第12章抗生素类药物的分析

第十一章抗生素类药物的分析,第一节内酰胺类抗生素,第二节氨基糖苷类抗生素,第三节四环素类抗生素,抗生素的定义,抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。,抗生素的来源,1.生物合成（发酵）2.化学合成或半合成,抗生素质量的复杂性,产品稳定性差,分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用,发酵过程不易控制易受污染,生产工艺复杂,发酵液中杂质,无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、毒性物质,增加异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌,检查,含量测定方法,（一）生物学方法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力,（二）化学及物理化学方法,以理化方法测定主药含量,抗生素的活性以效价单位来表示：,每ml或每mg中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（u）或g表示。1mg青霉素G钠盐定为1667单位1mg青霉素G钾盐的单位（u）1595u/mg,分类（按结构与性质）：内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类林可霉素类、其他抗生素类,第一节内酰胺类抗生素,C,H,青霉素,（青霉素钾、钠）,氨苄西林（氨苄青霉素）,阿莫西林（羟氨苄青霉素）,普鲁卡因青霉素,头孢氨苄,头孢拉啶,头孢羟氨苄,头孢噻吩钠,一、结构特点与性质,与碱金属(Na+、K+)成盐易溶于水,（一）羧基酸性,与有机碱(普鲁卡因)成盐难溶于水,普鲁卡因青霉素,（二）手性C旋光性,头孢菌素类C6C7,青霉素类C3C5C6,（三）共轭体系UV,头孢菌素类母核有共轭体系,青霉素类母核无明显UV多数有苯环取代基,（四）内酰胺环,水溶液不稳定,干燥纯净稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,例,青霉素的降解反应,（一）呈色反应,1.羟肟酸铁反应,-内酰胺类,二、鉴别试验,（红、棕、褐）,2.茚三酮反应-氨基,3.双缩脲反应,似肽键,4.与重氮苯磺酸反应头孢哌酮,酚羟基,5.与变色酸-硫酸反应,青霉素阿莫西林氨苄西林,显色,1.K+、Na+的火焰反应,（二）各种盐的反应,2.沉淀反应（青霉素盐）,遇酸,3.重氮化-偶合反应芳伯氨基,（三）光谱法,1、UV法,样品、分解产物,2、IR法,3180cm-1N-H,内酰胺C=O,1780cm-1,3470cm-1O-H,1690cm-1仲酰胺C=O,1250cm-1C-O,以阿莫西林为例,三、杂质检查,药物检查项目检查方法头孢他啶聚合物HPLC法头孢曲松钠头孢哌酮钠头孢噻肟钠头孢呋辛酯有关物质和异构体HPLC法青霉素钾（钠）吸收度紫外分光光度法,第二节氨基糖苷类抗生素,链霉素双氢链霉素新霉素卡那霉素庆大霉素巴龙霉素,链霉胍+链霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-葡萄糖胺,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-葡萄糖胺,绛红糖胺+脱氧链霉胺+加洛糖胺,绛红糖胺,紫素胺,2-脱氧链霉胺,加洛糖胺,N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺,庆大霉素C复合物庆大霉素C1R=HR1、R2=CH3庆大霉素C2R=R2=HR1=CH3庆大霉素C1aR、R1、R2=H庆大霉素C2aR=CH3R1=R2=H庆大霉素C2bR=R1=HR2=CH3,一、结构与性质,1.性状白色或类白色粉末,2.水解性硫酸链霉素在过酸或过碱条件下易水解失效庆大霉素性质稳定,3.氧化还原性,二、鉴别,1.茚三酮反应羟基胺结构,2.N-甲基葡萄糖胺反应,3.麦芽酚反应,链霉素特征反应,8-羟基喹啉,4.坂口反应链霉胍特有反应,-萘酚,H+,5.硫酸盐鉴别,6.紫外分光光度法,7.色谱法,三、特殊杂质检查,（一）链霉素杂质,链霉素B（甘露糖链霉素）,1.来源反应中间体2.方法TLC中的对照品法（BP）,发酵菌种不同工艺差别,规定控制各组分的相对百分含量,（二）庆大霉素C组分的测定,四、含量测定,微生物检定法各国药典主要采用,HPLC法常用于体内药分,第三节四环素类抗生素,四环素（TC）tetracycline,土霉素(OTC)oxytetracycline,多西环素(DOXC)doxycycline,脱氧土霉素,一、结构与性质,（一）两性,1.与酸、碱均能成盐,2.强酸或强碱中溶解度,（三）UV和荧光性质,（四）与金属离子络合,pH37.5荧光,（二）旋光性,（五）不稳定性,1.差向异构化,淡黄黑,蓝色荧光,差向四环素,（土霉素、多西环素不易差向异构化）,2.降解反应,（1）酸性下降解,max=445nm,max=435nm,橙黄色,脱水金霉素,脱水四环素,四环素金霉素,2,pH,（2）碱性下降解,二、鉴别试验,（一）浓H2SO4反应,（二）FeCl3反应,（三）氯化物反应（四）比旋度美他环素除外（五）紫外吸收（六）荧光（七）薄层色谱,三、特殊杂质检查,4-差向四环素（ETC）脱水四环素（ATC）差向脱水四环素（EATC）盐酸金霉素（CTC）,HPLC法（2005版）,（一）盐酸四环素中有关物质检查,（二）吸收度,lmax=490nmA0.20,盐酸土霉素,杂质吸收度,取供试品配成每毫升10mg/ml的溶液至4cm的