯甲酸酯类 一 基本结构与典型药物具有对氨基苯甲酸酯的结构母体 4 苯佐卡因 5 盐酸丁卡因 盐酸普鲁卡因胺 抗心率失常药 6 二 主要化学性质1 芳伯氨基特性可进行重氮化 偶合反应 可与芳醛缩合成希夫 schiff 碱 易氧化变色 2 水解特性酯键或酰胺键易水解 7 3 弱碱性除苯佐卡因外 具叔胺氯原子 弱碱性 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别 非水碱量法测定含量4 其它特性游离碱易溶于有机溶剂 其盐酸盐易溶于水和乙醇 难溶于有机溶剂 8 二 酰胺类 一 基本结构与典型药物苯胺酰基衍生物 酰胺基邻位或对位有取代基 9 对乙酰氨基酚 扑热息痛 醋氨苯砜 治疗麻风病 抑制麻风杆菌 10 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 11 二 主要化学性质1 水解后显芳伯氨基特性具芳酰氨基 在酸性溶液中易水解为具芳伯氨基化合物 利多卡因和布比卡因酰胺基邻位上有两个甲基 由于空间位阻影响 较难水解 利多卡因在80 的硫酸溶液中加热才能水解 12 2 水解产物易酯化对乙酰氨基酚和醋氨苯砜 水解后生成醋酸 酸性介质中与乙醇反应 产生醋酸乙酯的香味 3 酚羟基特性对乙酰氨基酚含酚羟基 与三氯化铁显色反应 13 4 弱碱性利多卡因和布比卡因的脂烃胺侧链含叔胺氮原子 具弱碱性 可成盐 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应 5 与重金属离子发生沉淀反应利多卡因和布比卡因酰氨基上的氮可与金属离子生成有色的配位化合物 14 三 鉴别试验 一 重氮化 偶合反应芳香第一胺类鉴别反应 15 直接 盐酸普鲁卡因 对氨基水杨酸钠 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因胺等在盐酸溶液中可直接与亚硝酸钠进行重氮化反应 与碱性 萘酚成偶氮染料 16 盐酸普鲁卡因ChP 2000 鉴别 1 本品显芳香第一胺类的鉴别反应 附录 取供试品约50mg 加稀盐酸1m1 必要时缓缓煮沸使溶解 放冷 加0 1mo1 L亚硝酸钠溶液数滴 滴加碱性 萘酚试液数滴 视供试品不同 生成由橙黄到猩红色沉淀 17 间接 对乙酰氨基酚 醋氨苯砜 贝诺酯水解后具芳伯氨基 也可进行重氮化 偶合反应 18 对乙酰氨基酚ChP 2000 鉴别 2 取本品约0 1g 加稀盐酸5m1 置水浴中加热40分钟 放冷 取0 5m1 滴加亚硝酸钠试液5滴 摇匀 用水3ml稀释后 加碱性 萘酚试液2m1 振摇 即显红色 19 盐酸丁卡因 芳香第二胺结构 与NaNO2作用生成乳白色N 亚硝基化合物沉淀 20 二 三氯化铁反应对乙酰氨基酚的酚羟基可直接与三氯化铁试剂反应成蓝紫色 21 三 重金属离子反应1 与铜和钴离子反应 22 2 羟肟酸铁盐反应 23 3 与汞离子的反应与对氨基苯甲酸酯类可区别 24 四 水解产物反应1 盐酸普鲁卡因ChP 2000 鉴别 2 取本品约0 1g 加水2ml溶解后 加10 氢氧化钠溶液1ml 即生成白色沉淀 加热变为油状物 普鲁卡因 继续加热 产生的蒸气 二乙氨基乙醇 能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色 热至油状物消失后 生成可溶于水的对氨基苯甲酸钠 放冷 加盐酸酸化 即析出白色沉淀 此沉淀能溶于过量的盐酸 25 26 2 苯佐卡因ChP 2000 鉴别 2 取本品约0 1g 加氢氧化钠试液5m1 煮沸 即有乙醇生成 加碘试液 加热 即生成黄色沉淀 并发生碘仿的臭气 27 五 制备衍生物测熔点1 三硝基苯酚衍生物盐酸利多卡因ChP 2000 鉴别 取本品0 2g 加水20ml溶解 