促排卵时MMP-9MMP-2在多囊卵巢综合征患者子宫内膜中的表达.doc

促排卵时MMP-9，MMP-2在多囊卵巢综合征患者子宫内膜中的表达【摘要】目的探讨促排卵时基质金属蛋白酶-9，2（MMP-9，MMP-2）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者子宫内膜中表达的特点。 方法采用免疫组化法，分别测定使用促排卵药时有排卵12例和无排卵8例共20例PCOS患者与正常排卵10例子宫内膜中MMP-9，MMP-2的表达，同时测定血清雌二醇（E2 ）、孕酮（P）、睾酮（T）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）和泌乳素（PRL）的水平。 结果应用促排卵药后，12例成功排卵患者子宫内膜MMP-9、MMP-2的表达与正常对照组比较差异无显著性;8例无排卵患者子宫内膜MMP-9、MMP-2的表达明显低于对照组。经回归分析，MMP-9、MMP-2在PCOS子宫内膜的表达与血清E2 、P、T、FSH、LH和PRL的水平均无明显相关性。 结论成功排卵PCOS患者的子宫内膜MMP-9，MMP-2的表达与正常排卵者差异无显著性，无排卵PCOS患者子宫内膜MMP-9、MMP-2有低表达的现象。 【关键词】 多囊卵巢综合征（PCOS）;促排卵;子宫内膜;基质金属蛋白酶（MMPS ）The expression of MMP-9，2in endometrium of PCOS patients with infertility undergoing ovarian hyper stimulation treatmentZHANG Yixin，SHEN Liying，GAO Zhangquan.Hebei Provincial Institute for Family Planning，Shijiazhuang050071 【Abstract】 Objective To investigate the expression of MMP-9and MMP-2in the endometrium of PCOS women with infertility undergoing ovarian hyper stimulation treatment.Methods Immunohistochemical analysis was used to detect the expression ofMMP-9，2in endometrium of20PCOS patients within fertility and10normal ovulation women in control group.Radio immunoassay was used to determine the levels of serum E2 ，P，T，FSH，LH and PRL.Results Compared with that in control group，the expression of MMP-9，2in endometrium in12successed ovulation PCOS women had no significant difference，but significantly lower expression was found in the other8unsuccessed ovulation PCOSwomen.The expression ofMMP-9，2in endometriumwas not related with the levels of serum E2 ，p，T，FSH，LH and PRL in PCOS patients with infertility.Conclusion The expression of MMP-9，2in endometrium has no significant difference between PCOS patientwith successful ovulation and normal ovulation women，but lower expression is found in endometrium of PCOS patients who fail to ovulation. 【Key words】 PCOS;ovarian hyper stimulation treatment;endometrium;MMPS 多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄妇女常见而复杂的内分泌疾病，以无排卵、月经稀发或闭经为主要临床表现，临床应用枸橼酸氯米芬作为PCOS首选一线促排卵药物。据报道基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制物在月经发生、排卵、胚胎植入及其黏附等方面起着重要作用1，2。近年来，对子宫内膜中基质金属蛋白酶的研究日益增多，为探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者应用促排卵药后子宫内膜中基质金属蛋白酶-9，2（MPP-9，MMP-2）的表达特点，并为临床治疗提供理论依据，本研究应用免疫组化法测定了PCOS不孕妇女应用促排卵药后子宫内膜中MMP-9，MMP-2的表达特点，同时测定了血中的激素水平，报道如下。1 资料与方法 1.1 资料来源选择2005年6月至2006年11月来我所就诊的符合PCOS诊断标准的原发不孕患者20例，年龄2234岁，平均年龄（267）岁。20例PCOS患者于月经自然来潮的第5天，对于月经稀少或闭经者在孕酮撤退性出血后的第5天，开始服用枸橼酸氯米芬100mg.d促排卵，连续服用57d，于月经周期的第10天开始行阴道B超监测卵泡，并记录卵泡生长情况。 20例PCOS不孕患者服用枸橼酸氯米芬后出现优势卵泡并成功排卵者作为有排卵组12例，未见优势卵泡形成者为无排卵组8例。同时选择因男方因素不育来就诊的月经周期正常且有优势卵泡形成的女性10例作为正常对照组，年龄2235岁，平均年龄（277）岁。 1.2 PCOS诊断标准参照卫生部规划教材妇产科学第6版，符合（1）临床表现为月经稀少或闭经，伴有或不伴有多毛、痤疮，基础体温（BBT）单相;（2）黄体生成素（LH）.