产气荚膜梭菌检验作业指导书

广西XX天然食品有限公司产气荚膜梭菌检验作业指导书文件编号：制定部门：质检部版本/修订：001生效日期：2014.01.01页 码：第3页，共3页1.0 目的确保公司生产的产品在制造过程中受到检查、检验、测试和控制，使制程中产品符合既定的产品规格和卫生要求。2.0 执行人员 品检员3.0 工作程序3.1 每天早班开工第一时间按照GMP要求检查记录当值岗位生产线卫生情况，发现影响产品卫生的问题及时向生产线管理员反映，及时处理。3.2 感官检查待生产用的罐、盖等材料是否符合品质和卫生要求。3.3 按照生产线既定的产品制程控制计划的要求和当值岗位检查表内容逐项完成并做好各控制点的检查、测试和记录。3.4 按照产品既定的规格要求检查、测试半成品、成品的规格。检查半成品和成品包装，测试成品包装封口，确保其符合标准要求。3.5 按照确保品质稳定的有关要求做好半成品的品质监控和测试。3.6 执行HACCP计划，按照“真空打检机操作指引”进行打检机检查、测试，对其性能进行复核；按照“杀菌工艺规程”对杀菌釜运行是否正常进行复核。3.7 生产线发现严重的品质问题或有危害性突发事件发生时按照相关“程序文件”中有关品质、安全之程序处理。3.8 生产部或品检员在产品制造过程中发现对产品有危害的外来物必须保留样板，并及时向主管反映跟进。问题处理后由归口的品检员将样板保留。3.9 产品检查过程中发现不合格产品必须及时按照“不合格产品管制作业程序”处理。3.10 当值的品检员必须按照工作要求及时完成相应的检查、检测表或报告。3.11 生产线收工时跟进当值岗位生产清机、消毒情况，发现员工有不符合有关要求之行为或有偏离GMP、SSOP的情况立及向当值管理员反映，及时处理。3.12 定期完成GMP个人卫生检查及生产线卫生安全检查。3.13 交接班时，各品检员要把生产线的异常情况（含人员、机械、物料、环景、方法等）作详细的交接，若交接未完成则当班人员不许下班。广东加多宝 饮料食品有限公司制程品检员作业指引文件编号JDB/WI-QC011制定部门品检部版本/修订：A/0生效日期：页 码 第 2 页，共 2 页3.14 当班收工时领班与各品检员总结当班品质控制作业情况，总结经验与教训，以期推进持续改进。4.0适用表格4.1信息反馈单 JDB/RE-QC011-1A-1/14.2制程工序查验记录 JDB/RE-QC011-2A-1/14.3产品检验流程单JDB/RE-QC011-3A-1/14.4仪器检定校正记录JDB/RE-QC011-4A-1/11 目的规定矿泉水产气荚膜梭菌的检验方法，保证按标准化操作。2 适用范围适用于产气荚膜梭菌检测。3 术语产气荚膜梭菌：是继沙门氏菌、葡萄球菌后引起食物中毒的又一重要的病原菌。属于革兰氏阳性粗大梭菌，芽孢呈卵圆形，肉汤培养时芽孢少见，须在无糖培养基中才能生成芽孢。无鞭毛，不运动，属于专性厌氧菌。4 职责 质检员负责按作业指导书进行检验。5 流程图 无6 作业内容6.1 检验方法原理微孔滤膜是一种微孔径的过滤膜（通常孔径为0.22m、0.45m，滤膜直径为47mm），滤膜能滤过大量水样，并将水中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，直接计数滤膜上的典型微生物菌落数，算出一定体积水样中含有的微生物菌落总数。6.2 实验器材、培养基及试剂6.2.1 实验器材不锈钢过滤器装置、滤膜（直径47mm，微孔径0.22m）、抽滤设备、无齿镊子、显微镜（10100）、量筒、培养皿、灭菌锥形瓶、恒温培养箱（361）、恒温水浴锅（461）、酒精灯、冰箱（08）、厌氧培养装置、超净工作台。6.2.2 培养基及试剂庖肉培养基、庖肉牛肉粒、亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS）、液体硫乙醇酸盐培养基（FT）、动力硝酸盐培养基（A法）、含铁牛奶培养基、卵黄琼脂培养基、1g/L蛋白胨水、硝酸盐还原试剂（甲）、(乙)液、亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂配套试剂、革兰氏染色液6.3操作步骤6.3.1推测性检验6.3.1.1水样过滤：在100级的洁净工作台进行过滤操作。6.3.1.2用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将50mL水样或稀释液通过孔径0.22m的滤膜过滤。6.3.1.3将过滤后的滤膜贴在已制备好的SPS琼脂平板（截留面朝上），然后倒置于361厌氧培养装置培养24h。6.3.1.4平铺时应避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。6.3.2计数产气荚膜梭菌菌落在滤膜上呈现大小不等的黑色菌落。将可疑菌落进行革兰氏染色、显微镜检查等确认性试验，产气荚膜梭菌应为革兰氏阳性粗大杆菌。计数每50mL水样中的产气荚膜梭菌菌落数。6.3.3确证性试验 6.3.3.1接种将SPS琼脂平板上生长的可疑黑色菌落接种于FT培养基，361培养1824h，然后进行下列试验。6.3.3.2革兰氏染色 革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热菌株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。6.3.3.3动力硝酸盐试验 穿刺接种动力硝酸盐培养基，于361厌氧培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各12滴，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。若培养基变为红色，则为动力硝酸盐阳性反应。6.3.3.4牛奶发酵试验 取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛奶培养基，在46水浴中培养2h后观察有无“暴烈发酵”现象发生，在5h内不发酵者为阴性，产气荚膜梭菌能发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基不变黑。6.3.4 结果报