食品中志贺氏菌检验ppt课件

志贺氏菌检验 一 实验目的 了解食品安全与志贺氏菌检验关系 1 了解志贺氏菌生理形态化学性质 2 掌握志贺氏菌检验方法和结果判断 3 检验食品中是否有志贺氏菌 4 二 实验原理 需氧或兼性厌氧 营养要求不高 能在普通培养基上生长 最适温度为37 最适pH为6 4 7 8 37 培养18 24小时后菌落呈圆形 微凸 光滑湿润 无色 半透明 边缘整齐 直径约2nm 能分解葡萄糖 产酸不产气 不发酵乳糖 靛基质产生不定 甲基红阳性 VP试验阴性 不分解尿素 不产生H2S 根据生化反应可进行初步分类 三 实验的试剂和仪器 仪器与设备 试剂和仪器 培养基与试剂 仪器与设备 规格名称数量用途1 500ml广口瓶1个稀释样品2 500ml三角瓶1个制增菌液3 250ml三角瓶4个制培养基4 18 180mm试管制三糖铁培养基5 13 100mm试管制蛋白胨水等6 1ml移液管7 10ml移液管8 直径为90mm平皿5副制SS EMB平板9 250ml量筒1个10 玻璃棒11 恒水浴箱1个12 显微镜1台镜检 培养基与试剂 GN增菌液225ml 瓶1瓶500ml三角瓶EMB培养基100ml 瓶1瓶250ml三角瓶SS琼脂100ml 瓶1瓶250ml三角瓶三糖铁斜面6ml 支6支15 150mm试管葡萄糖半固体培养费基4ml 支5支13 100mm试管蛋白胨水2ml 支5支13 100mm试管5 乳糖发酵管3ml 支5支13 100mm试管甘露醇发酵管3ml 支5支13 100mm试管棉子糖发酵管3ml 支5支13 100mm试管甘油发酵管3ml 支5支13 100mm试管 四 实验步骤 验 步 骤 实 流程图 操作步骤 流程图 采样 样品处理 选择性增菌 选择性平板划分 生化实验 镜检 结果报告 实验前的准备 对烧杯 玻璃棒 移液管 试管 培养皿 锥形瓶的清洗注意 洗涤后的仪器应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠对试管 玻璃棒 移液管 锥形瓶 烧杯 培养皿进行包扎 要将报纸裁成5 10公分 成30 卷起 结尾处向上折叠即 包扎灭菌 培养基的制备 1 CN增菌液成分 胰蛋白胨20g柠檬酸钠5g磷酸二氢钾1 5g葡萄糖1g去氧胆碱酸钠0 5g氯化钠5g甘露醇2g磷酸氢二钾4g蒸馏水1000mlph7 0制法 按上述成分配好 加热溶解 校正PH 分装每瓶225ml 115C高温灭菌15min2 HE琼脂成分 蛋白胨12g水杨素2g蒸馏水1000ml乙液20ml牛肉膏3g胆盐20g0 4 溴麝香草芬兰钠溶液16ml乳糖12g氯化钠5g蔗糖12g琼脂20g甲液20mlHP7 5制法 将蛋白胨 乳糖 水杨素 氯化钠 蔗糖 牛肉膏 胆盐等溶解于400ml蒸馏水中作为基础液 加琼脂与600ml蒸馏水中 加热溶解 加入甲液乙液与基础液中 校正HP 再加指示剂 并与琼脂液合并 冷却 倾注平板 培养基的制备 3 SS琼脂液的配制成分 牛肉膏0 6g琼脂2 04g三号胆盐0 42g蒸馏水120ml 月示胨0 6g制法 将牛肉膏 月示胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中 将琼脂加入600ml蒸馏水中 煮沸使其溶解 再将两液混合121 高压灭菌15min 保存备用 4 麦慷慨琼脂液的配制成分 蛋白胨2 04g脙胨0 36g猪胆盐 或牛 羊胆盐 5g氯化钠0 6g琼脂2 04g蒸馏水120mL乳糖1 2g0 