免疫细胞的分离及其表面标志检测技术 PPT课件

1 第三章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术 2 第一节免疫细胞的分离一 外周血单个核细胞分离二 淋巴细胞的分离三 T细胞和B细胞的分离四 T细胞亚群的分离 3 第二节淋巴细胞标志及亚群分类一 细胞表面标志及亚群二 B细胞表面标志三 NK细胞表面标志第三节其他的免疫细胞第四节免疫细胞表面标志的检测及应用一 免疫细胞表面标志的检测方法二 淋巴细胞表面标志检测的临床意义 思考题小结 4 5 第一节免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离淋巴细胞的分离T细胞和B细胞的分离T细胞亚群的分离 6 一 外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞 peripheralmononuclearcells PMNC 包括淋巴细胞和单核细胞 monocyte Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞 是一种单次差速密度梯度离心的分离法 7 细胞分离基本原理 不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同 8 不同细胞密度不同 人的红细胞密度为1 093粒细胞密度为1 092单个核细胞 淋巴细胞和单核细胞 的密度为1 075 1 090 9 不同细胞密度不同 10 用1 077 0 001的分层液可将细胞分离 11 密度梯度离心 Ficoll 离心 12 二 淋巴细胞分离 贴壁粘附法吸附柱过滤法磁铁吸引法Percoll分离液法 连续密度梯度离心 去单核细胞 13 E花环沉降法尼龙毛柱分离法 三 T细胞和B细胞的分离 14 四 T细胞亚群的分离 亲和板结合分离法磁性微球分离法荧光激活细胞分离仪分离法 15 荧光激活细胞分离仪分离法 16 17 磁珠大小可以选择 18 大小免疫磁珠分离细胞的特点比较 19 20 21 免疫磁珠法细胞分选过程 22 免疫磁珠细胞分选装置 23 全自动细胞分选系统 24 流式细胞分析仪 25 第二节淋巴细胞标志及亚群分类 常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原 Clusterofdifferentiation CD 26 细胞表面分化抗原 CD抗原 适用于T B细胞的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离 阴性分选 27 一 T细胞表面标志及其亚群 CD3 CD4 CD8 辅助性T细胞 helpTcell Th CD3 CD4 CD8 细胞毒性T细胞 cytotoxicTcell TcorCTL CD4 CD25 调节性T细胞 regulatoryTcell TrorTreg 28 二 B细胞表面标志 SmIg Fc受体 补体受体 EB病毒受体 部分CD分子是B细胞的重要表面标志 其中以SmIg为B细胞所特有 是鉴定B细胞可靠的指标 CD19 CD5分子 可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞 B1细胞为CD19和CD5双阳性 而B2细胞仅为CD19阳性 B2细胞为通常所指的B细胞 29 三 NK细胞表面标志 人类NK细胞表面标志主要以CD16 CD56来认定 临床上将CD3 CD56 CD16 淋巴细胞认定为NK细胞 30 T细胞及NK细胞 31 第三节其他的免疫细胞 抗原提呈类细胞表面标志 32 第四节免疫细胞表面标志的检测及应用 免疫细胞表面标志的检测方法淋巴细胞表面标志检测的临床意义 33 一 免疫细胞表面标志的检测 抗体致敏细胞花环法免疫细胞化学法免疫荧光法流式细胞分析法 34 二 淋巴细胞表面标志检测的临床意义 淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标 对CD4 和CD8 T细胞的测定 有助于免疫缺陷疾病 自身免疫性疾病和移植排斥反应的监测 35 临床常见疾病中的T淋巴细胞的变化 36 思考题 1 免疫细胞都包括哪些细胞 为什么要将其分离纯化 2 淋巴细胞有哪几类细胞 能用形态学的方法加以区别吗 3 将细胞分离的原理有哪些 各有什么特点 4 形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群 5 T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么 37 6 什么是细胞表面标志 其作用是什么 7 细胞表面标志的检测方法有哪些 8 利用细胞表面标志 CD抗原 分离细胞的方法有哪几种 9 T细胞 B细胞 NK细胞 单核细胞的主要生物标志是什么 10 淋巴细胞表面标志检测的临床意义是什么 38 小结 淋巴细胞并不是功能单一的群体 但其在光学显微镜下的形态基本是一样的 因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法 而要依靠对其表面标志的检测 常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的表面标志是CD抗原 39 进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一 但目前看来 还很少有只通过一个CD抗原就能将某一类淋巴细胞亚群指示出来的CD抗原 CD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异 40 根据T细胞的免疫效应功能和表面CD分子表达至少可以分为