食用菌制种基本条件

第三章食用菌菌种生产 本章重点 食用菌制种条件 制种工具的使用 教学目的 熟练使用制种用品 用具 设备 设施进行制种生产 第一节食用菌菌种的概念 一 菌种的概念原意是指孢子 相当于植物的种子 但在实际生产中 常将经过人工培养的纯菌丝体连同培养基质一同叫做菌种 二 菌种类型 返回本节 一 级别不同的菌种 1 一级种 母种 返回本节 2 二级种 原种 3 三级种 栽培种 不可再扩 二 状态不同的菌种 第二节食用菌制种条件 一 食用菌制种程序 种菇 试管培养基 培养 母种 固体培养基 原种 固体培养基 栽培种 培养 培养料灭菌 培养基灭菌 培养料灭菌 培养 一 制种设施 晒料场培养料摊晒和处理原料库存放原材料装料库培养料混合 分装灭菌室培养基灭菌冷却室培养基冷却接种室各级菌种分级培养室菌种培养冷藏室成种菌种短期存放菌种保藏定义 二 生产设备 1接种设备 用于分离和扩大各级菌种的专业设备包括接种室 接种箱 超净工作台 接种工具 接种室 要求 内外两间 面积适宜 容易搞清洁 能进行灭菌 内间为接种工作间 5 6平方米 门窗紧密 尽量减少灰尘积累 内置工作台外间为缓冲间 2 3平方米 用于进接种间前换衣 帽 鞋 同时为内间提供与外界相隔环境 内外间均为拉门 位置相互错开体积应尽量小 利于彻底灭菌装过滤空气的通风设施内外间墙 地板 天花板 室内用具应尽量光滑易擦洗 接种室设计 接种箱 缩小的接种室双人 单人操作型易消毒 规模受限制 接种箱 超净工作台 局部净化设备空气过滤除菌无论接种箱还是净化工作台 均应放在较干净 空气中尘埃少的环境中 最好置于接种室内 超净工作台 接种工具 接种针接种环接种刀接种铲镊子接种器等 酒精灯和接种工具 2菌种培养设备 放置接种后各级菌种 并提供适宜温度和通气条件 使菌丝生长良好的专用设备 培养室 培养架 以操作方便为宜 宽0 7 1 2米 层间40cm调温 电炉 红外线 暖气管 门窗 抽风机测温 干湿球温度计照明 避免使用蓝光灭菌 紫外灯 三 培养设备菌种培养室 培养箱 恒温箱 根据需要使温度恒定在一定范围内 一般用于培养斜面试管和少部分原种 恒温培养箱 3 培养基加工设备 木材切片机木片粉碎机搅拌机装瓶装袋机 4 灭菌设备 灭菌 将环境中的所有微生物杀死 一般采用热力灭菌设备干热灭菌设备原理 利用干燥热空气进行灭菌灼烧灭菌 酒精灯电热恒温干燥箱 160 1 2小时适宜玻璃器皿 金属用具灭菌 湿热灭菌设备 利用潮湿热空气进行灭菌高压灭菌手提式高压灭菌锅 9瓶立式高压灭菌锅 45瓶卧室园形高压灭菌锅270瓶卧式方形高压灭菌锅 消毒柜 500瓶121 20 60分钟 常压灭菌 砖石油桶蒸笼等105 6 8小时 5 制种容器和消毒药品 容器750ml无色 浅色菌种瓶聚丙烯菌种袋消毒药品甲醛75 洒精高锰酸钾漂白粉 来苏儿 三 菌种厂选建 交通方便 水电充足地势干燥 环境干净空气清新 30米内没有畜禽圈舍 饲料仓库 排废工厂有堆放 摊晒原料地 菌种厂设计 第四章制种基本技术 知识目标明确液体菌种制作过程熟悉消毒与灭菌的分类与方法菌种制作工艺流程及菌种质量鉴定 保藏的方法 三 菌种生产程序 第一节培养基制作技术 一 概念及要求 二 培养基的类型 粉状 条状 二 各级菌种的培养基 一 母种培养基 1 通用配方 2 配制过程 煮沸20min 取定量滤液 制马铃薯滤液 滤液沸时加入 融后加余料 融化琼脂 调解pH 勿污管口 控制装量 分装试管 10 NaOH或HCL 一 营养液制作1 准备工作 三 制作方法 2 称量 材料预处理按配方准确称量各营养物质 将马铃薯去皮 挖掉芽眼后称量200g 切成1cm见方的小块 琼脂剪碎后用水浸泡 3 熬煮将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中 