国产卵磷脂辅料对脂肪乳制剂的质量研究.doc

国产卵磷脂辅料对脂肪乳制剂的质量研究王汝涛（西安）脂肪乳注射液是一种胃肠外能量补给剂, 是临床患者必需脂肪酸和能量的补充来源1,2。脂肪乳制剂药剂学属非均匀分散的液体制剂3, 主要由精制大豆油，精制蛋黄卵磷脂与注射用水经乳化制成,其中精制蛋黄卵磷脂作为脂肪乳制剂的乳化剂对乳剂的质量起到决定性的作用，目前国内脂肪乳厂家使用的精制蛋黄卵磷脂大多为进口产品。由于进口产品的价格较高，因此直接导致了产品的生产成本和销售价格的提高。在一定程度上限制了其推广使用。本实验采用最新国内精制的蛋黄卵磷脂作为乳化剂，制备了的脂肪乳制剂，同时与进口磷脂制备的制剂进行了对比性研究，期待为国产卵磷脂在药物制剂生产中的广泛使用提供依据。1. 材料与方法1.1仪器 Emulsi Flex-C5高压乳匀机(加拿大Avestin公司),Waters HPLC系统，PSS NICOMP 380粒径测定系统(Santa Barbara ,Calif,USA.)，100 DIOL 250 * 4.0mm色谱拄（Merck LiChrospher）,紫外可见分光光度计（Backman）;Labconco Stoppering Tray Dryer 冷冻干燥机。1.2药品与试剂国产精制蛋黄卵磷脂（西安力邦制药有限公司产品）、进口精制蛋黄卵磷脂（德国Lipoid公司产品）， 油酸对照品（Sigma，含量99%）、溶血磷脂对照品（Sigma，含量99%）、生化用棕榈酸（Sigma，含量99%）、鲎试剂和鲎试剂检查用水（湛江安度斯生物有限公司产），大豆油、甘油和维生素E等其它试剂为色谱纯、分析纯或化学纯。1.3实验方法 1.3.1制备以国产及进口精制蛋黄卵磷脂为乳化剂的脂肪乳制剂样品 制备方法为：取维生素E3.0g、精制大豆油200.0g，加入12.0g精制国产及进口蛋黄卵磷脂，加热搅拌约10-20min混匀。 另取注射用水700ml，加入甘油22.0g。在氮气保护和搅拌条件下，将精制蛋黄卵磷脂油溶液加入甘油水溶液中，调节总量至1000ml。经高压均质机均质78次，均质压力为100MPa，至粒径范围在180nm300nm，调节pH 6.08.5，过滤，分装，通入氮气，密封。115灭菌30min，灯检合格后，包装。1.3.2国产精制蛋黄卵磷脂为乳化剂制备的脂肪乳制剂的质量评价pH值及乳粒大小分布的测定参照中国药典方法4。乳粒大小分布的测定用PSS NICOMP 380粒径测定系统，取0.5l脂肪乳样品置测样杯加空白介质至10ml，摇匀后计数其中1和 5m的粒子百分数。在大于0.5m的乳粒总数中，大于1 m的乳粒数不得超过3%并不得有大于5m的乳粒5。 另依据2005版中国药典方法，使用HPLC测定脂肪乳注射剂样品中游离脂肪酸、甘油三酯含量。同时用正向液相色谱法，采用二醇柱梯度洗脱和光散射检测器测定溶血磷脂含量。使用硫代硫酸钠液滴定法进行过氧化值测定，用紫外分光光度法测定氧基苯胺含量4。 1.3.3细菌内毒素检查 试验前先对购得的鲎试剂进行灵敏度复核。参照中国药典细菌内毒素检查法4，用一定灵敏度的鲎试剂与样品中的细菌内毒素发生反应形成凝胶，以判断检品中的细菌内毒素是否超限。然后各取样品原液用鲎试剂检查用水稀释，进行干扰试验，证实对鲎试剂无抑制和增强作用后再检查脂肪乳样品的内毒素，每毫升含内毒素不得超0.5EU。1.3.4国产精制蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂的稳定性实验两种脂肪乳样品在10, 20 , 40条件下经0，3,6,12,18个月贮藏，分别参照中国药典方法测定pH值和游离脂肪酸浓度4，同时记录样品的外观变化。2.实验结果2.1 国产精制蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂的质量评价结果国产及进口精制蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂外观均为白色乳状液。实验进一步对比两制剂样品的pH 值、乳粒大小和分布、甘油三酯及游离脂肪酸含量等质量参数，发现其均符合药典规定的质量标准且无显著的质量差异，见表1。表1 对国产精制蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂的质量评价结果（n=3, s）Table 1 Result of pharmaceutical evaluation of fat emulsion injections preparation by domestic lecithin 分组 pH值 乳粒（%） 游离脂肪酸 甘油三酯 1m 5m （mmolL-1） (mgml-1)国产组 8.200.19* 0.620.08* 0 0.770.09* 0.72110.06*进口组 8.100.21 0.580.09 0 0.800.08 0.74600.09* p0.05 vs进口组.2.2 国产精制蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂中溶血磷脂、过氧化值、甲氧基苯胺及内毒素含量的测定结果实验进一步对比国产及进口精制卵磷脂制备的脂肪乳制剂中溶血磷脂、甲氧基苯胺的含量及过氧化值水平，发现国产蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂与采用进口卵磷脂制备的脂肪乳制剂未见差异且均符合药典规定的质量标准，见表2。