6 动物药、矿物药的

第六章动物药、矿物药的分析,1、牛黄及其制剂的分析中，掌握胆汁酸的化学反应，胆红素化学反应，人工牛黄的定性鉴别，人工牛黄的含量测定，熟悉含牛黄制剂分析2、熟悉麝香、蛇胆、蟾酥、斑蝥、雄黄、朱砂及其制剂的分析的定性鉴别，含量测定3、熊胆及其制剂的分析，掌握熊去氧胆酸的定性鉴别，熊胆中结合胆汁酸含量测定4、熟悉其他矿物药的分析,第一节含动物药中药制剂的分析,动物药化学成分的结构与分类1、蛋白质、多肽及氨基酸类2、生物碱类化合物3、甾体类化合物4、酚酮、酸类化合物5、萜类化合物,第一部分含动物药中药制剂的分析,一、牛黄及其制剂的分析,天然牛黄，人工牛黄所含成分胆酸(cholicacid,CA)：mpl98、pK=6.4、溶解度0.28g/L(水)、30.5g/L(乙醇)、1.22g/L(乙醚)、5.0g/L(氯仿)、0.36g/L(苯)、28.24g/L(丙酮)、胆酸钠盐568.98/L(水15)。去氧胆酸(deoxycholicacid,HDCA)：mp176178、pK=6.58、溶解度1:4(冷乙醇)、0.248/L(水)、0.128/L(苯)、10.468/L(丙酮)、去氧胆酸钠盐333g/L(水15)。,胆红素溶解性：不溶于水，溶于苯、二硫化碳、氯仿、碱液、微溶于乙醇、乙醚，其钠盐易溶于水，不溶于氯仿，其钙盐、镁盐不溶于水性质：在碱溶液中或遇三价铁极不稳定易氧化稳定性：天然胆红素在提取过程中，受酸碱的影响，双吡咯环产生异构化，即胆红素-a,胆红素-a,及胆红素a。胆红素，是天然产物的原型物(bilirubin-。)另含脂类，蛋白质、肽、氨基酸类，无机元素等,我国部颁标准中人工牛黄的质量标准,组成：胆酸、胆红素、胆固醇与无机盐等配合而成。含量：胆酸：标示量的90%110%。总胆酸25%，胆红素含量90%性状：人工牛黄应为黄色疏松的粉末，味苦，微甘,(一)胆汁酸的化学反应,1.Pettenkofer反应蔗糖浓硫酸羟甲基糠醛+胆汁酸紫色糠醛+胆汁酸浓硫酸红色2.GregoryPascoe反应（可作胆酸定量反应）糠醛+胆汁酸浓硫酸羟甲基胆酸溶液显蓝色3.Hammarsten反应铬酸(醋酸+盐酸)+胆酸类胆酸、阿朴胆酸及3，12-二羟基-胆烯酸呈紫色；去氧胆酸和鹅去氧胆酸呈阴性反应；3-酮基-7，12-二羟基胆烷酸呈黄色绿色紫色；3，12-二羟基-7酮基肥烷酸显黄色,(二)胆红素的化学反应（1）重氮化反应：胆红素+重氮化试剂(对氨基苯磺酸重氮盐)呈色（比色法定量）（2）Gmelin反应：+硝酸呈绿、蓝、紫、红、黄等颜色环(三)人工牛黄的定性鉴别（1）+硫酸+过氧化氢绿色；（2）+糠醛+硫酸蓝紫色。（3）显微鉴别（4）4532nm（5）人工牛黄与天然牛黄的IR吸收光谱有明显差别：天然牛黄在745755cm-、980990cm-、12401250cm-、15651570cm-、16201630cm-、16551665cm-，处均有明显吸收峰,(4)薄层色谱鉴别：胆酸的鉴别：供试液：样品粉末10mg，加氯仿20ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解混合对照液：胆酸、去氧胆酸对照液薄板：硅胶G展开剂：异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸(15:7:5)/氯仿-乙醚-冰醋酸(15:7:5)显色：10%硫酸乙醇溶液，105烘约5分钟，UV(365nm)下检视/10%磷钼酸乙醇液，于105烘约5分钟,胆红素的鉴别对照液：胆红素氯仿液薄板：硅胶G展开剂：甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10:1:0.5),(四)人工牛黄的含量测定,1.