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重组DNA的基本步骤 重组DNA的基本步骤 获得目的基因DNA分子的体外重组重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定 获得目的基因的途径 限制性内切酶酶切产生待克隆的DNA片段人工合成DNA反转录酶酶促合成法聚合酶链 式 反应扩增特定的基因片段 这样就可以用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段 对于原核生物比较小的基因组来说 可以直接用标记地探针来获取在通过特定的方法 对于比较大的基因组 可以先制作基因文库 然后钓取所需要的带有目的基因的片段 限制性内切酶对DNA的切割方式有两种 一种切割方式是完全酶切 另一种方式为部分酶切 体外重组连接常用的方法1黏性末端连接法2平齐末端连接发 平齐末端连接法 用化学合成法 逆转录酶酶促合成法获得的DNA片段或cDNA片段 以及某些限制酶酶切产生的DNA片段 称为平齐末端 固然平齐末端可用T4DNA连接酶连接 所需底物的浓度高 效率低 因此通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接 改造的方法是加人工接头或结尾 这一过程分为两个步骤1重组DNA引入宿主细胞2重组体克隆的筛选与鉴定 谢谢观看
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