表2 对国产蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂中溶血磷脂、过氧化值及甲氧基苯胺含量的测定结果（n=3, s）Table 2 The concentration of lysophosphatide, peroxide and anisidine in fat emulsion injections preparation by domestic lecithin 分组 溶血磷脂 过氧化值 甲氧基苯胺 （mgml-1） （mmolL-1） （mgml-1 ） 国产乳化剂组 0.280.03 0.080.001 1.710.15 进口乳化剂组 0.310.04* 0.070.002* 1.690.17* * p0.05 vs进口组.2.3 国产蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂中内毒素水平的测定结果按中国药典细菌内毒素检查法，用鲎试剂法检测检品中的细菌内毒素是否超限。实验结果显示利用国产及进口卵磷脂制备的脂肪乳制剂样品中，每毫升含内毒素均小于0.3EU,两种制剂都完全符合中国药典规定的质量要求。2.4 国产蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂的稳定性研究结果两种脂肪乳样品在10, 20 , 40条件下经0，3,6,12,18个月贮藏，分别测定pH值和游离脂肪酸浓度，结果见（表3）。从中可以看出，随贮藏温度和贮藏时间的变化，对pH及游离脂肪酸两个项均有影响。结果中发现采用国产及进口蛋黄卵磷脂为乳化剂制备脂肪乳制剂在放置12个月后其pH值和游离脂肪酸浓度变化略低于制备初期的样品。但相同贮存时间及温度条件下的两种样品的pH及游离脂肪酸浓度的变化趋势相同，表明两种制剂的质量稳定性没有差异。表3利用国产精制蛋黄卵磷脂制备的脂肪乳制剂的稳定性评价结果（n=3）Table 3 Result of stability evaluation of fat emulsion injections preparation by domestic lecithin 分组 温度（） 10 20 40 时间（月） 0 3 6 12 18 3 6 12 18 3 6 12 18 pH 8.2 8.2 8.1 7.9 7.9 8.2 8.1 7.8 7.7 7.7 7.4 7.0 6.6 国产组 游离脂肪酸 0.7 0.7 0.8 0.9 0.9 0.8 0.9 1.0 1.1 1.0 1.3 1.6 1.9(mmolL-1) pH 8.2 8.1 7.9 8.0 7.9 8.1 8.2 7.7 7.6 7.8 7.2 6.8 6.7进口组游离脂肪酸 0.7 0.8 0.8 0.8 0.9 0.8 0.9 1.1 1.1 1.0 1.2 1.5 1.8(mmolL-1)3. 讨论脂肪乳用作肠外营养已有40多年的历史，其确切的临床营养效果已为国内外临床应用所证实 1,2。脂肪乳具有许多独特的优点，首先其安全性好，不含热原，无抗原, 不溶血, 经静脉输注可用于手术前后，消化道疾患吸收障碍及各种不能进食的病人, 以补充脂肪营养, 提供能量。其次由于其原料易得，生产工艺简单，对生产设备要求不高，制剂本身能够耐受高压蒸汽灭菌，并且可以使用现有的生产线进行工业化大生产，所以生产成本较低。另外其作为新型的递药系统近年来也越来越多的应用于新剂型的开发中，因此脂肪乳制剂的应用前景十分广阔。作为脂肪乳制剂的乳化剂，目前制剂生产中最常用的是精制蛋黄卵磷脂。由于它本身即为体内生物膜的组成成分因此对于人体无毒性，更重要的是由于其乳化效果好，所以在脂肪乳制剂中广泛使用6。但是目前国内制药企业普遍采用进口产品，由于进口产品价格较高，提高了制剂的生产成本，所以不利于脂肪乳制剂的推广和普及。如今国内厂家生产和精致蛋黄卵磷脂的工艺已成熟。但由于成品生产时间较短，生产规模小，且制剂质量还需要进一步的验证。因此还未在国内制剂厂家中推广使用，所以其制剂的理化性质、安全性和稳定性都急需要进一步的实验研究来确认。本研究同时采用国产及进口精致蛋黄卵磷脂制备了脂肪乳制剂。并且通过系列实验研究证明了两种制剂在产品质量、安全性及制剂稳定性等方面没有差异，完全达到药典规定的质量要求。鉴于目前卵磷脂在药物制剂工业中应用十分广泛，因此对国产卵磷脂制剂的质量评价具有更加深远的意义。参考文献1 朱维铭.脂肪乳的进展.江苏临床医学杂志，2002，6（2）：100-1032 陈亭苑.静脉脂肪乳剂的应用和进展.肠外与肠内营养.1995，2（4）：247-2