胆酸的含量测定GregoryPascoe反应2.总胆酸的含量测定酸碱滴定法3.胆红素的含量测定重氮化试液显色法部颁标准测定法：在453士2nm处测定吸收度，按C33N4O6的E为1038计算,4.HPLC法测定胆红素的含量氯仿-1%盐酸甲醇溶液(5:1)为溶剂：牛黄中的胆红素以钙盐形式存在，游离型胆红素不溶于水，易溶于氯仿超声处理数分钟：以便游离型和结合型的胆红素均能溶出,(四)人工牛黄的含量测定,(五)含牛黄制剂的分析,1.牛黄珍珠胶囊中胆红素的测定在4531nm波长处测定吸收度，按胆红素C33H36N4O6吸收系数(E)为1083计算含量2.牛黄降压丸中胆酸和去氧胆酸的测定薄层扫描法,3.六神丸中胆酸、猪去氧胆酸的测定,反相高效液相色谱法胆汁酸类成分衍生化法：胆汁酸结构中缺乏共轭结构，无近紫外吸收生色基团，一般高灵敏度的紫外检测器或荧光检测器不能检测。利用衍生化技术，使胆汁酸类成分形成对硝基苯甲酸甲基酯，在254mm波长处检测方法：精密吸取胆汁酸适量置反应瓶中，加氢氧化钾试液100l，蒸干，加18-冠醚-6-试液和1-溴乙酰基对硝基苯(l-bromoacetylnitrobenzene)(简称BANB)衍生试液各100l，密塞，立即放入已恒温至60的烘箱中，加热40分钟，取出冷却至室温，即可进样,二、麝香及其制剂的分析,具有抗炎、强心、雄性激素样等作用主要成分：麝香酮(muscone，2%4%)，11种雄甾烷，22种C14C33脂肪酸的胆固醇脂，10种C20C29脂肪酸的胆固醇脂，肽类，蛋白质，氨基酸以及麝香吡啶等商品麝香分壳麝香(整麝香)和麝香仁(散麝香)两种规格，其商品标准如下：外形：不得有显著氨臭，虫蛀、霉菌及染色。在显微镜下观察，不得有淀粉、肝类、肉类等伪品。壳麝香：每500g不得超过22只,麝香仁：灰分25%，麝香仁5%醇(90%)浸出物：壳麝香30%，麝香仁10%,二、麝香及其制剂的分析,(一)定性鉴别（1）冒槽（2）搓之成团，再用手指轻揉即散，不应粘手、染手、顶指或结块（3）灼烧法（4）镜检(二)含量测定1.麝香中麝香酮的含量测定气相色谱方法TLCS2.麝香风湿膏中麝香酮的测定原理：麝香酮为麝香的主要有效成分，与2，4-二硝基苯肼反应生成的麝香酮苯腙，利用薄层扫描方法测定其含量,三、熊胆及其制剂的分析,具清热利胆、平肝明目、镇痛、健胃等功效成分：胆汁酸牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)碱水解熊去氧胆酸(UDCA)及少量的鹅去氧胆酸、去氧胆酸和胆酸（结合形式存在）,(一)熊胆中熊去氧胆酸的定性鉴别,光谱鉴别273nm薄层色谱法供试品溶液：胆仁甲醇溶解，挥干，碱水解，加酸呈明显酸性(pH23)，乙酸乙酯萃取对照品溶液：胆酸(CA)、熊去氧胆酸(UDCA)、猪去氧胆酸(HDCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、