生化试验论文.doc

苹果渣中多酚物质的福林法测定曹建杰 10级生物技术1班摘要：以没食子酸为标准品测定苹果渣中多酚物质的总量。结果表明，当福林试剂与10%Na2co3体积之比1:1反应温度25，反应时间120min时，多酚含量在5-30ug范围内与吸光值呈良好的线性关系。引言： 以没食子酸为标准品测定苹果渣中多酚物质的总量，该方法操作简单、测定误差小、灵敏度高，并且能在更为广阔的范围内应用，为苹果多酚制品的开发利用提供有效的测试手段。关键词：苹果渣 多酚 福林1 取材与处理方法1.1 材料与仪器 苹果渣 自备；没食子酸标准溶液 准确称取没食子酸0.1000g溶解于70%的乙醇中并定容至100mL,再用70%的乙醇稀释至10倍，即得浓度为100ug/mL的标准溶液，先用现配；Folin-Ciocalteu试剂 在1L磨口回流蒸馏器中加入100g钨酸钠、25g钼酸钠、700mL蒸馏水、50mL85%磷酸、100mL37%盐酸HCD冷凝回流10h，然后添加150g硫酸锂和数滴溴液，取下冷凝管，重新加热至沸，维持15min，驱去多余溴，冷却后补足蒸馏水至1000mL，用棕色试剂瓶装好，置于冰箱中备用，临拥是稀释3倍；10% Na2co3溶液 取10.0g Na2co3用水溶解，定容至100mL。1.2 试验方法1.2.1 按下表1标准曲线的制作 表11234567没食酸(100ug/mL)00.050.100.150.200.250.30蒸馏水(mL)21.951.901.851.801.751.70福林试剂(mL)1.01.01.01.01.0101.0充分震荡后静置3-4分钟Na2co3溶液（mL）1.01.01.01.01.01.01.0摇匀置于25温水浴中反应2小时O.D76500.1960.3470.6280.8170.9171.149以吸光含量对吸光度进行直线回归，得回归方程Y=0.0383X+0.0127，线性关系r=0.9846，标准曲线见下图1图1 标准曲线 1.2.2 原料的处理 准确称取苹果渣8 .000g于锥形瓶中，加入80mL70%的乙醇，在80的水浴中热回流提取1次，每次2h，4000r/min离心20min，收集上清液，用70%的乙醇定容至50mL待测。1.2.3 测定原理与方法 多酚类化合物分子上有极易氧化的羟基，在碱性条件下与Folin-Ciocalteu试剂反应后呈现蓝色，次反应在765nm处有最大吸收，一定条件下遵从朗伯比尔定律，以没食子酸为基准物质可测定苹果多酚的总量。根据该原理从上述50mL待测液中吸取溶液30uL，测定吸光度，又回归方程可求得30 uL待测液中多酚的含量，再进一步计算1g样品中酚类物质的含量。1.2.4 结果计算 样品中多酚物质含量 （以没食子酸计,mg/g）=(a1v1)/(v2w) a1 为样液中多酚的含量（ug），v1为样液的体积（mL）v2，为测定去样液的体积（uL），w为称样量（g）2 结果与分析2.1 数据处理经测定样品的吸光度为0.267，代入回归方程y=0.0383x+0.0127得：x=6.641ug样品中多酚物质含量（mg/g）=(0.006641mg50mL)/(0.03mL8000mg)=0.0014mg/g2.2 结果分析该实验值与实际值之间存在一定的误差，主要是由于没有浓缩的缘故，其次还有反应显色时间和反应温度对实验有一定的影响。3 结论采用福林法测定苹果渣中多酚物质的含量时，以没食子酸作为标准品，多酚含量在5-30微克范围内与吸光值成良好的线性关系。并且该方法具有操作简单、灵敏度高等优点。参考文献:【1】.王文杰.高锰酸钾滴定法测定茶多酚有关用剂的特性研究J.福建茶叶，2002（1）：15-17.【2】.郭娟，艾志录，催建涛，王育红.苹果渣中多酚