煮至酥而不烂 4 过滤 加可溶药物用双层沙布过滤 取滤汁 放在电饭锅中加入糖 5 熬琼脂 定容在沸腾状态下加入琼脂 直到琼脂完全溶化为止 定容至1000ml 二 营养液分装1 用注射器分装2 分装标准 分装量为试管长度的1 4 1 5 注意培养基不能沾污试管口 3 塞棉塞棉塞松紧适度 1 3在管外 2 3在管内 4 扎捆7 10支试管捆在一起 棉塞上包好防水纸 直立放入高压灭菌锅中 四 摆斜面灭菌结束后锅盖开1 5的小缝 用余热烘干报纸和棉塞 然后摆斜面 斜面长是试管总长的1 2 三 灭菌处理在1 0 1 5kg cm2压力下维持20 30min 四 摆斜面灭菌结束后锅盖开1 5的小缝 用余热烘干报纸和棉塞 然后摆斜面 斜面长是试管总长的1 2 二 原种 栽培种培养基 配方 1 种类 1 棉籽壳培养基 配方 2 颗粒培养基 栽培种的装袋 第二节消毒与灭菌技术 一 消毒 disinfection 指杀灭物体中的病原微生物的方法 消毒只要求达到消除传染性的目的 而对非病原微生物及其芽胞 孢子并不严格要求全部杀死 空间消毒法 表面消毒法 基质消毒法 煮沸消毒法 常用的消毒药品酒精 甲醛 硫磺 多菌灵 克霉灵 气雾消毒剂 生石灰 高锰酸钾等 石碳酸 紫外线灯30W 二 灭菌 sterilization 指杀灭物体中所有病原微生物和非病原微生物及其芽孢 霉菌孢子的方法 1 干热灭菌法 1 火焰灭菌法 火焰直接烧灼 如接种环 2 热空气灭菌法干热灭菌器适用于高温下不损坏 不变质的物品 如玻璃器皿 瓷器等的灭菌 灭菌温度需160 维持2h 2 湿热灭菌法 1 煮沸灭菌 煮沸10 20min可杀死所有细菌的繁殖体 芽孢常需煮沸1 2h才被杀死 用于饮水 一般器械如刀剪的消毒 2 巴氏消毒法 以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物 而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法 1 低温维持巴氏消毒法63 65 30min2 高温瞬时巴氏消毒法71 72 15s3 超高温巴氏消毒法132 1 2s 3 流通蒸汽灭菌法 是一种常压蒸汽消毒法 细菌繁殖体15 30分钟可杀灭 但芽孢不全部被杀灭 4 间歇灭菌法 反复多次流通蒸汽 100 维持30min温箱过夜100 维持30min温箱过夜100 维持30min温箱过夜100 维持30min 此法常用于一些不耐高温的培养基 如鸡蛋培养基 血清培养基 糖培养基的灭菌 高压蒸汽灭菌器 15磅 平方英寸 121 3 温度下维持15 20min 可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物 应用此法灭菌 一定要充分排除灭菌器内原有的冷空气 用于普通培养基 生理盐水 耐热药品 手术敷料等 手提式高压蒸汽灭菌器 5 高压蒸汽灭菌法 3 辐射杀菌法 1 紫外线灭菌紫外线的穿透力弱 因此一般用于手术室 传染病房 细菌实验室的空气消毒 紫外线对人体皮肤 眼睛有损伤作用 应注意防护 2 电离辐射常用于一次性塑料制品的消毒 3 微波不能穿透金属表面 4 滤过除菌法 滤过除菌法是用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去 以达到无菌目的 主要应用于一些不耐高温灭菌的血清 毒素 抗生素以及空气的除菌 三 培养基的灭菌 一 母种培养基的灭菌 无菌检验约30 条件下 空白培养2 3天 母基灭菌与摆斜面 二 原种 栽培种培养基的灭菌 第三节菌种扩繁与培养 一 无菌操作二 母种的接种 一 转管法三 原种 栽培种的接种 必备 转管法 转管 三 原种 栽培种的接种 接栽培种 用接种匙 镊 铲