去氧胆酸(DCA)混合甲醇液显色：30%硫酸液，于100105烘510分钟，取出，立即观察并记录斑点位置及显色情况，10分钟后于紫外光灯(365nm)下观察,注意：(1)需用新鲜活化的薄层板及新鲜配制的展开剂(2)展开剂中异戊醚可用乙醚代替，但展开时温度宜在20以下(3)严格掌握显色过程，方可得到稳定结果(4)5种对照品均不可缺少，互相参照这5种对照品的薄层图谱的相对比移值，才有助于较准确地判断熊去氧胆酸因为熊去氧胆酸与猪去氧胆酸斑点位置很接近，如不用二者的对照品同时参比对照，易引起误判(二)熊胆中结合胆汁酸含量测定薄层扫描法等,四、蛇胆及其制剂的分析,具有行气化痰，祛风除湿，清肝明目，平肝熄风，清热解毒成分：特征性成分胆汁酸（多数是以与牛磺酸结合的结合型胆甾酸形式存在，如牛磺胆酸，牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸及石胆酸，胆固醇，游离胆酸等），微量元素Zn、Cu、Fe及Ca，Mg等保存：含醇50%以上的白酒中，蛇胆与酒的比例为1:1(重量比),衡量蛇胆汁质量优劣的主要标淮：总固体之和及胆汁灰分所占该总固体的比例，蛇胆汁的比重(20测定)应在0.96000.9990之间，胆汁总固体为4577mg/ml之间，白酒浸泡液的比重在0.95990.9818之间(20测定)，浸泡液总固体为4074.7mg/ml，胆汁灰分是该胆汁总固体的10士2%质量衡量标准：胆酸含量加上胆汁比重，总固体含量,(一)十种蛇胆胆汁酸成分的薄层色谱对照：胆酸(CA)等甲醇液，胆固醇(CS)氯仿溶液，甘氨酸，牛磺酸水溶液显色：1.结合型胆甾酸紫外灯下观察荧光2.结合型胆甾酸水解产物胆汁碱水解，加酸使呈酸性(PH=2)，乙醚提取，挥干，甲醇溶解30%硫酸溶液(V/V)，喷后在105烘烤10分钟，365nm紫外灯下观察荧光(二)蛇胆川贝液中胆酸的分析薄层扫描法,五、蟾酥及其制剂的分析,成分：强心作用的蟾酥甾二烯类，强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类，蟾酥甾二烯类又分为游离型和结合型。其游离型称蟾毒配基，其结合型多为脂溶性的蟾酥毒素类，蟾酥配基类和精氨酸等结合的酯类（在干燥加工或提取过程中分解为蟾酥配基类）蟾酥甾二烯类结构特点是C17含有一个-吡喃酮(-pyrone)基，凡具有这种骨架的物质称为蟾酥二烯内酯(又称蟾酥内酯，bufadienolide),(一)定性鉴别,1.显色反应2.纸色谱法以甲酰胺为固定相，苯-氯仿(6:4)为流动相或丙二醇-水(4:1)为固定相展开，喷20%三氯化锑氯仿溶液，于7580加热5分钟，在日光或紫外光下观察，蟾酥中10个蟾酥二烯内酯成分呈现不同的颜色斑点。3.薄层色谱法4.紫外和红外吸收光谱法(1)紫外吸收光谱：max295300nm2,-内酯引起(称乙型强心苷元)(2)红外吸收光谱：蟾蜍二烯内酯类成分在18001700cm-1间有二个吸收峰,(二)定量分析,1.分光光度法和比色法95版药典法。氯仿提取液，在299nm处测定，按百分吸收系数计算蟾毒内酯含量2.薄层扫描法3.气相色谱法一般蟾酥及其制剂样品用1%乙醇；氯仿提取，中性氧化铝柱分离。