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实验2分离以尿素为氮源的微生物 一 实验原理 尿素NH3中性碱性酚红颜色 酸性 黄色红色 变色范围pH6 4 8 2 二 实验目的 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌 有脲酶 通过指示剂 酚红 颜色的变化检知培养基pH的变化 脲酶催化的化学反应 三 实验步骤 倒平板 制备一定浓度梯度的细菌悬液 g土壤 ml无菌水 振荡 为 2稀释液 依次制备 3 4 5的土壤稀释液 稀释涂布分离法分离细菌 制备无菌的 固体培养基和尿素固体培养基P26 培养观察 倒置 37 24 48h 无菌 0 1ml 玻璃刮刀 配制培养基 尿素培养基葡萄糖0 025gNaCl0 12gK2HPO40 12g琼脂糖0 5g酚红0 25g尿素10ml 选择培养基 实验组 为什么用琼脂糖代替琼脂 怎么获得无菌的尿素溶液 接种 取0 1ml菌悬液 涂布分离 涂布分离 37 倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37 培养 1 为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物 内含一定量的含氮化合物 如果用琼脂固化培养基 会为细菌提供一定量的非尿素类氮源 这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌 不利于以尿素为氮源的细菌的筛选 故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂 思考题 2 有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨 氨使土壤碱化 氨还与SO42 等离子形成化合物 使土壤板结 而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解 而且利用了所形成的氨 有利于自然界中氮的循环 3 有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现 细菌向胞外分泌脲酶 使培养基中尿素水解 水解后产生氨 氨为碱性 酚酞在酸性环境里呈黄色 碱性里呈红色 培养基中酸碱指示剂产生颜色变化 变红 标志着存在脲酶水解尿素的作用 从而证明这一菌株以尿素为氮源 4 与全营养培养基上的菌落数比较 为什么尿素培养基上只有少数菌落 表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占有极少数 5 本实验
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