激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定.doc

生物化学实验实验名称：激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定时间：2014年6月9日星期一姓名： 学号：201312201202003指导老师：毛水龙老师一，实验目的 掌握血糖的测定原理和方法；掌握血糖的正常范围及意义；熟悉调节血糖的激素对血糖浓度的影响。 二，实验原理 家兔动物实验。获取家兔注射激素前后的血液样本并对其；进行血糖测定。邻苯甲胺方法测定血糖浓度。 实验采取前后对照的方法，对家兔注射肾上腺素和胰岛素，并通过耳缘静脉采血，获取激素注射前后的血液样本，采用邻甲苯胺法处理样本，最终与标品比色得出结论。1.调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。2.肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。3.血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。三，实验材料1.材料：家兔两只,刀片，草酸钠，小烧杯。2.试剂：肾上腺素(1mglml)胰岛素(20单位ml)碘酒、消毒酒精饱和硼酸溶液邻甲苯胺-硼酸5 三氯醋酸溶液饱和苯甲酸溶液标准葡萄糖贮存液标准葡萄糖应用液四，实验方法1.取健康正常家兔一只，实验前饥饿1416h左右，称体重。2.耳缘静脉采血。小刀刮去耳缘的毛，用酒精棉球擦拭使其充血，再用干棉球擦干。 刀片划开耳缘静脉，使血液滴入成有足够草酸钠的小烧杯中，注意收集期间要不断地晃动烧杯防止血液凝固。采集完毕后干棉球压迫血管止血。3.给家兔注射肾上腺素（0.5mg/只），半小时后同样方法采得血液。4.缓缓放入洁净试管内，加5%三氯醋酸3.6ml，同时摇动使之充分混匀。3000rpm离心5min，制得无蛋白血滤液（上清液）。5.取四支试管，分别加入2.5ml邻甲苯胺试剂。并向试管1加入1ml蒸馏水，试管2加入1ml标准葡萄糖应用液，试管3加入1ml注射激素前的血液的无蛋白滤液，试管4加入1ml注射激素后的血液的无蛋白滤液。6.混匀后沸水加热8min，取出并用自来水冲洗试管使之冷却。而后置于722型分光光度计630nm比色，空白管校正零点。7.表加试剂如下表：ml空白管标准管待测管甲（药前）待测管乙（药后）蒸馏水1.0标准葡萄糖应用液（1mg/ml）1.0无蛋白血滤液（药前）1.0无蛋白血滤液（药后）1.0邻甲苯胺试剂2.52.52.52.5同理，对家兔进行肾上腺素注射（剂量为5单位/公斤体重）并进行上述步骤，最终得出结果。五，实验结果据试验，在注射胰岛素实验中，家兔重量为2.95公斤，依照比例注射15单位的胰岛素。在注射肾上腺激素的实验中，家兔重量为2.90公斤，注射1mg的肾上腺激素。血糖测定：（葡萄糖标准液浓度为5.50mmol/L） 空白管 标准管注 射胰岛素前注射 胰岛素后注射肾上腺激素前注射肾上腺激素后血清/ml-0.020.020.020.02葡萄糖标准液/ml-0.02-生理盐水/ml0.02-酶酚混合液/ml1.51.51.51.51.51.5曝光值00.1350.3630.1160.3150.508由此得出：注射胰岛素前血糖浓度为14.79mmol/L。注射胰岛素后血糖浓度为4.73 mmol/L。注射肾上腺激素前血糖浓度为12.83 mmol/L。注射肾上腺激素后血糖浓度为20.70 mmol/L。得出结论：注射胰岛素可有效的降低血糖。2注射肾上腺素能使血糖上升。六，讨论实验中要注意如下问题：1.采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安静。家兔不安静的情况下，肾上腺素分泌增多，血糖浓度升高，对实验结果有影响。2.采血后要及时分离出血浆，避免溶血。溶血时红细胞内糖类扩散到血浆中，会对