氯仿洗脱，浓缩后残渣溶于四氢呋哺，用六甲基二氯硅烷和三甲基氯硅烷甲基化后进行GC分析，用内标法(内标物为孕甾酮)或外标法进行含量测定高效液相色谱法：本品按干燥品计算，含华蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的总量不得少于6.0。此外，还有正交函数法、紫外分光光度法、二阶导数光谱法等,(三)应用实例,实例1喉症丸中蟾酥总蟾毒内酯含量测定二阶导数光谱法实例2肖金丹三个蟾毒内酯成分含量测定薄层扫描法实例3六应丸中总蟾毒内酯的含量测定UV法：360nm处测定实例4梅花点舌丸中三个蟾毒内酯成分的含量测定高效液相色谱法,六、斑蝥及其制剂的分析,成分：斑蝥素，脂肪，树脂，有机酸，挥发油，甲壳质，多种无机元素。斑蝥素羟基斑蝥胺斑蝥素：很好的抗肿瘤作用羟基斑蝥胺：功效与斑蝥素相似，毒性约为1/500,定性鉴别,1.显色反应斑蝥素升华物+硫酸+间苯二酚红色，UV灯下绿色荧光2.纸色谱法水冷浸液作为供试品溶液鉴别蛋白质3.薄层色谱法氯仿提取液作为供试品溶液鉴别斑蝥素,定量分析,斑蝥素含量测定法酸碱滴定法，配位滴定法，非水滴定法，UV法，TLCS法，GC法应用实例斑蝥素乳膏：GC法,第二部分矿物药中药制剂的分析,分类：砷类药(如雄黄)；汞类药(如朱砂)；铅类药(如密陀僧)；铜类药(如胆矾)；铁类药(如赭石)；钙类药(如石膏)；硅类药(如滑石)；硫类药(如芒硝)；氯类药(如大青盐)；其他矿物药(如白矾、炉甘石、硼砂)分析基本程序：取样试样的分解定性定量分解法：溶解法(湿法)和熔融法干法，熔剂可分为碱性熔剂(如碳酸钠、氢氧化钠)和酸性熔剂如硫酸氢钾、焦硫酸钾）或氧化性熔剂(如过氧化钠、碳酸钠加硝酸钾)和还原性熔剂(如碳酸钠加硫),分析方法1化学分析法：（1）容量分析法（2）重量法2热分析法（1）热重法TGA（2）差热分析法DTA（3）差示扫描量热法DSC3可见分光光度法4原子吸收光谱法,一、雄黄及其制剂的分析,主含二硫化二砷(As2S2)，区别雌黄(As2S3)、砒石(As2O3),一、雄黄及其制剂的分析,性质：砷化合物具有挥发性，测定砷不应任意的灼烧，常用硝酸、硫酸等酸性溶剂分解，也可采用碱熔法分解：3As2S2+22HNO3+4H2O6H3AsO4+6H2SO4+22NOAs2S2+7H2SO42H3AsO3+SO2+4H2OAs2S2+11Na2O2+16Na2CO32Na3AsO4+2Na2SO4+22Na2O+16CO2,常用分解试剂：硫酸过氧化氢或硫酸硝酸钾2As2S2+9H2SO4+9H2O24H3AsO4+13SO2+12H2OAs2S2+3H2SO4+6KNO32H3AsO4+2SO2+6NO+3K2SO4含砷中成药测定法：加等量的氢氧化钙，加少量水调成糊状，先用小火加热使炭化，再加500600灼烧，使砷转化为砷酸钙，然后用盐酸提取。,(一)定性鉴别,1检查硫：As2S2+2KClO3+3HNO32KAsO3+2H2SO4+Cl2+NO2H2SO4+BaCL2BaSO4白色+2Cl2、检查砷：加热熔融，继续加热产生白色或黄白色火焰，并伴有白色浓烟取玻片覆盖后，有白色冷凝物，刮取少许置试管内加水煮沸使溶解，必要时滤过，溶液加硫化氢试液数滴即显黄色，加稀盐酸后产生黄色絮状沉淀，再加碳酸铵试液后，沉淀复溶解。2As2S2+7O22As2O3+O3+SO2As2O3+3H2O3H3AsO33H3AsO3+3H2SAs2S3+6H2O,(二)含量测定(碘量法),直接法：硫酸或碱熔分解原理：本法是将雄黄用硫酸加热分解，使成亚砷酸。