01 结晶紫水溶液1 2mL0 5 中性红水溶液0 6mL制法 将蛋白胨 胨 胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中 校正pH7 2 将琼脂加入于600ML蒸馏水中 加热溶解 将两液合并 分装于121 高压灭菌15min备用 临用时加热溶化琼脂 趁热加入乳糖 冷至50 55 时 加入结晶紫和中性红水溶液 摇匀后倾注平板 培养基的制备 5 伊红美蓝琼脂 EMB 成分 蛋白胨10g2 伊红溶液20ml乳糖10g0 65 美兰溶液10ml磷酸二氢钾28g蒸馏水1000ml琼脂17gPH7 1制法 将蛋白胨 磷酸盐 琼脂溶解于蒸馏水中 校正ph 分装于烧杯内 121c高压灭菌15min备用 临用时加入乳糖并加热溶解琼脂 冷却 加入伊红和美蓝溶液 摇匀 倾注平板 6 三糖铁琼脂的配制成分 蛋白胨4 8g牛肉膏0 6g乳糖1 2g蔗糖1 2g葡萄糖0 12g氯化钠0 6g硫酸亚铁胺0 024g硫代硫酸钠0 024g琼脂0 72g酚红0 003g蒸馏水120mLpH7 4制法 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中 校正pH 加入琼脂 加热煮沸 以溶化琼脂 加入0 2 酚红水溶液12 5mL 摇匀 分装试管 装量宜多些 以便得到较高的底层 121 高压灭菌15min 放置高层斜面备用 培养基的制备 7 生理盐水的配制成分Nacl0 9g 蒸馏水100ml制法一般每种检样配制250ml生理盐水 称取2 2gNacl 加入250ml蒸馏水溶液 分装于2支大试管中 每支9ml 再量取225ml装入500ml广口瓶中 并加入适量的玻璃珠 剩余的装人另1支试管中 包扎后于121度高压灭菌15min8 氯化钠结晶紫增菌液的配制成分 蛋白胨2 4g氯化钠4 8g0 01 结晶紫溶液0 6mL蒸馏水120mLpH9 0制法 胨晶晶紫外 其他按上述成分配好 加热溶解 约加30 氢氧化钾溶液4 5mL 校正pH 加热煮沸 过滤 再加入结晶紫溶液 混合后分装试管 121 高压灭菌15min 操作步骤 1 灭菌干热灭菌 剪刀及棉绳等干热灭菌湿热灭菌 均质袋 纱布 各种培养基 生理盐水 增菌液2 采样从食堂中取一个鸡蛋3 样品处理将鸡蛋打碎放入无菌碗里 然后用杀菌的玻璃棒搅拌 在放入到均质袋中用均质器打匀4 增菌称取检样25g 加入装有225mlGN增菌液的500ml的广口瓶内 于 36 1 培养6 8h 操作步骤 5 分离取增菌液一环 划线接种于SS琼脂平板一个 伊红美蓝琼脂平板一个 于 36 1 培养18 24小时 志贺菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落 6 生化试验挑取平板上的可疑菌落 接种三塘铁琼脂和半固体各一管 一般应多挑取几个以防遗漏 志贺菌属在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸 不产气 斜面产碱 不产生硫化氢 无动力 在半固体管内 沿穿刺线生长 7 镜检从三塘铁琼脂和半固体各一管中挑取生长出来的菌落 进行革兰氏染色 然后放在显微镜下观察 8 结果报告 五 注意事项 注意事项 3 增加鉴别培养基的数目 可以增加志贺菌的阳性检出率 用于分离的鉴别培养基一般不少于两个 中等选择性的 HE或SS琼脂平板一个 弱选择性的 麦康凯或EMB琼脂平板一个 WS琼脂可作为中等选择性培养基使用 FX琼脂