1 取溶液10ml 加三硝基苯酚试液10ml 即生成沉淀 滤过 沉淀用水洗涤后 干燥 依法测定 附录 C 熔点为228 232 熔融时同时分解 28 2 硫氰酸盐衍生物盐酸丁卡因ChP 2000 鉴别 1 取本品约0 1g 加5 醋酸钠溶液10ml溶解后 加25 硫氰酸铵溶液1ml 即析出白色结晶 滤过 结晶用水洗涤 在80 干燥 依法测定 附录 C 熔点约为131 29 六 紫外特征吸收光谱盐酸布比卡因ChP 2000 鉴别 2 取本品 精密称定 按干燥品计算 加0 01mol L盐酸溶液制成每1ml中含0 40mg的溶液 照分光光度法 附录 A 测定 在263nm与271nm的波长处有最大吸收 其吸收度分别为0 53 0 58与0 43 0 48 30 七 红外吸收光谱盐酸布比卡因ChP 2000 鉴别 3 本品的红外光吸收图谱与对照的图谱 光谱集324图 一致 31 四 特殊杂质检查 一 对乙酰氨基酚杂质检查1 乙醇溶液的澄清度与颜色生产工艺用铁粉作还原剂 如带入成品 则导致对乙酰氨基酚乙醇溶液产生浑浊 中间体对氨基酚有色氧化物在乙醇中显橙红色或棕色 32 检查方法 取本品1 0g 加乙醇10ml溶解 溶液应澄清 无色 33 2 有关物质杂质来源中间体 副产物及分解产物检查方法TLC 样品液 对照液对氯苯乙酰胺乙醚溶液 50 g ml 分离系统硅胶GF254氯仿 丙酮 甲苯 13 5 2 34 点样量样品液 200 l点于硅胶GF254薄层板上对照液 40 l 判断在254nm波长紫外灯下观察 供试品与对照品主斑点Rf值相同的斑点比较 不得超过其大小与颜色 35 限量 36 3 对氨基酚杂质来源 乙酰化不完全或贮存不当发生水解检查原理 对氨基酚在碱性条件下 与亚硝基铁氰化钠作用 生成蓝色络合物 与对照液比较 37 检查方法 38 限量 39 二 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查杂质来源 水解产生检查方法 TLC杂质对照品法 40 精密量取本品 加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2 5mg的溶液 作为供试品溶液 取对氨基苯甲酸对照品 加乙醇制成每1ml中含30 g的溶液 作为对照品溶液 取上述两种溶液各10 l 分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上 用苯 冰醋酸 丙酮 甲醇 14 1 1 4 为展开剂 展开后 取出晾干 用对二甲氨基苯甲醛溶液 2 对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml 加冰醋酸5ml制成 喷雾显色 供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点 其颜色与对照品溶液主斑点比较 不得更深 41 42 四 含量测定 一 亚硝酸钠滴定法1 原理具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定 具潜在芳伯氨基的药物 如具酰胺基药物 对乙酰氨基酚等 经水解 芳香族硝基化合物 如无味氯霉素 经还原 也可用本法测定 43 44 2 主要测定条件重氮化反应属于分子反应滴定液NaNO2及反应生成的重氮盐都不稳定反应速度受多种因素影响 45 1 加入适量KBr加速反应KBr为催化剂盐酸存在下 重氮化反应的机理 NaNO2 HCl HNO2 NaClHNO2 HCl NOCl H2O 46 47 当苯环上特别是氨基邻位或对位上有吸电基时 如 SO3H COOH NO2 X等可使氨基的碱性降低 重氮化反应速度加快 吸电基通过诱导效应使氨基上电子云密度降低 