宫颈癌基因E6E7mRNA南阳讲课

,科蒂亚生物：周贺娟,E6/E7mRNA,新一代宫颈癌变风险评估方法,宫颈癌变评估,与,HPV癌基因E6/E7mRNA,主要内容,报告解读、处理建议,1,临床意义、适用范围,3,2,主要内容,1,HPV癌基因E6/E7mRNA,1,2.型别：120多种（依据L1 DNA）,1.结构： 外壳蛋白：L1蛋白（72个五聚体）， L2蛋白（12个）。 内部遗传物质：闭环、双链DNA 。 （不含 RNA）,3.分类：依据生物特性、致癌性 高危型HPV(HR-HPV)：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、66 低危型HPV（LR-HPV）：6、11、42、43、44,什么是E6/E7 mRNA ?,L1: 主要衣壳蛋白，是疫苗的主要成分。,L2: 次要衣壳蛋白，是市售抗体的主要识别位点。,E4：结合并破坏细胞角蛋白网，形成挖空细胞的外观。,E2：负性调节E6和E7，维持凋亡和细胞周期的调控。通常在病毒发生整合时失活。,HPV 的主要致癌基因E6通过抑制p53而阻断凋亡E7 通过抑制pRB使细胞周期失控。,X,HPV的基因片段及功能,E6/E7 mRNA ?,高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，将产生两种癌蛋白：E6和E7蛋白。癌蛋白可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相结合，导致细胞周期控制失常，发生癌变。 （人民卫生出版社、妇产科学、2004年1月第6版）,致癌原理,E6/E7 mRNA与宫颈癌的关系,E6、E7mRNA-是宫颈病变开始和进展的必由之路!,HPV感染在宫颈细胞内的表达过程,基因改变早于细胞改变,E6/E7mRNA： 是致癌基因E6/E7表达的直接产物； 是最终致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宫颈病变开始和进展的必要条件！,小结,主要内容,1,E6/E7mRNA的临床意义与适用范围,2,高危的HPV感染宫颈上皮细胞,癌基因E6、E7 mRNA,E6、E7 癌蛋白,E6、E7 癌蛋白与抑癌蛋白P53、RB等结合,宫颈细胞CIN或癌变,癌基因E6、E7 DNA,HPV病毒学检测,病毒癌基因学检测,细胞形态学检测,HPV L1 DNA,HPV L1 mRNA,HPV L1 蛋白,HPV复制繁殖,HPV感染后演变路径及宫颈癌筛查&诊断方法应用,临床意义-特异性强、阳性预测值高,HPV感染致宫颈癌模式图,什么样的感染者会进一步进展呢？哪种检测方法能提示？,E6/E7mRNA检测 1、发现已感染HPV，且癌基因已经表达的宫颈病变高风险 者, 特异性强、阳性预测值高； 2、弥补：细胞学检测敏感性； HPV检测特异性； 阴道镜/活检的漏检等。 3、预测发展趋势，指导后续治疗、随访。,提供关键的癌变信息，治疗更及时，预防更有效！,小 结,适用范围（不局限于30岁以上人群）：,1、筛查：细胞学+ E6/E7 mRNA检测； 2、辅助诊断： （1）细胞学+E6/E7 mRNA检测； （2）若HPV（+） E6/E7 mRNA检测； （3）病理组织+ E6/E7 mRNA检测。 3、手术后及随访时: 组织学+癌基因E6/E7 mRNA； 细胞学+ E6/E7 mRNA检测。,TCT结果正常的女性，在正常筛查间隔内一定是安全的吗？TCT结果：ASCUS，如何评估风险？ 直接镜检&活检：过度检查？ 随访：漏诊？ 30岁以下妇女，感染率高，清除率高，HPV（+）率高，该如何评估风险？,筛查 常见问题,.Intracellular Human Papillomavirus E6, E7 mRNA Quantification Predicts CIN 2 + in Cervical Biopsies Better Than Papanicolaou Screening for Women Regardless of Age. Arch Pathol Lab Med. 2012；136:956-960.,E6/E7 mRNA检测；联合TCT筛查 基因改变早于细胞形态改变，辅助提高细胞学敏感性，ASC-US分流30岁以下女性筛查效率。,筛查应用,CIN1风险评估？