促卵泡激素（FSH）比值增高（≥2.0）或睾酮值（T）增高;（3）阴道B超显示一侧或两侧卵巢多囊性增大，卵巢内密集直径小于1.0cm的小卵泡，呈车轮状排列，无自然优势卵泡生长者诊断为PCOS。 1.3 取材有排卵反应组和正常对照组女性于阴道B超监测发现优卵泡直径≥18mm时，无排卵反应组则在月经第1315d，由专业医师负责用小号刮匙刮取少量子宫前后壁内膜，所取内膜立即用4%甲醛固定，乙醇脱水后石蜡包埋组织标本待测。同时采集静脉血5ml，常规分离血清后-20冷冻保存。 1.4 子宫内膜MMP-9、MMP-2的测定采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（SP法）测定MMP-9、MMP-2在子宫内膜的表达。鼠抗人MMP-9、MMP-2单克隆抗体和SP免疫组化试剂盒购自北京中山生物公司。待测标本采用连续4μm厚切片，阴性对照采用PBS代替一抗，用已知标本作为阳性对照，其余按免疫组化法说明书要求的步骤进行操作。由内分泌室采用放射免疫法测定血清血清雌二醇（E2 ）、孕酮（P）、睾酮（T）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）和泌乳素（PRL）的水平。 1.5 结果判断子宫内膜组织细胞胞浆内见棕黄色染色颗粒即为MMP-9、MMP-2阳性表达，在染色区域随机选择5个视野，每个视野计数100个细胞，参考文献报道的方法3按以下标准将染色细胞数量分为4级:0级阴性，细胞浆内无棕色颗粒出现;（+）级弱阳性，细胞浆内出现较浅的棕色颗粒;（+）级中度阳性，介于弱阳性和强阳性之间;（+）级强阳性，细胞浆内有明显的棕色颗粒。4级分别记0、1、2、3分，用组织学积分（H-score）的方法进行半定量分析，公式为:H-score=∑Pi（i+1）， i=0、1、2、3。 1.6 统计学方法由SPSS10.0for Windows软件进行统计学分析，采用独立样本t检验和一元线性相关与回归分析，P0.05），差异无显著性。8例无排卵反应患者子宫内膜MMP-9和MMP-2的表达明显低于对照组（P0.01）。 表1 3组子宫内膜中MMP-9、MMP-2的表达积分（略）注:与对照组比较， * P0.05），差异无显著性;无排卵反应组E2 和P水平明显低于对照组（P0.01），而血清T、LH水平明显高于对照组（P0.05），差异具有显著性。 表2 3组血清激素水平（略） 注:与对照组比较， * P0.05; * P0.05）。 3 讨论 PCOS是一种以卵泡发育障碍为主的多病因、多症状疾病，生育期妇女发病率为5%15%，占不孕患者的30%40%，占无排卵性不孕的75%，主要以月经失调、高雄激素血症以及无排卵性不孕为临床表现特点。PCOS病因还没有完全明确，目前认为PCOS发病与多种因素有关，并影响生育功能。在PCOS无排卵或稀发排卵的不孕者中，表现为子宫内膜过薄或增生、缺少周期性变化、多个卵泡同时发育而无优势卵泡发育等。目前临床上多以枸橼酸氯米芬作为治疗PCOS的首选一线促排卵药物，枸橼酸氯米芬属于非甾体类抗雌激素制剂，能与雌激素受体结合，具有弱雌激素作用，其诱导排卵率为70%85%4。 MMPs是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶，是参与细胞外基质（ECM）降解的主要酶类。EMC内环境稳定性的维持在很大程度上依赖于基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的协调控制。据报道卵巢的正常功能依赖ECM的周期性的重建，EMC的周期性变化在卵泡发育及闭锁、排卵、黄体形成、维持和退化过程中均发挥着重要作用。大量研究证实，MMP-2，对卵巢发育、排卵以及黄体形成过程中细胞外基质的重建起着重要作用5。 近年来，许多研究证明MMPs在月经发生、子宫内膜的重塑、胚胎着床以及胚胎种植等生理过程中起着关键的作用，有报道表明，MMP-2在小窦状卵泡的颗粒细胞上、MMP-9mRNA在发育良好的窦前卵泡、窦状卵泡和排卵前卵泡的膜细胞中表达，说明它们均参与卵泡的发育过程，在优势卵泡的选择上起着非常重要的作用6。 卵泡发育是一个复杂而精细的过程，受促性腺激素的调节，卵泡的发育过程也是细胞外基质的重建过程，MMPS 在细胞外基质重建过程种发挥重要作用，MMPS 表达与卵泡发育及成熟有非常重要的关系5。MMP-2、MMP-9主要来源于中性粒细胞，参与机体许多生理功能，如细胞的分化、增殖、凋亡、生殖过程、胚胎发育等，MMP-9参与卵泡发育的整个过程，在优势卵泡的选择过程中起非常重要作用，协调排卵过程中的组织重建，且进一步报道MMP-2、MMP-9在晚增殖期、排卵后表达丰富，这可能对胚胎着床有益，MMP-2前体辅助滋养层浸润，有助于胚胎植入7。 本组实验显示，低排卵后20例PCOS不孕患者有12例为有排卵反应，MMP-9和MMP-2在子宫内膜中的表达接近正常对照组（P0.05），差异无显著性，有8例为无排卵反应，子宫内膜MMP-9和MMP-2的表达则明显低于正常对照组（P0.05）。说明PCOS不孕引起的排卵障碍存在着子宫内膜MMP-9和MMP-2的表达明显低于正常者的现象，但对于MMPs 与PCOS关系的研究报道还较少，其机制可能非常复杂，需作进一步的研究。而且卵巢排卵和妊娠、胚胎着床是一个十分复杂的过程，这个过程受多种因素调节，与子宫内膜中多种生化因子的表达以及他们之间的相互作用有关，MMPs 可能仅是其中的因素之一，因此，探究MMPs及其抑制物等多种因子与PCOS之间的关系对于研究其发病机制和临床治疗具有重要意义，可以进一步了解PCOS的病因，为有针对性对PCOS治疗提供依据。【参考文献】 1 Bischof P，Meisser A，Campana A.Paracrine and autocrine regulators of trophoplast invasion:a review.Placenta，2000，21:55-60.2 Osteen KG，Keller NR，Feltus FA et al.Paracrine regulation of matrix met-alloproteinase expression in the normal human endometrium.Gynecol Obstet Invest.1999，48:2-13.3 洪丽华，周馥贞，黄荷凤.不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期MMP-9和T