从而碱性降低 游离芳伯胺浓度增大 所以反应速度就快 48 当苯环上有供电基时 则使反应速度降低 如 R OR等 供电基能使氨基碱性增强 这样氨基成盐的机会就增大 游离芳伯胺的浓度就减小 所以反应速度就慢 49 2 酸的种类及其浓度在不同酸中重氮化反应的速度为 HBr HCl H2SO4 HNO3 K1 300K2加入KBr 可增大被测溶液中NO 的浓度 所以能加快重氮化反应速度 1 K1 2 K2 50 HBr价格贵 用盐酸代替 为加快反应速度 需加入KBr 催化剂 生成HBr与HNO2反应 可生成大量NOBr 加快反应速度 51 盐酸的用量理论芳胺类药物 盐酸 1 2mol实际芳胺类药物 盐酸 1 2 5 6mol加入盐酸 重氮化反应速度加快 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物 而影响测定结果 52 如盐酸量增加 则反应向左进行 如盐酸浓度太大 反到会使游离芳伯氨的量减小 成盐 而影响重氮化反应速度 使反应速度减慢 53 3 滴定温度室温 10 30 一般 温度升高反应速度加快 但重氮盐不稳定 温度升高重氮盐分解速度也加快 另外 温度高时 滴定液亚硝酸钠也容易分解逸失 而影响测定结果 所以 测定应在低温条件下进行 54 4 滴定速度滴定管尖端插入液面下2 3处 滴定时一边搅拌一边迅速加入大部分标准溶液 滴定液一次大部分放下 近终点时把滴定管提出液面 用水冲洗后再缓缓滴定至终点 55 3 指示终点的方法永停法ChP 2005 电位法USP外指示剂法内指示剂法 56 永停法原理 被测溶液中插入两个相同铂电极 在两个电极间加约50mV电压 并且在回路中串联一个灵敏的检流计 10 9A 格 用NaNO2滴定时 终点前 溶液中无HNO2 线路中没有电流 电流计指针指零 终点时 由于溶液中有微量的HNO2 电极上发生氧化还原反应 线路遂有电流通过 此时电流计指针突然偏转 并不再回复 即为滴定终点 57 永停滴定法 附录 A 用作重氮化法的终点指示时 调节R1使加于电极上的电压约为50mV 取供试品适量 精密称定 置烧杯中 除另有规定外 可加水40ml与盐酸溶液 1 2 15ml 而后置电磁搅拌器上 搅拌使溶解 再加溴化钾2g 插入铂 铂电极后 将滴定管的尖端插入液面下约2 3处 用亚硝酸钠滴定液 0 1mol L或0 05mol L 迅速滴定 随滴随搅拌 至近终点时 将滴定管的尖端提出液面 用少量水淋洗尖端 洗液并入溶液中 继续缓缓滴定 至电流计指针突然偏转 并不再回复 即为滴定终点 58 电位法被测溶液中插入甘汞 铂电极 终点时 溶液中稍过量的NaNO2使电位产生突跃 从而指示终点 USP采用此法 59 外指示剂法淀粉 KI糊剂或试纸原理 终点时 溶液中稍过量的NaNO2在酸性条件下氧化KI析出I2 I2遇淀粉显蓝色 方法 使用时 糊剂在白磁板上铺为博层 用玻璃棒蘸取少量测定液 在白磁板上划过 立即显蓝色 即为终点 60 缺点 由于被滴定的溶液酸性强 未达终点时 KI在酸性条件下遇光能被空气氧化析出碘 遇淀粉显蓝色 而造成误判 由于多次蘸取溶液进行试验 可造成滴定液的损失而带来误差 初次使用者较难掌握 61 内指示剂法内指示剂法指示终点 操作简便 但生成重氮盐一般都带有颜色 干扰指示剂颜色变化的观察 尤其是颜色很深时 更是这样 在重氮化滴定法中 内指示剂法应用不是很广泛 62 盐酸普鲁卡因ChP 2000 取本品约0 6g 精密称定 照永停滴定法 附录 A 在15 25 用亚硝酸钠滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml亚硝酸钠滴定 0 1mol L 相当于27 28mg的C13H20N2O2 HCl 63 二 