中和后，加固体碳酸氢钠使pH控制在8左右。然后以淀粉作指示剂，用碘标准溶液滴定至溶液显蓝色。分解试样时，在硫酸中加入碱金属硫酸盐，可以提高沸点。间接法：As2S2+11H2O22H3AsO4+2H2SO4+6H2OH3AsO4+2KI+H2SO4H3AsO3+K2SO4+I2+H2OI2+2Na2S2O3（滴定液）2NaI+Na2S4O6,(三)牛黄解毒片中雄黄含量测定碘量法(四)中药雄黄中As2O3的含量测定（杂质测定）雄黄药材中夹杂有As2O3是剧毒性化合物，是造成雄黄常量应用时的毒性成分方法：古蔡法半定量检查（药典法），也可采用具有简便、快速、回收率好的Ag-DDC法,二、含汞矿物药及其制剂的分析,汞类药主要有水银、朱砂、灵砂、银朱、轻粉、粉霜等汞类药中的汞既是有效成分，又是有毒成分处理法：汞类药物一般用酸（硝酸，王水，逆王水，硫酸和硝酸钾）分解注意防止汞散失：低温加热，冷却回流，勿蒸干,(一)汞的定性鉴别1、+氢氧化钠试液黄色沉淀HgO2、+碘化钾试液猩红色沉淀HgI2+在过量的碘化钾试液溶解+氢氧化钠碱化+铵盐红棕色沉淀HgI42-3、+硝酸（涂于铜表面）光亮沉积物(二)含量测定硫氰酸盐法和铜试剂法。EDTA容量法应用少：干扰离子较多，另可用分光光度法（双硫腙）硫氰酸盐法：硫化汞(HgS)不得少于96.0%原理：样品加硫酸与硝酸钾加热使溶解，并加入1%高锰酸钾至显粉红色，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失后，以硫酸铁铵或硝酸铁为指示剂，用硫氰酸铵标准液滴定,(三)中药制剂及中药材中微量汞的测定,1.双硫腙比色法：试样用硝酸-硫酸-高氯酸消化。在pH12的溶液中，高价汞与双硫腙作用生成橙色，可用四氯化碳提取后进行比色，其最大吸收在492nm波长处2.朱砂及含朱砂中药制剂中游离汞的测定：蒸馏冷原子吸收光谱法3.中药制剂中可溶性汞的测定：用人工胃液浸取中成药中的可溶性汞，用冷原子吸收光谱法进行测定。,三、其他矿物药的分析(一)铜类药（胆矾(CuSO45H2O)、铜绿CuCO3Cu(OH)2）的分析,1.定性鉴别(1)+氨水蓝色沉淀（碱式铜盐）+过量的氨水溶解深蓝色的铜氨络离子2Cu2+SO42-+2NH3H2O=Cu2(OH)2SO4+2NH4+Cu2(OH)2SO4+8NH3=2Cu(NH3)42+SO42-+2OH-(2)中性或酸性溶液+亚铁氰化钾红棕色沉淀（亚铁氰化铜）+氨水溶解Cu(NH3)42+离子2Cu2+Fe(CN)64-=Cu2Fe(CN)6CuFe(CN)6+4OH-=2Cu(OH)2+Fe(CN)64-,2.定量分析经典方法：碘量法，以碘化钾将铜()还原为铜()的反应为基础的，还原时析出难溶于烯酸的碘化亚铜和游离碘，析出的碘用硫代硫酸钠标准溶液滴定酸度：PH3.54，过大结果偏高（I-离子易被空气氧化而析出I2）；酸度过小，Cu2+离子易水解，Cu2+与I-的反应缓慢影响滴定，酸化时宜用硫酸或醋酸,(二)铁类药磁石(Fe3O4)，赭石(Fe2O3)，自然铜(FeS2)等的分析,1.定性鉴别亚铁盐的鉴别：(l)Fe2+铁氰化钾深蓝色沉淀（滕氏蓝或邓布尔蓝）(2)Fe2+1%邻二氮菲的乙醇溶液数滴粉红色,(二)铁类药磁石(Fe3O4)，赭石(Fe2O3)，自然铜(FeS2)等