随访时间确定。CINII-III的患者，手术方式 术后随访。 特殊病例：未生育女性、妊娠女性？ 随访间隔？,辅助诊断 常见问题：,HPV感染致宫颈癌模式图,预测性能,ASCUS & LSIL者，2年内跟踪诊断至CIN2+女性：HPV E6、E7 mRNA作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的69.8倍。HPV DNA作为监测手段：检测呈阳性数量约是阴性数量的5.7倍。,Tor Molden etc. Predicting CIN2+ when detecting HPV mRNA and DNA by PreTect HPV-Proofer and consensus PCR: a 2-year follow-up of women with ASCUS or LSIL Pap smear. International Journal of Cancer. Int. J. Cancer, 2005,114: 973976.,E6/E7 mRNA检测 辅助活检后人群的后续处理，提高诊断水平：组织学CIN1，建议采用E6/E7mRNA检测： E6/E7mRNA检测阳性，建议缩短随访时间； E6/E7mRNA检测阴性，建议根据医嘱随访。组织学CIN2+，建议采用E6/E7mRNA检测： E6/E7mRNA检测阳性，建议积极治疗； E6/E7mRNA检测阴性，建议保守治疗，密切随访。,辅助诊断应用,手术后残端是否会残留病毒？复发的可能性多大？ 术后随访间隔是多久，确定依据是什么？,术后随访 常见问题：,Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test.Leep锥切术成功后检测剩余/复发的宫颈疾病：mRNA HPV检测可能发挥的作用。,14%-70%的阳性切缘患者5-15%的干净切缘患者 存在复发宫颈疾病的风险。,E6/E7mRNA检测的随访,Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test. Current Pharmaceutical Design 2013,19,1450-1457.,术后，mRNA（+）比mRNA（-）复发的几率更高,n=116（CIN患者经LEEP刀治疗后）,E6/E7 mRNA检测，辅助术后的后续处理：手术后，病理组织学诊断+E6/E7mRNA检测术后随访，细胞学+E6/E7mRNA检测。,术后随访应用,病例分析-30岁已婚女性,2013.12.3体检： E6/E7mRNA(+) 低度风险 TCT正常,未进行干预性治疗，3个月复查,2014.3.25 细胞学：ASC-US E6/E7mRNA(+) 高度风险,术后病检结果：宫颈1点、6点慢性宫颈炎，部分区域呈湿疣性改变；12点处小灶区域CIN2,LEEP,3: 2012.9月，广东一家医院，一病人66岁TCT HSIL，E6、E7mRNA检测阴 性，TCT阅片老师认为那个标本报告为癌都不为过，所以进行活检，但 活检结果为CIN1-2级，临床医生对活检不满意，并考虑到该病人年龄 比较大，行使锥切后活检，活检结果CIN1。,1：2012.3月，河北一医院对一LEEP术后45岁病人加做E6，E7mRNA检 测，发现拷贝值为2万多，两周后重新取样检测，发现E6,E7 mRNA 检测仍有一万多拷贝，于是重新取样活检，发现切缘为CIN3级。,2：2012.7月浙江余姚市一医院，一病人HPV 检测阴性，TCT检测正常， E6、E7mRNA检测一万多拷贝，主任对该检测结果质疑，对该病人进行 活检，病理结果CIN23级。,病例,主要内容,1,报告解读及处理建议,3,阴道镜/活检,如无病变，半年后复查E6/E7 mRNA,如E6/E7 mRNA（+），查细胞学,细胞学ASC-US,阴道镜检,如E6/E7 mRNA（-），半年后查E6/E7 mRNA+细胞学。,阴道镜/活检,无病变：严密随访,CIN2+:相应手术治疗,E6/E7 mRNA（-），6个月复查细胞学及E6/E7 mRNA检测。,E6/E7 mRNA（+）、6个月复查细胞学ASCUS或E6/E7 mRNA(+)，建议积极处理,如冷冻、电灼或LEEP。,报告单解读阴性,报告单解读阳性,取样方法,一、细胞样本,二、组织样本,石蜡切片： 厚度3-5um切片4-10片,宫