非水溶液滴定法侧链烃胺的叔胺氮具弱碱性 可用非水溶液滴定法 三 紫外分光光度法对乙酰氨基酚在0 4 氢氧化钠溶液中 于257nm波长处有最大吸收 其紫外吸收光谱特征 可用于其原料及其制剂的含量测定 64 对乙酰氨基酚ChP 2000 取本品约40mg 精密称定 置25ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液50ml溶解后 加水至刻度 摇匀 精密量取5m1 置100ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液10m1 加水至刻度 摇匀 在257nm的波长处测定吸收度 按C8H9NO2的吸收系数为715计算 即得 65 原料药吸收系数法USP 24 对照法 66 1 盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有 A 重氮化 偶合反应B 羟肟酸铁盐反应C 氧化反应D 磺化反应E 碘化反应 67 2 采用亚硝酸钠法测定含量的药物有 A 苯巴比妥B 盐酸丁卡因C 苯佐卡因D 醋氨苯砜E 盐酸去氧肾上腺素 68 3 下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者 A 乙酰水杨酸B 对氨基水杨酸钠C 对乙酰氨基酚D 普鲁卡因E 苯佐卡因 69 4 亚硝酸钠滴定法中 加KBr的作用是 A 添加Br B 生成NO Br C 生成HBrD 生成Br2E 抑制反应进行 70 5 中国药典 1990年版 所收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为 A 电位法B 永停法C 外指示剂法D 内指示剂法E 自身指示剂法 71 6 亚硝酸钠滴定法中 可用于指示终点的方法有 A 自身指示剂法B 内指示剂法C 永停法D 外指示剂法E 电位法 72 例1 ChP 2000 亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠的含量时 指示滴定终点的方法为 A 自身指示终点法B 电位法指示终点C 永停滴定法D 氧化还原指示剂法E 酸碱指示剂法 73 例2 以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸 A 盐酸普鲁卡因B 盐酸普鲁卡因胺C 注射用盐酸普鲁卡因D 盐酸普鲁卡因胺片E 盐酸普鲁卡因注射液 74 例3 盐酸普鲁卡因采用亚硝酸钠滴定法测定含量时的反应条件是 A 强酸B 加入适量溴化钾C 室温 10 30 下滴定D 滴定管尖端深入液面E 永停法指示终点 75 第三节苯乙胺类药物分析 一 结构与性质 一 基本结构与典型药物苯乙胺类药物的基本结构 76 77 78 79 80 盐酸克仑特罗 81 硫酸沙丁胺醇 82 二 主要化学性质1 弱碱性脂烃胺基侧链 显弱碱性2 酚羟基特性邻苯二酚或苯酚结构 易氧化变色 与重金属络合成色 三氯化铁反应 3 光学活性具有手性碳原子 具旋光性 83 4 性状游离碱难溶于水 易溶于有机溶剂 其盐可溶于水 5 取代基具芳伯氨基的盐酸克仑特罗可用重氮化 偶合反应鉴别 亚硝酸钠滴定法测定含量 6 UV IR 84 二 鉴别试验 一 三氯化铁反应 在碱性溶液中与三价Fe成紫或紫红 二 甲醛 硫酸反应形成醌式结构的有色化合物 三 氧化反应具酚羟基 易被碘 过氧化氢 铁氰化钾等氧化剂氧化呈不同颜色 四 UV 85 五 亚硝基铁氰化钠反应 Rimini反应 脂肪族伯胺的专属反应 86 三 杂质检查 一 酮体检查杂质来源原料残存检查方法比较法 含量测定法 87 检查原理利用酮体在310nm波长处有最大吸收 而药物本身在此波长处几乎没有吸收 规定一定浓度溶液在3