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实验二蛋白质的两性反应与等电点测定 了解蛋白质的两性解离性质掌握测定蛋白质等电点的方法 实验目的 P COOH NH2 P COO NH3 P COO NH2 P COOH NH3 pH pI pH pI pH pI 兼性离子 阳离子 阴离子 实验原理 在等电点时蛋白质颗粒上的净电荷为零 缺乏同电相斥的因素 蛋白质溶解度最小 最容易析出沉淀 维持蛋白质胶体稳定的因素 表面电荷 水化膜 本实验配制了各种不同pH值的缓冲液 沉淀出现最多的缓冲液pH值即为酪蛋白的等电点 实验器材与试剂 大试管 滴管 刻度吸量管 0 5 酪蛋白醋酸钠溶液 0 01 溴甲酚绿指示剂 指示范围 pH3 8 5 4 0 02MHCL溶液 0 02MNaOH溶液 0 01M醋酸溶液 0 10M醋酸溶液 1 00M醋酸溶液 蛋白质的两性反应 1 实验步骤 取一干净试管 酪蛋白液10滴 溴甲酚绿指示剂3滴 观察溶液颜色并解释现象 蛋白质的两性反应 2 滴加0 02MHCL溶液 边滴加边混匀 有最大沉淀产生 观察溶液颜色变化 至沉淀消失 观察溶液颜色并解释现象 继续滴加0 02MHCL溶液 边滴加边混匀 蛋白质的两性反应 3 继续滴加0 02MNaOH溶液 边滴加边混匀 有最大沉淀产生 观察溶液颜色变化 至沉淀消失 观察溶液颜色并解释现象 继续滴加0 02MNaOH溶液 边滴加边混匀 溶液呈蓝色 蛋白质的两性反应 1 实验结果 酪蛋白溶液呈碱性 pH 5 4 使溴甲酚绿指示剂显蓝色 H 沉淀 蛋白质的两性反应 2 出现最大量沉淀时 说明到达了酪蛋白的等电点 溶液由蓝色变成浅绿色 3 8 pH 5 4 继续加酸 H 继续增大 pH pI 酪蛋白所带正电荷不断增加 同电相斥 沉淀溶解 沉淀完全溶解时 溶液显黄色 pH 3 8 OH 沉淀 蛋白质的两性反应 3 出现最大量沉淀时 说明到达了酪蛋白的等电点 溶液由黄色变成浅绿色 3 8 pH 5 4 继续加碱 OH 继续增大 pH pI 酪蛋白所带负电荷不断增加 同电相斥 沉淀溶解 沉淀完全溶解时 溶液显蓝色 pH 5 4 结论1 酪蛋白的等电点在pH3 8 5 4之间 pH pI时 蛋白质溶解度最小 蛋白质是两性电解质 取7支同样规格的干燥试管 精确加入各试剂 酪蛋白等电点的测定 注 单位均为mL 向每个试管中各加0 5 酪蛋白溶液20滴 加一管 立即混匀一管 静置30分钟后 以0 表示各管的混浊度 并指出哪一种pH是酪蛋白的等电点 酪蛋白等电点的测定 1 2 3 4 5 6 7 实验结果 结论2 4号试管沉淀量最多 说明4号管溶液的pH值为酪蛋白的等电点 即pI 4 7 什么是蛋白质的等电点 在等电点时 蛋白质溶液为什么容易发生沉淀 思考题 实验项目实验原理试剂和器材操作方法 主要步骤 结果分析思考题 请按时交实验报告 实验三凝
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